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基因工程簡介 一基因工程的基本內(nèi)容 主要內(nèi)容 1 基因工程的概念2 基因操作的工具3 基因操作的基本步驟 基因拼接技術或DNA重組技術 生物體外 基因 DNA分子水平 人類需要的基因產(chǎn)物 剪切 拼接 導入 表達 實質 基因重組 一 基因工程的概念 基因工程步驟中需要哪些工具 二 基因操作的工具 步驟一的工具 步驟二的工具 步驟三的工具 基因的剪刀 限制性內(nèi)切酶 基因的針線 DNA連接酶 基因的運載工具 運載體 基因的剪刀 限制性內(nèi)切酶 二 基因操作的工具 限制酶 DNA的一段序列 EcoRI識別序列 ECORI切割位點 作為運載體必須具備哪些條件 二 基因操作的工具 1 能夠在宿主細胞中復制并穩(wěn)定地保存 2 具多個限制酶切點 以便與外源基因連接 3 具有某些標記基因 便于進行篩選 如抗菌素的抗性基因 產(chǎn)物具有顏色反應的基因等 基因的運載工具 運載體 大腸桿菌的質粒 二 基因操作的工具 基因的運載工具 運載體 基因的針線 DNA連接酶 二 基因操作的工具 DNA連接酶連接形成 磷酸二酯鍵 用相同的限制性內(nèi)切酶切割 目的基因 四個基本步驟 1 提取目的基因2 目的基因與運載體結合3 將目的基因導入受體細胞4 目的基因的檢測和表達 三 基因操作的基本步驟 目的基因的提取方法 三 基因操作的基本步驟 直接分離基因人工合成基因 反轉錄法根據(jù)已知的氨基酸序列合成DNA 鳥槍法 直接分離基因 鳥槍法 將供體細胞中的DNA用限制酶切割為許多片段 再用運載體將這些片段都運載到不同的受體細胞中去 讓這些DNA片段在受體細胞中擴增 從中找出含有目的基因細胞 并將含有目的基因的DNA片段分離出來 該法最大的缺點是帶有很大的盲目性 工作量大 一般不適用于真核細胞的基因 人工合成基因法 DNA合成儀 直接合成法 根據(jù)蛋白質的氨基酸順序推算出信使RNA核苷酸順序 再據(jù)此推算出基因DNA的脫氧核苷酸順序 用游離脫氧核苷酸直接合成相應的基因 反轉錄法 以信使RNA為模板 在逆轉錄酶的作用下將脫氧核苷酸合成合成DNA 基因 用與提取目的基因相同的限制酶切割質粒使之出現(xiàn)一個切口 將目的基因插入切口處 讓目的基因的黏性末端與切口上的黏性末端互補配對后 在連拉酶的作用下連接形成重組DNA分子 目的基因與運載體結合 三 基因操作的基本步驟 常用的受體細胞 步驟三 目的基因導入受體細胞 有大腸桿菌 枯草桿菌 土壤農(nóng)桿菌 酵母菌和動植物細胞等 主要借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑 導入方式 1 將細菌用CaCl2處理 以增大細菌細胞壁的通透性 2 使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞 3 目的基因在受體細胞內(nèi) 隨其繁殖而復制 由于細菌繁殖的速度非常快 在很短的時間內(nèi)就能獲得大量的目的基因 步驟三 目的基

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