實驗一 實驗動物的抓取與固定及性別鑒定.ppt

實驗一 實驗動物的抓取與固定及性別鑒定,一、 實驗?zāi)康暮鸵?通過本實驗學(xué)習(xí)和掌握實驗動物的抓取固定方法和性別年齡判定方法。 二、 實驗材料和用具 實驗動物（小鼠）、鑷子、酒精棉球、電子天平等,三、實驗內(nèi)容 （一）實驗動物的抓取與固定方法 實驗人員在進(jìn)行動物實驗時，必須正確抓取動物，以免被動物抓咬傷，或造成動物的傷亡和應(yīng)激反應(yīng)。 抓取固定動物必須對各種動物的一般習(xí)性有所了解，抓取動物應(yīng)大膽、準(zhǔn)確、迅速、熟練、不可恐嚇動物。,1 小鼠的抓取與固定 （1）抓取方法 小鼠性情較溫順，一般不會主動咬人，但抓取不當(dāng)也易被其咬傷。 習(xí)慣用右手者，首先用右手從籠盒內(nèi)將小鼠尾中部或基部抓?。ú豢勺ノ布猓⑻崞鸹蚍旁谧笫稚?。,（2）固定方法 徒手固定：右手抓取小鼠尾，將小鼠放在籠蓋（或表面粗糙的物體）上，輕輕向后拉鼠尾；然后在小鼠向前掙脫時，用左手拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚，無名指、小指和手掌心夾住背部皮膚和尾部，并調(diào)整好動物在手中的姿勢。 此法常用于灌胃以及肌肉、腹腔和皮下注射等實驗。,固定板固定：小鼠麻醉后置小鼠固定板上，取仰臥位，用膠布纏粘四肢，再用針透過膠布扎在板上，從而將小鼠固定在小鼠固定板上。 此法常用作心臟采血、解剖、外科手術(shù)等實驗。,固定架固定：讓小鼠直接鉆入固定架里，封好固定架的封口，露出尾巴。 此裝置特別適用于小鼠尾靜脈注射等。,小鼠固定盒固定,簡易固定：進(jìn)行尾靜脈注射或抽血時，如果沒有這些固定裝置，也可采用一種簡易的方法。即倒放一個燒杯或其它容器，把小鼠扣在里面，只露出尾巴，然后用酒精擦拭，暴露血管，注射或采樣。 這種燒杯或容器的大小和重量是適當(dāng)，既能壓住尾巴不讓其活動，同時起到壓迫血管的作用。,2 大鼠的抓取與固定 （1）抓取方法 大鼠不像小鼠那樣性情溫順，大鼠牙齒很尖銳，在抓取時要小心被咬，操作者最好戴上防護(hù)手套。 張開左手虎口，迅速將拇、食指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身體中段，并將其保持仰臥位，然后調(diào)整左手拇指位置，緊抵在下頜骨上（不可過緊，否則造成窒息），即可進(jìn)行實驗操作。,另一種方法：由助手用左手將動物按住抓起，將食指放在頸背部，拇指及其余三指放在肋部，食指和中指夾住左前肢，分開兩前肢舉起來，右手按住后肢。 注意：抓取大鼠時，不能捉其尾尖，因為尾尖皮膚易于拉脫，也不能讓大鼠懸在空中時間過長，否則會激怒大鼠翻轉(zhuǎn)咬人。,（2）固定方法 徒手固定：用拇指、食指捏住大鼠耳朵頸部皮膚，余下三指緊捏住背部皮膚，置于掌心，調(diào)整好大鼠在手中的姿勢即可。 此種固定方法常用做體重小的大鼠灌胃、腹腔注射、肌肉注射和皮下注射的實驗操作。,固定板固定：用于手術(shù)的大鼠用固定板固定的方法與小鼠相同，但應(yīng)選擇更大些的固定板。 為防治大鼠蘇醒時咬傷人或便于頸、胸部等實驗操作，應(yīng)用棉線牽引大鼠兩上門齒，固定頭部；也可用不同長短的圓柱形玻璃管將大鼠套住，用擰彎的回形針鉤在門齒上以固定。 此法多用于心臟采血、解剖、外科手術(shù)等實驗。,固定架固定：將大鼠固定在固定架內(nèi)。 此裝置特別適用于大鼠尾靜脈注射等。,3 豚鼠的抓取與固定法 （1）抓取方法 豚鼠性情溫和、膽小，一般不傷人，抓取時不能用大力抓其腰腹，容易造成肝破裂而引起死亡。,依據(jù)不同的生理階段選擇抓取方法 抓取幼年的豚鼠時，可用兩手捧起來。 抓取較大的豚鼠時，先用手掌迅速扣住豚鼠背部，抓住其肩胛上方，以拇指、食指捏住頸部，其余手指握持住軀干，即可輕輕提起。 對懷孕或體重較大的豚鼠，應(yīng)以左手托其臀部。,豚鼠的抓取方法,（2）固定方法 徒手固定：由助手用左手的食指和中指放在豚鼠頸背部兩側(cè)，拇指和無名指放在肋部，分別用手指挾住左右前肢，抓起來；然后反轉(zhuǎn)左手，用右手的拇指和食指挾住右后肢，用中指和無名指挾住左后肢，使鼠體伸成一直線；也可坐下來用大腿夾住豚鼠的后肢，右手進(jìn)行實驗操作。,固定板固定：用固定板固定豚鼠，和大鼠、小鼠基本相同，用木制或泡沫固定板和線繩固定。,4 家兔的抓取與固定法 （1）抓取方法 抓取時，輕輕打開兔籠門，不要使兔受驚，然后用右手伸入籠內(nèi)，從兔頭前部把兩耳輕輕壓于手掌內(nèi)，兔便臥伏不動，此時將頸背部被毛和皮膚一起抓住提起，并用左手托住兔腹部，使其體重主要落在這只手上。,兔一般不咬人，但其爪銳利，掙扎時極易抓傷操作人員，因此，必須防備其四肢的活動。 特別注意不能只提兔雙耳或雙后腿，也不能僅抓腰或提背部皮毛，以避免造成耳、腎、腰椎的損傷或皮下出血。,（2）固定方法 徒手固定：由助手用一只手抓住兔頸背部皮膚，另一只手抓住兔的兩后肢，牢牢地固定在實驗臺上。此法適用于腹腔、肌肉等注射。 另一種方法是由助手坐在椅子上用一只手抓住兔頸背部皮膚，同時捏住兩個耳朵，不讓其頭部活動，大腿夾住兔的下半身，用另一只手抓住兩前肢將兔固定，此法適用經(jīng)口給藥。,盒式固定：未麻醉的兔可采用盒式固定。這種固定方法常用作采血、注射、觀察兔耳血管變化、兔腦內(nèi)接種等實驗操作。,臺式固定：將家兔麻醉后置于固定臺上，四肢用粗棉繩活結(jié)綁住，拉直四肢，將繩綁在兔固定臺四周的固定木塊上，頭以固定夾固定或用一根粗棉繩牽引兔門齒系在固定臺鐵柱上。 此法常用于兔靜脈采血、注射、測量血壓、呼吸等手術(shù)操作。,5 犬的抓取與固定法 （1）抓取方法 犬的抓取方法較多。 對未經(jīng)馴服和調(diào)教的圈養(yǎng)犬抓取時，用特制的長柄犬鉗夾住犬的頸部，或用長柄鐵勾勾住犬頸部項圈，由助手將其嘴縛住。,對經(jīng)馴服的犬，可從側(cè)面靠近，輕輕撫摸其頸背部皮毛，用手將其抱住，由另一人用布帶縛其嘴；或用皮革、金屬絲或棉麻制成的口網(wǎng)，套在犬口部，并將其附帶結(jié)于而后頸部，防治脫落。,扎犬嘴的方法 用長1m左右的繃帶兜住犬的下頜，繞到上頜打一個結(jié)，再繞回下頜打第二個結(jié)，然后將布帶引至頭后頸項部打第三個結(jié)，并多系一個活結(jié)。,（2）固定方法 慢性試驗中犬的固定方法：將已馴服的犬拉上固定架上，將犬頭和四肢綁住，再用粗棉帶吊起犬的胸部和下腹部，固定在架的橫梁上，即可進(jìn)行體檢、灌胃、取血、注射等試驗操作。,急性試驗中犬的固定方法：將已麻醉的犬嘴上的繃帶解繃，把犬放在實驗臺上，先固定頭部后固定四肢。,頭部固定：用特制的犬頭固定器。犬頭固定器為一圓鐵圈，圈的中央橫有兩根鐵條，上面的一根略彎曲，與棒螺絲相連，下面一根平直。固定時先將犬舌拉出，將犬嘴伸入鐵圈，再將平直鐵條橫貫在上、下頜間，然后向下旋轉(zhuǎn)棒螺絲，使彎形鐵條壓在犬的鼻梁上，將鐵柄固定在試驗臺的鐵柱上。,四肢固定：先用粗棉帶的一端縛扎于腕關(guān)節(jié)以上部位，如采用仰臥，可將兩后肢左右分開，分別固定于手術(shù)臺兩側(cè)的木鉤上。將左右前肢的兩條棉帶從犬背后交叉經(jīng)過，分別固定于兩側(cè)木鉤上?？`扎四肢的結(jié)扣方法是在活扣外再打一個活結(jié)，便于實驗結(jié)束后的松解。 固定的姿勢一般采用仰臥位和腹臥位，仰臥位常用于頸、胸、腹、股等部位的實驗，腹臥位常用于背、腦脊髓的實驗。,6 猴的抓取與固定 （1）抓取方法 從籠內(nèi)抓取猴時，飼養(yǎng)人員應(yīng)以右手持短柄網(wǎng)罩，左臂緊靠門側(cè)，以防籠門敞開時猴逃出籠外。右手將網(wǎng)罩塞入籠內(nèi)，由上而下罩捕。在猴被罩到后，應(yīng)立即將網(wǎng)罩翻轉(zhuǎn)取出籠外，罩猴在地，由罩外抓住猴的頸部，輕掀網(wǎng)罩，再提取猴的手臂反背握住，此時猴便無法脫逃。,（2）固定方法 徒手固定：將猴兩前肢反背在其背后，操作者用一只手握著，用另一只手將猴兩后肢捉住，即可將猴子固定。,固定架固定：一般是采用“猴限制椅”或者稱“猴固定架”進(jìn)行固定。,（二）實驗動物性別的鑒定,1 哺乳類 一般情況下，哺乳類動物性別依據(jù)動物的肛門與外生殖器（陰莖或陰道）之間的距離加以區(qū)分。 雄性要比雌性的距離更長。,（1）嚙齒目 觀察生殖器與肛門之間的距離，雌性較雄性近具溝； 觀察生殖突起，雄性較大、較圓，雌性較小具裂縫； 仰臥觀察乳頭，雄性不明顯，雌性明顯。,（2）兔形目 初生仔兔及開眼仔兔，觀察陰部孔洞形狀和距離肛門遠(yuǎn)近 孔洞扁形、大小與肛門相同，距肛門近者為雌性； 孔洞圓形而略小于肛門，距肛門遠(yuǎn)者為雄性 。,對幼兔可用右手抓住兔的頸背部皮膚，左手以食、中指夾住尾巴，大拇指輕輕向上推開生殖器，局部呈“O”形，下為圓柱體者是公兔； 局部成“V”形，下端裂縫延至肛門者為母兔。 對成年兔可看有無陰囊進(jìn)行區(qū)分公母。,（3）食肉目 新生食肉目動物可用肛門一生殖器距離加以區(qū)分。 成年公犬睪丸下降于陰囊中，懸于會陰部下方，陰莖由恥骨下緣朝腹部方向延伸，至后腹壁開口。 母犬的尿生殖道開口于肛門下方，較易觀察識別。,（4）靈長目 區(qū)分靈長類動物雌雄較為困難。 首先應(yīng)檢查其尿道開口，許多雌性動物有較大的陰蒂，其腹側(cè)形成溝狀通向尿道口，而雄性動物的尿道開口在陰莖頭上。 觸摸陰囊內(nèi)是否有睪丸是確定其雌雄的最可靠方法。,2 鳥類 禽鳥類在第二性征（肉冠、羽毛、發(fā)聲）出現(xiàn)前，區(qū)分性別極為困難，但可通過孵出時24小時內(nèi)進(jìn)行外翻泄殖腔鑒別。 雄性中可觀察到微小而能勃起的孔突上有輸精管開口，但此法不僅要有豐富的經(jīng)驗，而且準(zhǔn)確性常難以保證。 對于有羽色伴性遺傳的家禽可通過其孵出時的羽色加以區(qū)分。,3 爬行動物 （1）龜類 排泄孔位置及形狀可分辨出雌雄：公龜?shù)奈恢媒咏捕?，孔形長形。母龜?shù)奈恢媒咏辜?，孔形圓形。 尾部的粗細(xì)大小，公龜尾較粗大，母龜較細(xì)短。 腹甲是否凹陷，公龜有明顯的凹陷， 母龜平坦。,（2）蜥蜴類 色斑、股孔、半陰莖,（3）蛇 公蛇的尾巴較細(xì)長，母蛇較粗短。 輕壓尾巴基部，公蛇的半生殖器會跑出來。,4 兩棲動物,5 魚類 許多魚從外形上不易區(qū)分其雌雄，但可通過繁殖期的顏色不同及第二性征加以區(qū)分。 如麥穗魚平時體側(cè)呈灰黃色，到了生殖期雄性變成暗黑。 雄性馬口魚一到生殖季節(jié)，體色變?yōu)榧t藍(lán)條子相間。,魚類的第二性征是珠星（又稱追星），是一種灰白色結(jié)節(jié)狀的皮膚衍生物，用手撫摸感覺粗糙。一般在繁殖季節(jié)出現(xiàn)，雌性機(jī)體上出現(xiàn)較多且粗壯，雄魚少而小。 珠星大多分布在頭部吻端或胸鰭上。四大家魚（草魚、青魚、鰱魚、鳙魚）的珠星分布在胸鰭上。,（三）年齡的大致判斷 1 小鼠 （1）根據(jù)形態(tài)鑒定日齡 小鼠初生后不同日齡的外觀形態(tài)特征不一樣。,（2） 根據(jù)體重鑒定日齡 根據(jù)體重鑒定日齡的規(guī)律為一般的發(fā)育情況。發(fā)育的程度是固定的，但時間的長短往往與體格、營養(yǎng)而異，各個品種、品系之間也有一定的差異。 KM小鼠為例,2 大鼠 18日齡以前大鼠的形態(tài)特征與小鼠基本一致，可根據(jù)形態(tài)特征來判斷年齡。在無可靠記錄資料的情況下，可根據(jù)體重來判斷大致日齡。 普通級SD大鼠不同數(shù)日齡體重見下表,需要指出的是，同一品系大鼠的生長發(fā)育受窩產(chǎn)仔、雌鼠哺乳能力、飼料營養(yǎng)水平、管理水平以及個體差異等多種因素的制約，年齡與體重的關(guān)系不是絕對的。,3 豚鼠 一般老年豚鼠牙齒和趾爪長，被毛稀疏無光澤，眼神呆滯，行動遲緩。 年輕豚鼠牙齒短白，爪短軟，眼睛圓亮，行動敏捷，被毛有光澤，且緊貼身體。,同日齡豚鼠，雌性體重略高于雄性。與大鼠一樣，其體重受多種因素的制約。實驗對年齡要求比較嚴(yán)格時，必須由卡片記錄提供準(zhǔn)確年齡。,4 家兔 家兔的門齒和爪隨年齡增長而增長，是年齡鑒別的重要標(biāo)志。 青年兔門齒潔白，短小，排列整齊； 老年兔門齒暗黃，厚而長，排列不整齊，有時破損。,白色家兔趾小基本呈紅色，尖端呈白色。 一歲家兔紅色與白色長度相等； 一歲以下，紅多于白； 一歲以上，白多于紅。,還可根據(jù)趾爪的長度與彎曲度來區(qū)別。 青年兔趾爪較短，直平，隱在腳毛中，隨年齡的增長，趾爪露出于腳毛之外，而且爪尖鉤曲。 另外，家兔皮薄而緊，眼神明亮，行動活潑的為青年兔； 皮厚而松，眼神頹廢，行動遲緩的為老年兔。,5 犬 犬的年齡主要以牙齒的生長情況、