尿液理學(xué) 蛋白 本周蛋白 尿糖 檢測(cè)試驗(yàn)

,邱群鳳,尿液檢驗(yàn),2016Mar.,龍巖市第一醫(yī)院,1.尿液理學(xué)檢查 2.尿蛋白定性檢3.尿本周蛋白定性檢查 4.尿糖定性檢查,尿液形成過程示意圖, 容器1、 一般檢查：清潔干燥2、 細(xì)菌培養(yǎng)：有蓋無(wú)菌大試管3、 24小時(shí)尿：清潔干燥的大口瓶 常規(guī)檢查可隨時(shí)留取，但晨尿較濃縮、偏酸性，病理成分多且完整，可提高檢查的陽(yáng)性率。 尿液保存1、 冷藏2、 立即送檢，夏季1h，冬季 2500 ml/24h 少尿： 400 ml/24h 無(wú)尿：1.020，隨機(jī)尿1.0031.030 新生兒：1.0021.004 臨床意義：反映腎小管的濃縮稀釋功能,【注意事項(xiàng)】 1尿比重計(jì)通過校正后才能使用。 2尿液要求新鮮；尿液過少不足以浮起比重計(jì)時(shí)。 3因低溫所致的尿酸或其他鹽類沉淀可水浴(37)使其溶解，待尿液溫度降至比重計(jì)所標(biāo)定的溫度時(shí)即可測(cè)定。 4尿液面應(yīng)消除泡沫；比重計(jì)浮標(biāo)要垂直懸浮于尿液中；讀取比密值要準(zhǔn)確。 5校正結(jié)果 要進(jìn)行蛋白尿、糖尿和溫度的校正。 6每次測(cè)定完畢都需用純凈水沖洗比重計(jì)，若有蛋白質(zhì)及鹽類物質(zhì)沉積時(shí)，需用清潔液洗凈后使用。,【原理】 pH廣泛試紙是多種指示劑混合的試帶,靈敏度約為pH1.0,顯色范圍為棕紅至深黑色,試帶蘸取尿液后即可顯色,然后與標(biāo)準(zhǔn)色板比較即可測(cè)得尿液pH近似值,四、尿酸堿度pH試紙法測(cè)定,【操作】 1.取試紙 2.浸尿 3.讀取結(jié)果 4.報(bào)告方式, 參考值 新鮮晨尿pH值在5.56.5,平均值6.0 新鮮隨機(jī)尿pH值在4.58.0 久置可變堿性 臨床意義,【注意事項(xiàng)】1.試帶 應(yīng)避光,密封與干燥保存,遠(yuǎn)離酸性和堿性物質(zhì),以防失效2.標(biāo)本 應(yīng)新鮮,放置過久會(huì)因揮發(fā)性酸喪失或細(xì)菌繁殖而使pH增高,標(biāo)本不能使用防腐劑,否則可能會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果3.比色時(shí)間 應(yīng)在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)比色,第二節(jié) 尿蛋白定性檢查,【原理】 生物堿試劑磺基水楊酸，在酸性條件下，其磺酸根陰離子與蛋白質(zhì)氨基酸陽(yáng)離子結(jié)合，形成不溶性蛋白鹽沉淀。,磺基水楊酸法,【操作】 1.調(diào)pH : 使尿液PH值在56 2.加尿液: 取2支試管,加入1ml尿液 3.加試劑: 第一支試管加試劑2滴,輕混 勻,另 一支試管不加做對(duì)照 4.判斷結(jié)果: 1min內(nèi)觀察結(jié)果,1, 優(yōu)點(diǎn): 簡(jiǎn)便快速，靈敏度高0.05-0.1g/L； 缺點(diǎn): 與清/球/本周蛋白反應(yīng)；假陽(yáng)性。干化學(xué)法的參考方法，NCCLS推薦的 確證實(shí)驗(yàn)。,【評(píng)價(jià)】, 尿液中蛋白質(zhì)含量150mg/24h 尿中蛋白質(zhì)濃度100mg/L 蛋白定性為陽(yáng)性，即蛋白尿。,1.蛋白尿 (proteinuria, PRO),【干擾因素】,【注意事項(xiàng)】1 .標(biāo)本:尿液明顯混濁，先離心或過濾。 患者應(yīng)用大劑量青霉素鉀鹽、慶大霉素、磺胺、含 碘造影劑時(shí)，應(yīng)告知結(jié)果可能產(chǎn)生假陽(yáng)性。 正確采集中段尿，避免混有生殖系統(tǒng)分泌物。 2. 調(diào)pH 本法在尿液偏堿或偏酸時(shí)（pH9 ，pH3）可呈 假陰性，檢測(cè)前先測(cè)試尿pH(56).3掌握好結(jié)果判斷時(shí)間,對(duì)于微弱陽(yáng)性的判斷，可選用黑色襯紙作背景，以提高分辨力。,第三節(jié) 尿本周蛋白定性檢查,一、凝溶法,【原理】 本周蛋白在pH4.90.1條件下，加熱至 4060時(shí)可發(fā)生凝固，溫度升至90100時(shí)沉淀消失，當(dāng)溫度降低恢復(fù)至4060時(shí)又可重新凝固。,【操作】（詳見實(shí)驗(yàn)課本 P90 ） 1標(biāo)本處理 2加入試劑 3觀察結(jié)果 4驗(yàn)證結(jié)果,【注意事項(xiàng)】 1收集已診斷輕鏈疾病患者的尿液做此試驗(yàn)。尿液新鮮，減少清蛋白、球蛋白分解變性產(chǎn)生的干擾?；鞚崮蛞喉毾入x心取上清液。 2嚴(yán)格控制或調(diào)節(jié)pH，凝溶法最適pH為4.55.5。 3煮沸過濾時(shí)，動(dòng)作迅速，保持高溫，不要振蕩，防止BJP夾雜于其他沉淀蛋白中被過濾除掉而造成假陰性。過濾用漏斗、濾紙、試管等用品，需保持高溫狀態(tài)，以避免溫度降低使BJP凝固。 4凝溶法特異性高，操作繁瑣、費(fèi)時(shí)，靈敏度低（0.32.0）g/L。 5.操作時(shí)一定注意安全!,二、對(duì)-甲苯磺酸法,【原理】 對(duì)-甲苯磺酸能沉淀相對(duì)分子質(zhì)量較小的本周蛋白，而對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量較大的清蛋白和球蛋白不起反應(yīng)。,【操作】 1.加尿液: 取2支試管，分別加尿液1ml 2.加試劑: 測(cè)定管加0.5ml試劑,對(duì)照管加 0.5ml冰醋酸,輕混勻靜置5min 3.觀察結(jié)果: 陽(yáng)性:測(cè)定管渾濁加重或有沉淀,對(duì)照管清晰透明或輕度渾濁 陰性:測(cè)定管清晰透明或與對(duì)照管相似,【注意事項(xiàng)】 1收集已診斷輕鏈疾病患者的尿液做此試驗(yàn)。尿液應(yīng)新鮮，混濁尿液須先行離心取上清液。服用利福平類抗結(jié)核藥物患者可能出現(xiàn)周蛋白假陽(yáng)性。 2尿液中其他球蛋白5.0g/L可出現(xiàn)假陽(yáng)性，需進(jìn)行驗(yàn)證。如果尿液中本周蛋白含量低，則需先對(duì)尿液進(jìn)行濃縮。,第四節(jié) 尿葡萄糖班氏法定性檢查,【原理】Cu2+-Cu+藍(lán)色 黃色至磚紅色.,簡(jiǎn)易步驟:班氏試劑1ml(煮沸不變色)+尿4滴煮沸1-2min 冷卻后觀察.,堿性條件+葡萄糖,操作：ml班氏試劑，加熱試管底部，煮沸，觀察，再加尿液2滴，繼續(xù)煮沸min，冷卻后觀察結(jié)果。 結(jié)果判斷：1.藍(lán)色不變 : - 2.藍(lán)中略帶綠無(wú)沉淀 : +/-3.綠色有少許黃綠色沉淀 : + 4.較多黃綠色沉淀 : +5.土黃色渾濁,大量沉淀 : + 6.大量紅棕/磚紅色沉淀 : +,【干擾因素】,【評(píng)價(jià)】,缺乏特異性,靈敏度低,【注意事項(xiàng)】1、試劑與尿液的比例為101。2、煮混時(shí)應(yīng)不時(shí)搖動(dòng)試管以防爆沸噴出，試管口朝向無(wú)人處。3、檢驗(yàn)糖尿病患者尿液中葡萄糖，空腹或餐后2h留取尿標(biāo)本。4、大量銨鹽，易致假陰性，應(yīng)預(yù)先加堿煮沸去氨后再檢驗(yàn)。5、蛋白0.5g/L,易致假陰性，加熱乙酸法去蛋白取濾液檢驗(yàn)。6、VitC,青/鏈霉素,頭孢菌素,異煙肼,水楊酸鹽