DB21T1730-2009北蟲草菌種生產(chǎn)技術規(guī)程.doc

GB/T 遼寧省質量技術監(jiān)督局 發(fā)布2009-08-01實施2009-07-01發(fā)布北蟲草菌種生產(chǎn)技術規(guī)程DB21/T 17302009遼寧省地方標準DB21 DB21DB211DB21/T 17302009目 次前言II1 范圍12 規(guī)范性引用文件13 定義14 制作要求15 標志46 貯存4II前 言本標準由葫蘆島市質量技術監(jiān)督局提出并歸口；本標準起草單位：中國農(nóng)函大食用菌生態(tài)培訓科研示范基地、沈陽旭源生物科技有限公司、葫蘆島農(nóng)函大玄宇食用菌野馴繁育有限公司、沈陽農(nóng)業(yè)大學食品學院、遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術學院；本標準主要起草人：馬世宇、董亞賢、趙春燕、李鴻相、林文飛、王振龍、牛長滿、李春艷、劉艷梅、王宏偉。北蟲草菌種生產(chǎn)技術規(guī)程1 范圍本標準規(guī)定了北蟲草菌種定義，制作要求，質量要求，標志及貯存要求。本標準適用于北蟲草菌種生產(chǎn)。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T191-2008 外包裝儲運圖示標志GB/T6388-1986 運輸包裝收發(fā)貨標志NY/T528-2002 食用菌菌種生產(chǎn)技術規(guī)程食用菌菌種管理辦法（中華人民共和國農(nóng)業(yè)部第62號令發(fā)布3 定義本標準采用下列術語和定義。3.1北蟲草菌種北蟲草生物學分類地位屬子囊菌綱、肉座菌目、麥角菌科、蟲草屬、蛹蟲草（Cordyceps militaris ）。它是以中國北方野生蛹蟲草為樣本，采用組織或孢子分離法，經(jīng)分離、純化、馴化，選育獲得的具有一致性、穩(wěn)定性、結實性的真菌菌種（Type Culture），經(jīng)人工培養(yǎng)進一步擴大繁殖以及用于栽培生產(chǎn)的純菌絲培養(yǎng)物，包括固體母種和液體生產(chǎn)種。3.2 固體母種 北蟲草菌種的純菌絲固體培養(yǎng)物及其繼代固體培養(yǎng)物，以玻璃試管為培養(yǎng)容器和使用單位，又稱一級菌種、試管菌種。3.3 液體生產(chǎn)種 由固體母種接種于液體培養(yǎng)基擴繁而來的純菌絲液體培養(yǎng)物，培養(yǎng)容器為玻璃瓶或發(fā)酵罐，只用于生產(chǎn)不能用于菌種擴繁。4 制作要求 4.1 技術人員具有生產(chǎn)北蟲草菌種的專業(yè)技術人員。4.2 環(huán)境條件4.2.1 環(huán)境衛(wèi)生場地要求遠離禽畜設施、垃圾（糞便）場、無污水和其它污染源，通風、透光，地面及四周無灰塵、無飛蟲、無螨類、無老鼠。4.2.2 設置和布局按NY/T528中的 4.3規(guī)定執(zhí)行。4.2.3 設備設施按NY/T528中的4.4規(guī)定執(zhí)行。4.3 菌種生產(chǎn)工藝流程4.3.1 流程順序培養(yǎng)基配制分裝滅菌冷卻接種培養(yǎng)檢查成品4.3.2 培養(yǎng)原料用馬玲薯、玉米粉、蠶蛹粉、大豆粉、豆粕粉、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏（粉）、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素B1等為原料，經(jīng)配制后做為北蟲草的營養(yǎng)基質。其中，玉米粉、蠶蛹粉、大豆粉、豆粕粉為市售產(chǎn)品，要求無結塊無變質；馬玲薯出芽變綠的不能使用；蛋白胨、酵母膏（粉）為生化試劑；葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂為化學純以上級試劑；瓊脂、維生素B1為食品級以上產(chǎn)品；水為自來水等可飲用水。4.3.3 培養(yǎng)容器4.3.3.1 固體母種生產(chǎn)容器使用玻璃試管和膠塞，試管規(guī)格為18180mm或20200mm，試管塞一般采用膠塞，保存時間短直接用于液體生產(chǎn)種的可以使用棉塞，不能使用脫脂棉做試管塞。4.3.3.2 液體生產(chǎn)種生產(chǎn)容器使用250ml、500ml玻璃輸液瓶，用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封口。4.3.4 培養(yǎng)基配制與分裝4.3.4.1 固體母種培養(yǎng)基配制與分裝4.3.4.1.1 固體母種培養(yǎng)基配方a）馬鈴薯200.0g，葡萄糖20.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，維生素B1 10.0mg，瓊脂20.0g，水1000ml，pH值6.07.0。b）葡萄糖100.0g，蛋白胨10.0g，酵母膏1.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，瓊脂20.0g，水1000ml，pH值6.07.0。 4.3.4.1.2 固體母種培養(yǎng)基配制與分裝按配方稱好各種原料，將馬鈴薯洗凈去皮去芽眼（出芽、變綠禁用），稱取200g，切成35mm薄片，加水1000ml，文火煮沸2030分鐘，用4層紗布過濾，濾液放回鍋內(nèi)，加入瓊脂充分溶化，再依次加入其它成分，攪拌溶解后，加開水補足至1000ml，趁熱分裝試管，裝量為試管的1/41/5，塞入膠塞。4.3.4.2 液體生產(chǎn)種培養(yǎng)基配制與分裝4.3.4.2.1 液體生產(chǎn)種培育基配方 a）馬鈴薯200.0g，蠶蛹粉10.0g，葡萄糖20.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，維生素B1 50水1000ml，pH值6.07.0。b）葡萄糖100.0g，蛋白胨10.0g，酵母膏1.0g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，瓊脂20.0g，水 1000ml，pH值6.07.0。 4.3.4.2.2 液體生產(chǎn)種培養(yǎng)基配制與分裝按配方稱好各種原料，將馬鈴薯去皮去芽眼，稱取200g，切成35mm厚的薄片，與蠶蛹粉（或其它配方中的玉米粉、大豆粉、豆粕粉等農(nóng)產(chǎn)品原料）一起放入鍋中，文火煮沸2030分鐘，用8層紗布過濾，濾液用開水補足至1000毫升，再依次加入其它成分，攪拌溶解，然后裝入玻璃輸液瓶中，液體裝量不宜超過容器總容積的2/5，瓶口用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封口。4.3.5 培養(yǎng)基滅菌與冷卻4.3.5.1 固體母種培養(yǎng)基滅菌與冷卻 按NY/T528中的4.7.5規(guī)定執(zhí)行。4.3.5.2 液體生產(chǎn)種培養(yǎng)基滅菌與冷卻采用常壓滅菌或高壓蒸汽滅菌，滅菌方法和規(guī)程可參照固體母種培養(yǎng)基滅菌。要點為：高壓蒸汽滅菌0.11MPa 保持30分鐘；常壓滅菌100保持68小時；高壓蒸汽滅菌一定要等滅菌器的壓力降為零時，才可以開啟滅菌器，取出菌種瓶；菌種瓶冷卻至室溫后方可接種。4.3.5.3 培養(yǎng)基滅菌效果的檢查按NY/T528中的4.7.6規(guī)定執(zhí)行。4.3.6 接種4.3.6.1 固體母種接種接種方法按NY/T528中的4.7.8規(guī)定執(zhí)行。4.3.6.2 液體生產(chǎn)種接種在無菌操作條件下，用接種鉤從母種斜面中切取1cm菌面(可稍帶培養(yǎng)基)放入液體菌種培養(yǎng)瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳膠圈封扎瓶口，每支母種可接種1015瓶液體生產(chǎn)種。4.3.7 菌種培養(yǎng)4.3.7.1 培養(yǎng)條件4.3.7.1.1 菌種培養(yǎng)溫度1823。4.3.7.1.2 菌種培養(yǎng)濕度6065%。4.3.7.1.3 菌種培養(yǎng)光線為黑暗條件。4.3.7.1.4 菌種培養(yǎng)空氣為環(huán)境清新無異味。4.3.7.2 培養(yǎng)時間 4.3.7.2.1 固體母種710天可長滿試管。4.3.7.2.2 液體生產(chǎn)種的生產(chǎn)，主要采用搖床振蕩培養(yǎng)，震蕩頻率依據(jù)搖床性能和菌種性質等進行適當調(diào)節(jié)，要求培養(yǎng)的菌種菌球密度大、菌絲掛瓶壁少、培養(yǎng)周期短以及接種后定殖能力強、發(fā)菌快。一般往復式搖床6070次/分鐘，旋轉式搖床100120轉/分鐘，振蕩培養(yǎng)時間為46天；沒有設備條件的可采用靜止培養(yǎng)，靜止培養(yǎng)時間為710天。4.3.8 培養(yǎng)期的檢查4.3.8.1 檢查次數(shù)培養(yǎng)期間定期檢查，一般每天檢查2次，及時淘汰染菌或劣勢菌種。4.3.8.2 質量要求4.3.8.2.1 固體母種質量要求固體母種質量要求應符合表的規(guī)定。表 固體母種質量要求 項目要求菌絲菌絲長滿基質斜面，菌苔粉末狀或短絨毛狀，橘黃色或橘紅色，厚薄均勻一致，無明顯白色絨毛狀氣生菌絲；無雜菌；菌苔底部呈黃色原基母種試管在24的條件下長時間保存可出現(xiàn)原基轉代次數(shù)一代母種轉代不超過3次鏡檢菌絲絲狀，均勻一致，無雜菌4.3.8.2.2 液體生產(chǎn)種質量要求液體生產(chǎn)種質量要求應符合表的規(guī)定。表 液體生產(chǎn)種質量要求 項目要求菌絲菌絲絮狀或小球狀，均勻一致，掛瓶壁的菌絲短絨毛狀，淡黃色雜 質無任何雜質培 養(yǎng) 液菌液澄清透明，菌球在菌液中分散均勻、無上浮、無沉淀氣味有北蟲