性病實驗室診斷標準及應用ppt課件.ppt

性傳播疾病實驗室診斷標準及應用 1 常見性傳播疾病的實驗室診斷 金標準 淋病淋球菌培養(yǎng)梅毒暗視野檢查 TPPA FTA ABS WB 沙眼衣原體衣原體培養(yǎng) 核酸擴增技術支原體感染支原體培養(yǎng)生殖器皰疹病毒培養(yǎng) 核酸擴增技術尖銳濕疣核酸雜交和核酸擴增技術HIV 艾滋病蛋白印跡試驗 HIV抗原檢測滴蟲性陰道炎濕片法 毛滴蟲培養(yǎng)細菌性陰道病G染色查線索細胞軟下疳細菌培養(yǎng) 核酸擴增技術性病性淋巴肉芽腫衣原體培養(yǎng) 核酸擴增技術 2 一 梅毒的診斷標準 3 4 5 1 暗視野檢查 鍍銀染色法2 非梅毒螺旋體抗原血清試驗3 梅毒螺旋體抗原血清試驗 一 實驗室診斷方法的臨床意義 6 暗視野顯微鏡法直接鏡檢圖像 1000 7 1 暗視野檢查臨床意義 當標本陽性時 可確診梅毒 適宜于早期梅毒 一 二期 特別是早期一期梅毒 早期先天梅毒 暗視野顯微鏡檢查法被WHO確定為性病實驗室的必備方法當標本陰性時 不能排除梅毒診斷不適用于來至口腔的標本暗視野顯微鏡檢查法是能夠立即在獲得性或先天性梅毒的早期進行直接診斷的唯一標準 8 2 RPR類臨床意義 RPR等試驗一般認為是梅毒初篩試驗 陽性者 均需作確證試驗 VDRL用于神經(jīng)梅毒診斷 有些疾病可導致生物學假陽性 復發(fā)或再感染可陽轉或滴度升高 為療效觀察 判愈方法 早期梅毒治療后血清滴度應下降4倍認為治療有效 9 3 TPPA TPHA 臨床意義 1 為梅毒確證試驗 其敏感性 一期梅毒76 69 90 二期梅毒為100 潛伏梅毒為97 97 100 晚期梅毒為94 其特異性 100 2 治療后可終生陽性 不能作為療效指標 3 IgM抗體可作為梅毒早期診斷或胎傳梅毒診斷 4 可有1 生物學假陽性存在 如 SLE 10 兩類血清學方法臨床意義的比較 RPR類 RPR等試驗可用于大標本量的篩查 RPR定量可排除生物學假陽性 RPR是療效判定的指標RPR是療后隨訪的指標RPR用于判定是否血清復發(fā) TPPA類 是金標準TPPA等試驗是確診指標在HIV感染者中 血清學試驗可發(fā)生難于解釋的現(xiàn)象 若懷疑梅毒感染應作HIV檢查 11 二 實驗室診斷方法臨床應用 1 適用對象2 方法學的靈敏度3 不同病期方法學選擇4 血清學結果解釋5 RPR滴度與治療效果6 療后血清學隨訪7 生物學假陽性8 胎傳梅毒實驗室診斷標準9 神經(jīng)梅毒實驗室診標準 12 1 適用對象 皮膚 性病門診輸血前檢查手術前檢查入院檢查產(chǎn)前檢查檢驗檢疫 13 2 方法學的靈敏度 病原學檢查 PCR鍍銀染色暗視野血清學方法 FTA ABSTPPARPR抗體 IgMIgG 14 3 不同病期方法學選擇 一期二期三期 暗視野 鍍銀染色 PCR IgMFTA ABS TPPA ELISA CLIA RT WB RPR 暗視野 鍍銀染色 PCR等FTA ABS TPPA ELISA CLIA RT WB RPR VDRL 病理等 15 4 血清學結果解釋 請在此輸入您的文本 請在此輸入您的文本 請在此輸入您的文本 請在此輸入您的文本 請在此輸入您的文本 16 TPPA為什么做滴度 經(jīng)常有人提問 17 18 夫 妻 子結果不一致情況 19 5 RPR滴度與治療效果 1 治療成功 早期梅毒患者在治療后6個月內(nèi)癥狀消失 且RPR滴度有至少4倍的下降 晚期梅毒或隱性梅毒患者在治療后12 24個月內(nèi)RPR滴度有至少4倍的下降 2 治療失敗 治療后癥狀持續(xù)或重新出現(xiàn) 治療后RPR滴度反而上升了4倍或以上 RPR滴度較高 1 32或以上 但在六個月內(nèi)沒有達到4倍的下降 抗梅毒治療失敗的病人應考慮合并HIV感染及神經(jīng)梅毒的可能性 3 血清固定 經(jīng)正規(guī)治療后 梅毒患者RPR一般都會轉為陰性 但有1 3 的病人即使經(jīng)足量抗梅治療 RPR滴度仍持續(xù)呈低滴度陽性 這種現(xiàn)象稱為血清固定 其原因尚不明了 血清固定患者的滴度重又上升則提示再次感染梅毒 20 6 療后血清學隨訪 方法 RPR時間 第1年 每3個月檢查1次第2年 每6個月檢查1次第3年 最后1個月檢查 21 7 生物學假陽性常見原因 大家忘掉只有梅毒才能達到1 8 22 23 RPR在妊娠患者中 有28 的假陽性發(fā)生 24 25 XX梅毒事件 華西都市報 2012年8月 李冬梅 化名 懷孕 2012年12月26日 初檢胎檢篩查疑患梅毒 2013年1月4日 另一家機構 夫妻再檢均呈陰性 2013年5月14日 待產(chǎn) 第2天產(chǎn)檢結果被告之有梅毒 2013年5月16日 剖腹產(chǎn) 2013年5月21日 另一家機構 李冬梅RPR TPPA 雙女與母一致 2013年9月 前往重慶 RPR TPPA 26 8 胎傳梅毒實驗室診斷標準 暗視野檢查陽性 非梅毒螺旋體抗原血清試驗持續(xù)陽性 非梅毒螺旋體抗原血清抗體滴度是母親的4倍以上 患兒19S IgM陽性 隨訪18個月觀察 27 9 神經(jīng)梅毒的實驗室診斷 梅毒血清學試驗 RPR TPPA 陽性 腦脊液異常 WBC計數(shù) 10 10 L蛋白量 500mg L 3 腦脊液VDRL試驗陽性 可FTA ABS陽性 6 28 梅毒血清學檢測 策略一 非梅毒螺旋體抗原血清試驗 RPR 陽性 陰性 報告 RPR陰性 梅毒螺旋體抗原血清試驗 TPPA RPR定量試驗 報告 RPR陰性滴度TPPA陽性 陽性 陰性 報告 RPR陽性TPPA陰性 前帶 早期 第2次收費 1 8習慣 29 孕產(chǎn)婦梅毒檢測及服務流程 接受初次產(chǎn)前保健的孕產(chǎn)婦 采用RPR或TRUST等篩查 采用TPPA等證實 陽性 陰性 診斷梅毒感染 陽性 排除梅毒感染 陰性 繼續(xù)常規(guī)產(chǎn)前保健 2個療程治療 RPR定量檢測和隨放 方法 前帶 早期 真陽 真能排除 真梅毒 30 梅毒血清學檢測 策略二 梅毒螺旋體血清試驗 ELISA 陽性 陰性 報告 ELISA陰性 推薦TPPA復檢 RPR定性 定量試驗 報告 ELISA陽性RPR陽性及滴度 陽性 陰性 報告 ELISA陽性 TPPA陰性 RPR陰性 報告 ELISA陽性RPR陰性 陽性 陰性 報告 ELISA陽性 TPPA陽性 RPR陰性 敏感性 第2次收費 收費不 以誰為準 31 我室推薦的梅毒血清學試驗 策略三 梅毒螺旋體抗原血清試驗 TPPA等 TPPA TPPA 陰性報告 RPR RPR 現(xiàn)癥梅毒抗梅治療療后觀察 既往感染隨訪或抗梅治療 第2次收費 32 我室推薦的梅毒血清學試驗 策略四 梅毒螺旋體抗原血清試驗 TPPA等 RPR滴度 1 32直到出現(xiàn)陰性 TPPA RPR 陰性報告 TPPA RPR 生物學假陽性 TPPA RPR 既往感染或隨訪 TPPA RPR 現(xiàn)癥病人抗梅治療療效隨訪 面對當前梅毒血清學檢測存在的問題 即將有策略五 33 梅毒孕產(chǎn)婦所生兒童隨訪與先天梅毒感染狀態(tài)監(jiān)測流程 梅毒產(chǎn)婦所生新生兒 不能開展暗視野 IgM 采靜脈血 RPR定量 能開展暗視野 IgM 陰性 診斷先天梅毒感染 陽性 滴度 母親4倍 無論有無癥狀 滴度 母親4倍 有癥狀 滴度 母親4倍 無癥狀 治療 隨訪 18月TPPA 陽性 預治療 每3個月RPR定量 觀察癥狀 陽性 陰性 RPR滴度不下降或上升 結合癥狀 6月后RPR未陰 滴度低水平 連續(xù)2次陰性 每3個月TPPA 18月TPPA 連續(xù)2次陰性 排除先天梅毒感染 陰性 無此線 34 歐盟梅毒指南 2008年版 初篩試驗 選用EIA TPPA TPHA如果懷疑早期梅毒最好用TP特異性IgM檢測 如果陰性 1 2周后重復檢測RPR VDRL不推薦作為初篩試驗 但可作為有癥狀早期梅毒的快速檢測方法 需要同時檢測滴度 35 確證試驗 初篩陽性 應用另外一種TP特異性試驗確證 EIA用TPPA TPHA確證 TPPA TPHA用EIA確證然后再做滴度如果初篩和確證結果不一致 則做重組抗原免疫印跡試驗初篩和確證試驗陽性 而RPR TRUST陰性 推薦做IgM檢測 陽性結果需要對第二份血樣進行重復檢測以確證 36 判斷梅毒活動性 成功治療后 滴度 32罕見 IgM檢測 可以說明疾病的活動性 但是晚期梅毒IgM可能為陰性 如果治療前RPR TRUST為陰性 IgM檢測有助于判斷病情 37 血清學試驗選擇 篩選試驗 1 EIA 2 TPPA 3 TPPA TPHA加VDRL RPR 疑似早期梅毒 EIA IgM初篩陽性 另一實驗證實TPPA EIA RPR VDRLEIA confirmwithTPPAorTPHA 2個試驗不一致 免疫印跡 VDRL RPR滴度1 16 IgM陽性為梅毒活動的標志之一 治療當天滴度為判斷療效的最佳依據(jù) 梅毒早期VDRL RPR滴度可能較低 38 39 40 41 42 43 44 45 二 淋病的實驗室診斷標準 46 淋病診斷標準 實驗室方法 1 顯微鏡檢查涂片 革蘭染色對男性病人有診斷價值 敏感性90 95 特異性98 100 對女性病人敏感性50 70 2 培養(yǎng)敏感性 80 100 特異性 100 3 核酸檢測 熒光PCR NG CT核酸TMA雙檢 NG CT Uu三檢等敏感性 100 死菌活菌 尿液分泌物均可特異性 100 47 有診斷意義的報告報告方式 要包含4個因素對男性單純性NG感染 敏感性可達95 對女性NG感染 敏感性只有50 不能作為診斷指標不能作為判愈指標 顯微鏡檢查臨床意義 48 淋菌培養(yǎng)臨床意義 是臨床診斷的金標準 是WHO推薦的淋病篩查的唯一方法是判愈的指標可以對疑似 或非生殖器部位標本 NG的菌株作進一步的鑒定可進行NG耐藥監(jiān)測 PPNG TRNG QRNG科研 49 三 生殖道沙眼衣原體感染的診斷標準 50 沙眼衣原體診斷標準 實驗室檢查方法 1 培養(yǎng)法 McCoy細胞特異性高 100 敏感性低價昂 費時 費力設備 2 抗原檢測 直接免疫熒光試驗 DFA 用種特異的沙眼衣原體主要外膜蛋白單克隆抗體用熒光素標記染色 需熒光顯微鏡 檢查者要有經(jīng)驗 區(qū)別非特異性熒光 酶免疫吸附試驗 ELISA 敏感性71 97 特異性97 99 可成批檢測 快速免疫層析法 明窗試驗等 51 明窗試驗 clearviewchlamydia 臨床意義此法診斷女性宮頸沙眼衣原體感染的敏感性為87 特異性為98 8 簡便 快速 醫(yī)生和病人都容易接受不是金標準注意事項標本的量一定要夠 拭子要大一點 轉動一圈 停留時間要長一點男性若分泌物少 可用首段尿液沉淀注意Na離子或其它原因造成的假陽性 52 3 核酸擴增試驗 NAAT 聚合酶鏈反應與連接酶鏈反應 PCR LCR 熒光定量PCR NG CT核酸TMA雙檢 NG CT Uu三檢等 優(yōu)點 1 敏感性 90 97 特異性99 100 2 可以用尿液作檢查 非侵襲性方法3 篩查 無癥狀病人缺點 1 價格昂貴需要貴重儀器 設備2 人員需要培訓 53 200份標本同時用3種方法檢測Ct結果 明窗試驗IDEIAPCEFQ PCR陽性476266陰性153138134合計200200200 54 四 生殖器皰疹實驗室診斷標準 55 生殖器皰疹診斷標準 實驗室檢查方法 1 病毒抗原檢測 單克隆抗體免疫熒光試驗 IFA 或酶免疫吸附試驗 ELISA 來檢測抗原 2 培養(yǎng) 看特征性細胞病變 特異性100 但敏感性不高 需設備條件 技術 3 核酸檢測 熒光PCR 雙檢 三聯(lián)檢4 抗體檢測 IgM 56 其它方法介紹 復合PCR 請在此輸入您的文本 請在此輸入您的文本 請在此輸入您的文本 請在此輸入您的文本 請在此輸入您的文本 57 HSV快速檢查方法 HSV IDEIA 酶免疫放大 與金標準相比 其敏感性達93 6 特異性達97 8 可同時檢測HSV 1和HSV 2型文獻報道 HSV 1致GH的比例在上升DAKO專利技術可成批 可單人份做2小時出結果可目測 可上機 58 M PCR與IDEIA檢測HSV比較 HSV IDEIAM PCRIDEIA IDEIA Total 1665171 0131131Total166136302 59 五 尖銳濕疣實驗室診斷標準 60 人類乳頭瘤病毒診斷標準 實驗室檢查方法 過去行業(yè)標準中無實驗室檢測方