厭氧菌的培養(yǎng)方法.ppt

厭氧菌的培養(yǎng)方法 祁紅兵 物理方法包括遮斷空氣法 煮沸法 真空法 空氣置換法 氣體噴射法或轉(zhuǎn)管法等化學(xué)方法包括焦性沒(méi)食子酸法 鐵絲絨法 保險(xiǎn)粉法等生物學(xué)方法包括與需氧菌共生好氧法 燕麥發(fā)芽法等混合法包括厭氧罐 袋 法 厭氧手套箱法或厭氧室法 空氣置換鐵絲絨法 空氣置換鈀粒法等 1液體培養(yǎng)基的厭氧培養(yǎng)法 培養(yǎng)基煮沸 驅(qū)氣后置流水中急速冷卻添加還原劑 0 03 0 05 L 鹽酸半胱氨酸0 01 0 02 硫乙醇鈉0 5 1 葡萄糖0 1 抗壞血酸其它還原劑添加瓊脂 2固體培養(yǎng)基的厭氧培養(yǎng)法 厭氧罐法簡(jiǎn)易厭氧罐和厭氧袋法鋼絲絨法焦性沒(méi)食子酸法抽氣換氣厭氧培養(yǎng)法生物好氧厭氧培養(yǎng)法轉(zhuǎn)管技術(shù)和氣體噴射培養(yǎng)法厭氧手套箱法 又稱厭氧室法 2 1Gas pak法 原理 氣體發(fā)生袋 檸檬酸和碳酸氫鈉 H2OCO2硼氫化鈉 H2OH2觸媒 鈀粒H2O厭氧罐中的O2厭氧指示劑 11111 厭氧指示劑 亞甲基蘭指示劑盧卡斯固體厭氧指示劑布魯氏指示劑 亞甲基蘭指示劑 6 葡萄糖水溶液20 1N氫氧化鈉水溶液0 10 05 亞甲基蘭水溶液0 2厭氧無(wú)色殘存有氧氣藍(lán)色 盧卡斯固體厭氧指示劑 2 硼砂溶液5毫升9 硫乙醇酸1毫升酚紅溶液0 1 0 2毫升0 02 美蘭溶液10毫升瓊脂1 厭氧無(wú)色殘存有氧氣藍(lán)色 布魯氏指示劑 60 羥甲基氨基甲酯14 葡萄糖10 02 美藍(lán)1厭氧無(wú)色殘存有氧氣藍(lán)色 Gas Pak罐的使用操作程序 平皿培養(yǎng)基裝入平皿架中置厭氧罐內(nèi) 打開(kāi)內(nèi)蓋居中金屬網(wǎng)袋 裝入觸媒鈀粒 打開(kāi)錫箔紙袋 取出厭氧指示劑片 剪開(kāi)氣體發(fā)生袋一角 注入10毫升水 迅速緊閉罐蓋 置培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 約經(jīng)5 10分鐘后 放入?yún)捬踔甘緞┢?2 2 1簡(jiǎn)易厭氧罐 干燥器容內(nèi)徑 厘米 容器1容器2容器3容積 毫升 硼氫鈉氯化鈷0 2克檸檬酸0 6克15cm 約2150毫升 或和0 6克鈀粒1 5克碳酸氫鈉0 7克18cm 約3500毫升 硼氫鈉氯化鈷0 33克檸檬酸1克或和1克鈀粒2克碳酸氫鈉1 15克 2 2 2厭氧袋法 聚碳酸酯 復(fù)合塑料膜 制厭氧袋產(chǎn)氣袋厭氧指示劑觸媒 2 2 3保險(xiǎn)粉的厭氧罐培養(yǎng)法 二亞硫酸鈉 Na2S2O4 碳酸氫鈉無(wú)水硫酸鈉不用觸媒 2 3鋼絲絨法 酸性硫酸銅溶液鋼 鐵 絲絨銅和鐵的絡(luò)合物O2厭氧指示劑 酸性硫酸銅溶液 將自來(lái)水1升加硫酸銅60g 吐溫 8020ml 加熱溶解后 又加入2N的硫酸90ml 最后加水至6升 方法 取5 6g鋼絲絨 L 于1 1 5升酸性硫酸銅溶液浸泡30 60s 鋼絲絨變成紅銅色 擠凈液體置鋁質(zhì)或玻璃容器中 放入?yún)捬豕迌?nèi) 隨后將厭氧指示劑放入 密封厭氧罐 1 4h后可達(dá)厭氧狀態(tài) 2 4焦性沒(méi)食子酸法 焦性末食子酸粉末 NaHCO3或NaOH溶液無(wú)菌玻片已接種細(xì)菌的平板倒扣在上面融化的白蠟封邊 2 5抽氣換氣厭氧培養(yǎng)法 玻璃干燥罐混合氣鋼瓶 10 二氧化碳 10 的氫氣 80 的氮?dú)馊ㄩy觸媒 鈀粒 浸泡鋼絲絨 氯化鈷厭氧指示劑 2 6生物好氧厭氧培養(yǎng)法 皰肉培養(yǎng)基 牛肉渣0 5g牛肉浸液7ml液面上加蓋3 4mm厚的融化凡士林 滅菌 生物好氧厭氧培養(yǎng)方法 2 7轉(zhuǎn)管技術(shù)和氣體噴射培養(yǎng)法 360 鋼瓶進(jìn)氣銅柱除氧氣體 亮黃色 微量O2H2源CuO 黑色 接種或移植 2 8厭氧手套箱法 又稱厭氧室法 3厭氧培養(yǎng)方法的選擇 亨格特的預(yù)還原滅菌厭氧培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)管技術(shù) 氣體噴射培養(yǎng)法厭氧手套箱培養(yǎng)法用于要求嚴(yán)格的厭氧培養(yǎng)法的微生態(tài)學(xué) 正常菌群 的研究工作厭氧罐 袋 法結(jié)合其它厭氧培養(yǎng)方法不適用于對(duì)氧極其敏感的厭氧菌 但是在臨床細(xì)菌的檢驗(yàn)工作中 可以充分使用此法分離感染癥中的厭氧病原菌 4厭氧菌的保存 4 1繼代保存 以GAM半固體流動(dòng)培養(yǎng)基和TEP半固體培養(yǎng)基作傳代培養(yǎng)保存 用毛細(xì)吸管吸菌進(jìn)行繼代培養(yǎng) 使用白金接種環(huán)移菌接種 可以避免有的菌在操作中接觸空氣或氧化物而死亡 數(shù)周作一次繼代培養(yǎng) 新分離的的菌種 在幾個(gè)月內(nèi) 每3 4星期傳代一次 被保存的菌種 放室溫下暗處 最好是不同菌用不同培養(yǎng)基保存 4 2冷凍保存 20 脫脂牛奶0 5ml分注在帶螺旋塞的玻璃瓶中 經(jīng)110 15分鐘高壓滅菌 冷卻后 先用毛細(xì)吸管取半固體高層培養(yǎng)基24 48h生長(zhǎng)茂盛部位的厭氧菌液0 5ml 加入玻璃