食品中抗生素殘留危害及檢測方法.doc

.食品中抗生素殘留危害及檢測方法隨著人們生活質(zhì)量的提高，食品安全問題越來越為廣大消費(fèi)者所關(guān)注，特別是農(nóng)藥和抗生素等藥物殘留問題更是廣大消費(fèi)者所關(guān)注的焦點(diǎn)問題。在食品安全這個全球關(guān)注的熱點(diǎn)問題上，如何快速、準(zhǔn)確地檢測食品安全的問題已成為重中之重。要檢測抗生素在食品中的殘留，必須選擇特異性強(qiáng)、靈敏度高、高效快速的檢測方法。因此，研究各種抗生素類殘留檢測的方法，提高其靈敏度與選擇性具有十分重要的意義?？股鼐哂心男┪：θ藗兂粤擞锌股貧埩舻娜?、蛋、奶等食物后，會造成抗生素在人體內(nèi)蓄積，使人產(chǎn)生對抗生素的抗性，引起各種組織器官病變，甚至癌變。對人類健康的危害對人體腸道菌群的影響人體腸道菌群是一個平衡的生態(tài)系統(tǒng)，對保持人體健康起著非常重要的作用。如果人們長期攝入含有抗生素的食品后，會使敏感菌群被殺滅或抑制，而耐藥菌群卻大量繁殖，從而打破原來的平衡狀態(tài)造成菌群失調(diào)，這就可能會導(dǎo)致長期腹瀉或營養(yǎng)不良，嚴(yán)重時還可造成耐藥菌感染，給臨床治療帶來困難。引起過敏和變態(tài)反應(yīng)青霉素、四環(huán)素、磺胺類及某些氨基糖苷類抗生素能使部分人群發(fā)生過敏反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng)，氯霉素可破壞機(jī)體造血功能，誘發(fā)再生障礙性貧血。經(jīng)常食用含抗生素的動物性食品，輕者出現(xiàn)皮膚瘙癢、蕁麻疹、關(guān)節(jié)腫痛，重者導(dǎo)致血管性水腫、休克、甚至死亡。導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性增加目前，由于抗生素的廣泛使用，使得細(xì)菌的耐藥性不斷增加，食用含抗生素殘留的動物性食品后，人體內(nèi)細(xì)菌的耐藥性增加。同時，動物體內(nèi)的耐藥性菌株的耐藥性也可能轉(zhuǎn)移到人體細(xì)菌中，從而對人類產(chǎn)生極大的危害。其他毒害作用動物性食品中殘留的鏈霉素進(jìn)入人體后可引起腎損害和聽神經(jīng)受損。長期攝入氨基糖苷類抗生素殘留嚴(yán)重超標(biāo)的動物性食品，可損害第8對腦神經(jīng)，出現(xiàn)頭暈、頭痛、耳鳴、耳聾、惡心、嘔吐等癥狀。四環(huán)素會引起肝損傷，與骨骼或牙齒中的鈣質(zhì)結(jié)合后，使骨骼及牙齒黃染，還可影響兒童的生長發(fā)育。鄰氯青霉素、頭孢菌素等可引起人類免疫性疾??；氯霉素會損害人的造血功能，抑制蛋白質(zhì)摘要：文章綜述了抗生素殘留的來源與途徑,介紹了抗生素殘留對人類健康、乳制品生產(chǎn)、環(huán)境及其他方面造成的危害，分析了檢測抗生素殘留的方法，包括微生物檢測法、儀器檢驗(yàn)法、免疫學(xué)分析法等，并指出了這些檢測方法的研究現(xiàn)狀與發(fā)展前景。對乳制品生產(chǎn)工藝的危害由于含有抗生素的奶無法制成酸奶、奶酪等一些高質(zhì)量牛奶產(chǎn)品，容易造成大量原料奶的浪費(fèi)，給乳品企業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失。另一方面，一些不法奶戶在高溫季節(jié)為防止鮮乳的酸敗，往往向牛乳中摻雜各種抗生素，從而造成乳中抗生素殘留，對人體也造成了很大的危害。對環(huán)境的危害一些性質(zhì)穩(wěn)定的藥物被排泄到環(huán)境中仍能穩(wěn)定存在很長時間，從而造成環(huán)境中的藥物殘留。鏈霉素、土霉素在環(huán)境中不易降解；螺旋霉素低濃度降解很快，但濃度高時需6個月才能降解完；桿菌肽鋅在有氧的條件下完全降解需34個月，在無氧環(huán)境中降解所需要的時間更長。據(jù)報道，動物養(yǎng)殖場污水處理池中紅霉素、復(fù)紅霉素、磺胺甲唑質(zhì)量濃度可達(dá)69g/L，這些藥物的排放污染了環(huán)境，破壞了生態(tài)平衡。抗生素殘留量的檢測方法隨著社會的進(jìn)步和人們對抗生素殘留的日益重視，在客觀上就要求改進(jìn)傳統(tǒng)的檢測方法。引進(jìn)先進(jìn)的檢測儀器，尋求一種快速、精確的檢測方法，使得檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。微生物檢測方法微生物檢測方法的主要原理是根據(jù)抗微生物藥對特異微生物的抑制作用，來定性或定量檢測受檢樣品中殘留的抗微生物藥。微生物檢測法應(yīng)用較為廣泛，是抗生素殘留檢測的傳統(tǒng)方法，但測定時間長，結(jié)果誤差較大，操作復(fù)雜。其優(yōu)點(diǎn)是費(fèi)用低，一般實(shí)驗(yàn)室都能操作。氯化三苯四氮唑法（TTC）這是目前我國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中用來檢查牛乳中抗生素殘留的檢測方法。如果牛乳中有抗生素存在，當(dāng)乳中加入菌種（嗜熱鏈球菌）經(jīng)培養(yǎng)后，菌種不增殖。此時，加入的TTC指示劑不發(fā)生還原反應(yīng)，所以仍呈無色狀態(tài)。如果沒有抗生素存在，則加入菌種就可增殖，TTC還原變成紅色，使樣品染成紅色。棉拭法或紙片法這是檢測胴體內(nèi)可疑抗生素殘留的現(xiàn)場試驗(yàn)方法，簡便而又有一定準(zhǔn)確性，被世界普遍采用，具有廣域的靈敏性。它是用棉拭插入待檢部位浸潤20min取出，放入有枯草桿菌的培養(yǎng)基中培養(yǎng)18h24 h，或用圓濾紙從腎臟或乳取樣，與含有枯草桿菌等細(xì)菌的營養(yǎng)瓊脂貼合培養(yǎng)，通過觀察棉拭周圍有無抑菌圈或根據(jù)其大小判定有無抗菌物質(zhì)存在。該法的特點(diǎn)是能夠確定抗生素的種類，提高檢出率和準(zhǔn)確率。如，氯霉素最低檢出限量為0.01mg/kg、土霉素為0.05mg/kg等。杯蝶法樣品經(jīng)處理后，注入牛津杯中，與含菌液的檢定平板貼合。培養(yǎng)后，根據(jù)抑菌圈的有無及大小判定結(jié)果。采用不同的試驗(yàn)菌種，可檢測不同的抗生素。如檢測肉中四環(huán)素類抗生素用蠟樣芽孢桿菌；檢測青霉素用金黃色葡萄球菌；檢測鏈霉素或雙氫鏈霉素用枯草桿菌。電泳生物檢測法該法靈敏度較高。Fusac（1989）應(yīng)用電泳和微生物自顯影技術(shù)測定動物組織中殘留的氨基糖苷類抗生素（如，雙氫鏈霉素、卡那霉素等），取得了滿意的結(jié)果。瓊脂擴(kuò)散法Korkela以豬腎為樣品采用瓊脂擴(kuò)散法對幾種抗生素殘留檢測進(jìn)行了比較。能檢測出土霉素和鏈霉素的殘留。Untermann（1986）報道，采用枯草桿菌進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散法檢測出了牛、豬及山羊的肌肉中和腎臟內(nèi)抗生素的殘留。儀器檢驗(yàn)方法儀器檢驗(yàn)方法是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來測定其含量，進(jìn)行定性定量和藥劑鑒定。其敏感性較高，但有的檢測程序較復(fù)雜或檢測費(fèi)用較高。液相色譜法（LC）德國Russel報道了液相色譜法檢測氯霉素殘留，檢測限為10g/kg，回收率為63%79%。Jefery等（1994）報道了用LC法測定沙拉沙星在海峽鲇魚肌肉中的殘留，沙拉沙星的檢測限為1.4ng/g，回收率為85.4104。氣相色譜法（GC）該法有許多高靈敏、通用性或?qū)Ｒ恍詮?qiáng)的檢測器供選用。Plomp和Maes報道了在血液和羊水中甲砜霉素的快速氣相色譜檢測方法，檢測限為0.1g/mL，甲砜霉素血清的回收率為91.3，羊水的回收率為90.3。薄層色譜法（TLC）該法經(jīng)常作為樣品篩選方法。其優(yōu)點(diǎn)是速度快，有利于現(xiàn)場應(yīng)用，且已在飼料、組織和體液等的分析中得到了廣泛的應(yīng)用。Bossuyt等（1976）報道用TLC法測定牛奶中新霉素的殘留。但新霉素的檢測限為15g/g，遠(yuǎn)高于牛奶中的新霉素殘留限量。高效薄層色譜法（HPTLC）該法現(xiàn)已成為僅次于HPLC的殘留分析法。HPTLC在獸藥殘留的快速篩選檢測方面應(yīng)用廣泛。測定組織樣品時需在樣品展開后噴以硫酸-高氯酸試液，靈敏度可提高10倍，檢測限達(dá)10g/kg。高效液相色譜法（HPLC）這是目前廣泛應(yīng)用的一種理化檢測方法。該法對抗生素殘留的檢測具有較高的靈敏性。Anadan等（1995）報道了用HPLC法測定雞脂肪、肝臟、腎臟、肺臟及皮膚中恩諾沙星及代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星濃度，檢測限為0.003 g/g，在各種組織中提取回收率均大于70。Rolinski等（1997）用HPLC法檢測了肉雞組織和雞蛋中諾氟沙星殘留，檢測限為0.0025g/g。超臨界流體色譜法（SFC）該法可彌補(bǔ)GC和HPLC法的不足，但不可能取代二者。SFC最大優(yōu)點(diǎn)是可以方便地連接各種靈敏的檢測器。Pensabene等將雞蛋樣品進(jìn)行超臨界流體萃取后進(jìn)行磺胺類藥物的殘留分析，檢測限為25 g/kg，回收率為81101%。毛細(xì)管電泳法（CE）Ackermans等將豬肉樣品加乙腈提取，離心后上清液過濾膜后直接進(jìn)行毛細(xì)管區(qū)帶電泳分析。測出肉樣中15種磺胺類藥物的檢測限在2 mg/kg9mg/kg的范圍內(nèi)。聯(lián)用技術(shù)聯(lián)用技術(shù)可揚(yáng)長避短，一般兼分離、定量和定性（分子結(jié)構(gòu)信息）于一體，因而特別適用于確證性分析。常見的聯(lián)用技術(shù)有薄層色譜-質(zhì)譜（TLC-MS）、氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）、液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）等。色譜和質(zhì)譜聯(lián)用由于實(shí)現(xiàn)了高效層析分離和檢測聯(lián)機(jī)，可用微電腦控制層析條件、程序和數(shù)據(jù)處理，其特異性、靈敏度和重復(fù)性均好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物的檢測。免疫分析法免疫分析法主要有放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、熒光免疫分析（FIA） 和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。與常規(guī)的理化分析技術(shù)相比，免疫分析技術(shù)最突出的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、容量大、速度快、儀器化程度低且分析成本低，分析效率則為HPLC或GC的幾十倍以上。免疫分析法能與其他技術(shù)聯(lián)用。放射免疫分析（RIA）Mahon等曾將卡那霉素與人血清白蛋白直接連接制備結(jié)合抗原，并建立了血清樣品的放射免疫測定法，檢測限為10 ng/mL。1984年Arnold等即建立了氯霉素的放射免疫測定法，其檢測限為0.21g/kg。酶聯(lián)