色譜指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的應用.doc

黃色網(wǎng)站 作者設(shè)想的雙重TaqMan-MGB探針技能沒有只可用來A( H3N2)亞型流感野病毒NA基因E119V耐藥位點的監(jiān)測，也可同聲作為該亞型的分型鑒定引物，存正在快捷、高遲鈍性和特同性的劣勢，尤其實用于臨床標本的檢測。舊有NA耐藥檢測辦法分成表型檢測法和基因型檢測法。interim guidelines for use of antiviral agems-United States,200506 influenza season. MMWR Morb Mortal Wkly Rep, 2006, 55(2) : 44-466 Takayama l, Nakauchi M , Fujisaki S, et al. Rapid detection of theS247N neuraminidase mutation in influenza A ( HINl ) pdm09VLrus by one-step duplex RT-PCR assa). J Virol Mechods, 2012,188 5 Centers for Disease Control and Prevention ( CDC) . High levels ofadamantane resistance among influenza A ( H3N2 ) viruses and測辦法等，保守測序辦法物耗長，利潤較高，況且需數(shù)據(jù)要高貴的測序儀表；焦鹽酸測序辦法固然檢測通量大，然而也需求一定的檢測儀表；而基于MGB探針的PCR檢測辦法檢測通量大，檢測進度快，存正在較高的遲鈍性和特同性，況且只要要一般的熒光容量PCR儀表。4檢測混合野病毒耐藥位點等位基因：A/Texas/12/2007( H3N2)和A/Washington/l/2007( H3N2)野病毒(HA=8)依照5%- 95%系列沒有同對比混合后，提取RNA并做10倍倍比濃縮，對于沒有同深淺和沒有同對比的2種混合野病毒，停止rRT-PCR檢測。表型檢測法是檢測NA抑止劑對于NA酶活性的反應，只能檢測結(jié)合的野病毒，沒有能檢測臨床標本。與其余罕見深呼吸道野病毒沒有具有穿插反響。眼前，應用MGB探鐘技能曾經(jīng)順利構(gòu)建了對準于甲型HINI流感野病毒H274Y和S247N耐藥漸變株的檢測技能6。4濃縮度按沒有同對比混合時ADV、RSV-A、RSV-B、hMPV、HboV的DNA和（或者）RNA作為沙盤，應用上述引物探針停止rRT-PCR擴中華防止醫(yī)術(shù)刊物2013年5月箜47卷第5Chin J Prev Med：May 2013，V01. 47，No5表1 混合野病毒耐藥位點等位基因的檢測后果注：Tex2為A/Texas/12/2007( H3 N2)；Wal為A/Washington/l/2007/( H3 N2)；N專人陽性增，均未視察到陰性擴增直線，標明設(shè)想的引物探針存正在很高的特同性。l Cox NJ. Subbarao K. Global epidemiology of influenza: past andresenL. Annu Rev Med , 2000 ,51 : 407 421.2J Ferraris 0, Lina B. Mutations of neuraminidase implicated inneuraminidase inhibitors resistance. J Clin Virol ,2008 ,41 ( 1 ) :13-19.3 Wong S.Pabbaraju K, Wong A, et al. Development of a real-timeRT-PCR assay for detection of resistance to oseltamivir in influenzaA pandemic ( HINI ) 2009 virus using single nucleotidepoiymorphism probes. J Virol Methods ,2011 , 173 ( 2 ) : 259 -265.二峽社 , 1997 : 100-102.議論NA抑止劑是眼前專一牢靠的醫(yī)治流感野病毒沾染的抗野病毒藥品3。對于內(nèi)中20株野病毒的NA基因序列停止綜合，證明該署毒株的NAI 19位點均為谷氨酸(E)，標明本鉆研設(shè)想的辦法與序列內(nèi)定后果分歧。后果標明，以10_1濃縮度混合時H3 N2-119E和H3 N2-119V檢測的對比范疇均是5% - 1000-/o。而耐藥毒株的涌現(xiàn)會使臨床醫(yī)治，特別是對于險癥病例的醫(yī)治更為辣手，因而，構(gòu)建快捷、煩瑣、奇異的耐藥株檢測辦法對于病人診斷下藥和監(jiān)測病況的停滯有著主要意思。辨別以RV、FluB、HINI、PIV1、PIV2、PIV3、5應用臨床標本結(jié)合株考證引物探針：選取經(jīng)國度流感核心鑒定陰性的111株A( H3N2)亞型流感毒株停止NA基因E119V實變檢測，應用H3 N2-119V探針停止的rRT-PCR檢測后果顯現(xiàn)，111份均為陽性，而H3 N2-119E探針的檢測后果均為陰性，即未檢測到E119V漸變毒株。A( H3N2)亞型流感野病毒的NA發(fā)作E119V變異后，能招致野病毒對于奧司他韋遲鈍性升高心1，本國流感野病毒耐酒性監(jiān)測尚在于起步階段，眼前尚無E119V漸變株的簡報。而野病毒以較低的10。于是，正在檢測耐藥漸變與藥品遲鈍株的混合模本中存正在顯然劣勢，并且此辦法