石墨爐原子吸收光譜測定人血中鉛含量.ppt

石墨爐原子吸收光譜 測定 人血中鉛的含量,馬 璐,實驗目的 實驗原理及意義 實驗步驟及方法 注意事項 實驗報告,實驗目的,1. 了解石墨爐原子吸收法檢測血鉛的基本原理。 2. 理解血鉛的測定在職業(yè)鉛中毒診斷和職業(yè)性健康檢查中的意義。 3.了解不同基體改進劑對石墨爐原子吸收法測定血鉛的影響。,實驗原理,職業(yè)性慢性鉛中毒： 由于接觸鉛煙或鉛塵所致的以神經、消化、 造血系統(tǒng)障礙為主的全身性疾病,鉛的代謝及分布,鉛塵、鉛煙,肺,血液 （紅細胞、血漿）,骨骼,肝、腎、腦,尿液,鉛中毒,線粒體 卟啉代謝紊亂,-氨基-r-酮戊酸 （ALA),血原卟啉（FEP),血鋅原卟啉(ZPP),血紅素合成抑制,神經系統(tǒng)：周圍神經病 中毒性腦病 消化系統(tǒng)： 腹絞痛 血液系統(tǒng)： 貧血 點彩紅細胞 血管、腎臟：牙齦鉛線 Fanconi,中毒診斷 血鉛2.9mol/L (0.6mg/L、600g/L) 輕、中、重,鉛中毒實驗室診斷,結合職業(yè)接觸史、作業(yè)環(huán)境調查、臨床表現(xiàn)作出診斷（GBZ37-2002),觀察對象 血鉛1.9mol/L (0.4mg/L、400g/L,),石墨爐原子吸收法-血鉛,基本原理： 血液經硝酸處理后進入石墨爐原子化器中進行原子 化，被測元素（Pb）形成基態(tài)原子蒸氣； 鉛空心陰極燈輻射出的特征譜線283.3 nm通被基態(tài)原子態(tài)吸收，生成相應吸光度值； 在一定實驗條件下，其吸光度與試樣中的鉛濃度成正比，據(jù)此進行血液中鉛的定量分析。,石墨爐原子吸收法-血鉛,基本步驟：,干燥,灰化,原子化 （收集信號）,氬氣 （保護、清除 基體蒸汽及雜質）,調整氣流量、溫度、持續(xù)時間對試驗條件進行優(yōu)化,石墨爐原子吸收法-血鉛,基體改進劑 作用：保護被測物質 消除基體干擾 血鉛：Triton X-100 、磷酸二氫銨,意義及應用,血液中95%的鉛在紅細胞中，其濃度與機體鉛吸收、分布、排出處于平衡狀態(tài) 當生活或生產環(huán)境不變，鉛暴露基本穩(wěn)定的情況下，血鉛不僅反映了近期的鉛接觸水平，也一定程度上作為內暴露水平反映體內的鉛負荷 采樣方便、不易污染、靈敏度高，血鉛常被用于反映鉛對人體危害的指標,實驗器材與試劑,儀器：原子吸收分光光度計（有石墨爐原子化 器和背景校正裝置）； 鉛空心陰極燈； 器材：15ml、1.5 ml 離心管；肝素鈉抗凝真空采血管 燒杯、100ml容量瓶、移液管、膠頭滴管、移 液槍（1ml及200ul)及槍頭 試劑：血樣；鉛標準儲備液（1.00 mg/ml）， 硝酸（G.R）；Triton X-100（G.R）； 磷酸二氫銨溶液（A.R）；高純水。,實驗方法與步驟,（一）溶液配制 鉛標準應用液、基體改進劑、血鉛標準液,實驗方法與步驟,鉛標準應用液配制（已配好） 1.00 mg/ml的鉛標準儲備液用1%的硝酸稀釋為： 1 mg/L Pb標準應用液I， 0.1 mg/L的Pb標準應用液II。,實驗方法與步驟,基體改進劑 基體改進劑1 100 ml溶液含0.1% Triton X-100（WS/T 20-1996），0.1% 硝酸 基體改進劑2 100 ml溶液含0.2%磷酸二氫銨，0.3% Triton X-100，0.1% 硝酸,實驗方法與步驟,血鉛標準液配制（基體改進劑-血液-Pb標準液） 分別用基體改進劑1、基體改進劑2配置兩組血鉛的標準溶液， 濃度分別為0，10，,20，40，80，g/L,實驗方法與步驟,（二）被測樣品制備 1.采用肝素鈉抗凝真空采血管采集被測血樣，混勻后保存于4C冰箱； 2.吸取100 l血樣分別加兩種基體改進劑，稀釋至1ml，充分混勻，配成血液檢測樣，分別儲存于1.5 ml 離心管中備用。,實驗方法與步驟,（三）樣品檢測 1.選定被檢測元素，設置檢測條件及參數(shù)； 2.對血鉛標準液進行測定，得出吸光度值并擬合標準曲線； 3.對樣品進行檢測，將吸光度值與標準曲線進行比對，得出血液檢測液濃度。,實驗方法與步驟,信號收集,讀數(shù),樣品檢測,注意： 樣品檢測前，清洗清潔池及進樣管； 進樣程序開始前，先對石墨管進行空燒，排除上次檢測的余樣，減少干擾； 上樣前需將樣品充分混勻，減少測量誤差,實驗方法與步驟,結果分析 1.繪制血鉛的標準曲線，得出標準方程式 2.樣品的吸光度值減去試劑空白的吸光度值，由標準曲線算得的濃度即為稀釋血樣中的鉛濃度c0（g/L）。 3.血樣中鉛的濃度：c= c0 * s,注意事項,所有實驗使用的器皿都用20%硝酸浸泡48h，然后依次用去離子水和高純水沖洗，晾干備用； 血樣采集、運輸、保存及配置過程中也應避免鉛污染； 操作時，避免實驗器皿觸碰到皮膚及桌面，以防止外源的鉛污染，影響實驗結果； 正確使用移液槍，精準加樣； 如果血樣含鉛量超出標準曲線的測定范圍，可增加稀釋倍數(shù)。,實驗分組及分工,全班分兩個組（12人/組） 組1：基體改進劑1 基體改進劑1作為溶劑的血鉛標準液及被測血樣的稀釋 組2：基體改進劑2 基體改進劑2作為溶劑的血鉛標準液及被測血樣的稀釋 注：每組2份被測血樣，分別來自不同的受檢個體 實驗結果全班共享，兩組對實驗結果進行整合及比較，完成結果討 論及分析,實驗報告,實驗目的 實驗方法：簡單敘述操作步驟 實驗結果 1.繪制標準曲線，計算樣品含鉛濃度； 2.根據(jù)國家職業(yè)衛(wèi)生標準對被測者血鉛濃度進行初步評價及診斷；若要確診，還需哪些資料的補充？ 3.討論：加入基體改進劑對血鉛的測定有什么影響？,實驗試劑的配制,基體改進劑 基體改進劑1 100 ml溶液含0.1% Triton X-100（WS/T 20-1996），0.1% 硝酸 基體改進劑2