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離體蛙心灌流及某些離子、藥物 對(duì)離體蛙心活動(dòng)的影響,(perfusion of frogs heart),主要內(nèi)容,相關(guān)理論知識(shí) 實(shí)驗(yàn)部分 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)對(duì)象 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品 實(shí)驗(yàn)步驟 結(jié)果分析與討論,相關(guān)理論知識(shí),正常的蛙心能按靜脈竇的節(jié)律性自動(dòng)產(chǎn)生興奮,心臟的自動(dòng)節(jié)律性活動(dòng),需要有一個(gè)合適的理化環(huán)境。 蟾蜍心臟離體后,用任氏液灌流,在一定時(shí)間內(nèi)仍能保持節(jié)律性興奮和收縮活動(dòng)。由于心臟的正?;顒?dòng)還有賴于內(nèi)環(huán)境因素的相對(duì)穩(wěn)定,改變灌流液的成分可引起心臟活動(dòng)的改變。,相關(guān)理論知識(shí),心肌細(xì)胞的生理特性表現(xiàn)為:自動(dòng)節(jié)律性、興奮 性、傳導(dǎo)性和收縮性。 心肌細(xì)胞外離子濃度的變化和因體內(nèi)生物活性物 質(zhì)(如激素)引起的細(xì)胞膜離子通透性的改變,對(duì) 心肌細(xì)胞的生物電活動(dòng)和生理特性必然會(huì)產(chǎn)生明顯 的影響。,影響心肌細(xì)胞電生理特性的原因,1.心肌的自動(dòng)節(jié)律性 (1)最大復(fù)極電位與閾電位的差距 (2)4期自動(dòng)除極速度,2.心肌的興奮性 (1)靜息電位水平:依賴于細(xì)胞外K+濃度 (2)Na+通道的性狀,相關(guān)理論知識(shí),3.心肌的傳導(dǎo)性 主要取決于動(dòng)作電位0期除極速度和幅度,4.心肌的收縮性 依賴于細(xì)胞外鈣離子濃度,相關(guān)理論知識(shí),影響心肌細(xì)胞電生理特性的原因,相關(guān)理論知識(shí),離子對(duì)心臟活動(dòng)的影響,鉀離子 K+參與心肌細(xì)胞的復(fù)極化和自律細(xì)胞的4期自動(dòng)去極化過(guò)程,其改變不僅取決于細(xì)胞內(nèi)外K+濃度梯度,還與細(xì)胞膜對(duì)K+通透性有關(guān),因此其影響是多方面的,相關(guān)理論知識(shí),離子對(duì)心臟活動(dòng)的影響 鈣離子 Ca2+對(duì)Na+內(nèi)流存在競(jìng)爭(zhēng)抑制作用,稱膜屏障作 用,對(duì)靜息電位無(wú)影響。 Ca2+o ,可使心肌細(xì) 胞的興奮性降低,傳導(dǎo)減慢,收縮力增強(qiáng)。,相關(guān)理論知識(shí),迷走神經(jīng)和乙酰膽堿 迷走神經(jīng)興奮時(shí),節(jié)后纖維釋放Ach,激動(dòng)心肌 細(xì)胞膜上M型膽堿受體,產(chǎn)生負(fù)性變力、負(fù)性傳導(dǎo)、 負(fù)性變時(shí)等效應(yīng)。 心交感神經(jīng)與去甲腎上腺素 心交感神經(jīng)節(jié)后纖維釋放的遞質(zhì)是去甲腎上 腺素,激動(dòng)心肌細(xì)胞膜上的受體,產(chǎn)生正性變 力、正性傳導(dǎo)、正性變時(shí)等效應(yīng)。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.本實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)習(xí)離體蛙心的灌流方法。 2.用離體蛙心灌流的方法觀察:,實(shí)驗(yàn)對(duì)象 蟾蜍,實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備 RM6240生物采集系統(tǒng) 張力換能器 蛙類手術(shù)器械 蛙心插管 試管夾 縫合線 蛙心夾 鐵支架 滴管,實(shí)驗(yàn)藥品 任氏液 lKCl 3CaC12 l:10,000 E l:10,000 ACh 3乳酸 2.5NaHCO3,實(shí)驗(yàn)步驟,一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備 1.破壞腦和脊髓 2.暴露心臟,一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備 1.觀察心臟的解剖結(jié)構(gòu),實(shí)驗(yàn)步驟,(腹面),(背面),實(shí)驗(yàn)步驟 一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備,1.蛙心插管 1.1 在主A干下穿一線打一松結(jié);在左主A下再穿一線結(jié)扎。,實(shí)驗(yàn)步驟 一、離體蟾蜍心臟標(biāo)本制備,1.蛙心插管 1.2 在主動(dòng)脈根部剪一 斜口,將插管插入動(dòng)脈 圓錐, 在心室收縮時(shí) 將插管插入心室,結(jié)扎 固定。,1.用試管夾將蛙心管固定 在鐵支架上 2.把張力換能器固定鐵支 架支臺(tái)上,在心室舒張期 將與換能器相連的蛙心夾 夾在心尖上。,實(shí)驗(yàn)步驟 二、連接儀器和裝置,注意事項(xiàng),1.蛙心插管內(nèi)液面勿過(guò)高或過(guò)低,每次換液時(shí),必須用任氏液沖洗3次。 2.每次加藥,心搏曲線出現(xiàn)變化后立即將插管內(nèi)液體吸出。 3.隨時(shí)滴加任氏液于心臟表面使之保持濕潤(rùn)。 4.換能器頭端應(yīng)向下傾斜以免液體進(jìn)人換能器。 5.各種試劑的滴管不要混淆,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。,觀察項(xiàng)目,一、描記正常心搏曲線,曲線幅度 收縮的程度 曲線疏密 心率 曲線基線 舒張的程度,二、觀察離子、藥物和酸堿的影響 1)更換任氏液為3%氯化鈣溶液12滴,記錄心率和收縮幅度,沖洗(下同) 2)滴加12滴1%氯化鉀溶液 3)滴加12滴1:10000去甲腎上腺素溶液 4)滴加12滴1:10000腎上腺素溶液 5)滴加12滴1:10000 乙酰膽堿溶液 6)滴加12滴 2.5%碳酸氫鈉溶液 7)滴加12滴3%乳酸溶液,觀察項(xiàng)目,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,結(jié)果分析與討論,1.任氏液:正常對(duì)照 2. 3%CaCl2灌流:,結(jié)果分析與討論,3. 1%KCl灌流:,結(jié)果分析與討論,4. 1:10000 E灌流,4期 If 、I CaT通道,4期自動(dòng)去極速度,自律性,心率,與心肌1受體結(jié)合,Ca2+內(nèi)流 肌漿網(wǎng)釋放Ca2+,興奮-收縮耦聯(lián),收縮力,cAMP,結(jié)果分析與討論,5. 1:10000 Ach灌流,與心肌M受體結(jié)合,K+外流, Ca2+內(nèi)流,E-C耦聯(lián),收縮力,最大復(fù)極電位 4期K+外流,自律性,心率,Ca2+i,碳酸氫鈉 乳酸,結(jié)果分析與討論,6. 2.5NaHCO3 灌流 中和H+,Ca2+與肌鈣

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