細(xì)菌培養(yǎng)基的制備、滅菌及接種、培養(yǎng)技術(shù)ppt課件

.,1,實(shí)驗(yàn)二,細(xì)菌培養(yǎng)基的配制、滅菌及接種、培養(yǎng)技術(shù),.,2,第一部分細(xì)菌培養(yǎng)基的制備、滅菌,目的要求實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)程序,.,3,目的要求,熟悉玻璃器皿的洗滌和滅菌前的準(zhǔn)備。掌握培養(yǎng)基和無(wú)菌水的制備方法。掌握高壓蒸氣滅菌技術(shù)。,.,4,實(shí)驗(yàn)材料,藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、蒸餾水等。高壓蒸氣滅菌鍋、烘箱、細(xì)菌過(guò)濾器、酒精燈。其它：培養(yǎng)皿、試管、移液管、錐形瓶、燒杯、玻璃珠等。,.,5,實(shí)驗(yàn)程序,玻璃器皿的洗滌和包裝培養(yǎng)基的制備無(wú)菌稀釋水的制備培養(yǎng)基和玻璃器材等的滅菌,.,6,實(shí)驗(yàn)程序1（玻璃器皿的洗滌和包裝）,清洗并烘干玻璃器皿：如培養(yǎng)皿、移液管、試管等。棉塞的制作包裝培養(yǎng)皿和移液管等。,.,7,實(shí)驗(yàn)程序2（培養(yǎng)基的種類）,據(jù)組成成分可分為:1.合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。2.半合成培養(yǎng)基：有一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。3.天然培養(yǎng)基：利用天然來(lái)源的有機(jī)物配制而成。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入1530g/L左右的瓊脂。3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入35g/L左右的瓊脂。,.,8,實(shí)驗(yàn)程序2（培養(yǎng)基的種類）,常用凝固劑為瓊脂（其次為明膠），又叫洋菜、凍粉。,.,9,實(shí)驗(yàn)程序2（培養(yǎng)基的配制方法和步驟）,1.取一個(gè)300mL燒杯，裝150mL蒸餾水。2.按配方逐一正確稱取各種成分，依次加入水中溶解。注意：a.前一種成分溶解之后，才能加入下一種成分b.可加熱促進(jìn)各成分溶解c.加熱過(guò)程應(yīng)不斷攪拌，以免糊底燒焦，并適當(dāng)補(bǔ)充因蒸發(fā)而損失的水量。,.,10,實(shí)驗(yàn)程序2（培養(yǎng)基的配制方法和步驟）,3.調(diào)pH值：用10NaOH調(diào)pH至7.6，用精密pH試紙對(duì)照。4.分裝：將培養(yǎng)基分裝于5支試管，其余全部倒入250mL錐形瓶中，分別塞上棉塞。注意不要污染棉塞和瓶口。5.包扎成捆，掛上標(biāo)簽，注明何種培養(yǎng)基。6.滅菌備用：培養(yǎng)基滅菌后必須在37下恒溫培養(yǎng)24h，確定無(wú)菌生長(zhǎng)，方可使用。,.,11,實(shí)驗(yàn)程序2（培養(yǎng)基的分裝和斜面培養(yǎng)基的制作）,每支試管裝的量為試管高度的1/41/3.斜面長(zhǎng)度為試管長(zhǎng)度的1/31/2.,.,12,實(shí)驗(yàn)程序2（培養(yǎng)基的配制方法和步驟）,.,13,實(shí)驗(yàn)程序3（無(wú)菌稀釋水的制備）,取一個(gè)250mL的錐形瓶裝90(或99)mL蒸餾水，放30顆玻璃珠(用于打破活性污泥、菌塊或土壤顆粒)于錐形瓶?jī)?nèi)，塞棉塞、包扎，待滅菌。另取5支18mm180mm的試管，分別裝9mL蒸餾水，塞棉塞、包扎，待滅菌。無(wú)菌稀釋水為微生物分離實(shí)驗(yàn)中所需要的材料。,.,14,實(shí)驗(yàn)程序4（培養(yǎng)基和玻璃器材等的滅菌）,加熱滅菌有干熱滅菌和濕熱滅菌。干熱滅菌法：電熱烘箱作為干熱滅菌器干熱滅菌的操作方法a.將待滅菌的物品放入恒溫箱，將溫度調(diào)節(jié)至160并維持2h；b.把恒溫箱的調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)回零處，待溫度降到50左右，才能將物品取出。,.,15,實(shí)驗(yàn)程序4（培養(yǎng)基和玻璃器材等的滅菌）,濕熱滅菌：高壓蒸氣滅菌法高壓蒸氣滅菌法的操作步驟如下：1.滅菌鍋內(nèi)加入一定量的水。2.將待滅菌的物品放入鍋內(nèi)，并關(guān)嚴(yán)鍋蓋。注意：器物不能裝得太滿。3.接通電源，進(jìn)行加熱。4.排除高壓鍋內(nèi)的冷空氣，可將排氣閥打開(kāi)，待溫度計(jì)指示溫度為100時(shí)關(guān)閉排氣閥；或當(dāng)排出的蒸氣相當(dāng)猛烈且微帶藍(lán)色時(shí)關(guān)閉排氣閥。,.,16,實(shí)驗(yàn)程序4（培養(yǎng)基和玻璃器材等的滅菌）,5.當(dāng)壓力達(dá)1.05kg/cm2(滅菌器內(nèi)的溫度為121)即開(kāi)始滅菌，使其維持1530min。對(duì)熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基如含有葡萄糖、氨基酸等物質(zhì)時(shí)，應(yīng)適當(dāng)降低壓力(0.56kg/cm2)，延長(zhǎng)時(shí)間。6.滅菌時(shí)間一到，切斷電源，待壓力降至零時(shí)，才能打開(kāi)排氣閥，然后打開(kāi)滅菌器蓋，取出物品，排出鍋內(nèi)剩余水。7.待培養(yǎng)基冷卻后置于37恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h，若無(wú)菌生長(zhǎng)則放入冰箱或陰涼處保存?zhèn)溆谩?.,17,.,18,實(shí)驗(yàn)程序4（培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）,間歇滅菌法：即常壓滅菌，用于一些受高溫而破壞的培養(yǎng)基的滅菌。操作方法：a.待滅菌的物品放在滅菌器或蒸籠里，每天蒸煮1次，每次在100煮沸3060min，連續(xù)3d重復(fù)進(jìn)行。b.在每?jī)纱握糁笾g，將物品（指培養(yǎng)基）放在37恒溫條件下培養(yǎng)24h，這樣可以使每次蒸煮后未殺死殘留的芽孢萌發(fā)成營(yíng)養(yǎng)體，以便下次蒸煮時(shí)殺滅。c.第三次蒸煮之后基本無(wú)菌，但為了確保無(wú)菌仍要放在37恒溫條件下培養(yǎng)24h，確定無(wú)菌才能使用。,.,19,實(shí)驗(yàn)程序4（培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法）,過(guò)濾除菌法：不能用加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、血清），一般可用細(xì)菌過(guò)濾器進(jìn)行除菌。,.,20,第二部分細(xì)菌純種分離、培養(yǎng)和接種技術(shù),目的要求實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)程序,.,21,目的要求,掌握從環(huán)境中分離培養(yǎng)細(xì)菌的方法，從而獲得若干種細(xì)菌純培養(yǎng)技能。掌握幾種接種技術(shù)。,.,22,實(shí)驗(yàn)材料,無(wú)菌培養(yǎng)皿(直徑90mm)10套、無(wú)菌移液管1mL2支、10mL1支。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶，無(wú)菌稀釋水90mL1瓶、9mL5管。其它：接種環(huán)、酒精燈、恒溫箱。,.,23,實(shí)驗(yàn)程序,細(xì)菌的純種分離細(xì)菌的接種方法,.,24,實(shí)驗(yàn)程序1（細(xì)菌的純種分離）,稀釋平板法平板劃線法,.,25,實(shí)驗(yàn)程序1（細(xì)菌的純種分離稀釋平板法）,1.取樣。2.將1瓶90mL和5管9mL無(wú)菌水排列好，用記號(hào)筆依次編上101、102、103、104、105、106。在無(wú)菌操作條件下，用10mL的無(wú)菌移液管吸取10mL水樣(或其它樣品)加入編號(hào)為101無(wú)菌水(內(nèi)含玻璃珠)中，將移液管吹洗三次，用手搖10min將顆粒狀樣品打散。即為101濃度的菌液。用1mL無(wú)菌移液管吸取1mL101濃度的菌液于編號(hào)為102無(wú)菌水中，將移液管吹洗三次，搖勻即為102濃度菌液。同樣方法，依次稀釋到106。,.,26,實(shí)驗(yàn)程序1（細(xì)菌的純種分離稀釋平板法）,稀釋液的制備,.,27,實(shí)驗(yàn)程序1（細(xì)菌的純種分離稀釋平板法）,3.平板的制作取10套無(wú)菌培養(yǎng)皿編號(hào)，104、105、106各3個(gè)，另一個(gè)為空氣對(duì)照。取1支1mL無(wú)菌移液管從濃度小的菌液開(kāi)始，以106、105、104為序分別吸取0.5mL菌液于相應(yīng)編號(hào)的培養(yǎng)皿內(nèi)(每次吸取前，用移液管在菌液中吹泡使菌液充分混勻)。,.,28,實(shí)驗(yàn)程序1（細(xì)菌的純種分離稀釋平板法）,3.平板的制作加熱培養(yǎng)基，當(dāng)其冷至45左右時(shí)，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拿培養(yǎng)皿，以中指、無(wú)名指和小指托住皿底，拇指和食指夾住皿蓋，靠近火焰，將皿蓋掀開(kāi)，倒入培養(yǎng)基后將培養(yǎng)皿平放在桌上，順時(shí)針和逆時(shí)針來(lái)回轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基和菌液充分混勻，冷凝后即成平板，倒置于30培養(yǎng)2448h，然后觀察結(jié)果。,.,29,實(shí)驗(yàn)程序1（細(xì)菌的純種分離稀釋平板法）,3.平板的制作取對(duì)照無(wú)菌培養(yǎng)皿，倒平板待凝固后，打開(kāi)皿蓋10min后蓋上，倒置于30培養(yǎng)2448h，然后觀察結(jié)果。,.,30,實(shí)驗(yàn)程序1（細(xì)菌的純種分離平板劃線法）,1.平板制作：將融化并冷至約50的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，使凝固成平板。2.劃線：用接種環(huán)挑取一環(huán)樣品，左手拿培養(yǎng)皿，中指、無(wú)名指和小指托住皿底，拇指和食指夾住皿蓋，將培養(yǎng)皿稍傾斜，左手拇指和食指將皿蓋掀半開(kāi)，右手將接種環(huán)伸入培養(yǎng)皿內(nèi)，在平板上輕輕劃線(切勿劃破培養(yǎng)基)。劃線完畢蓋好皿蓋，30培養(yǎng)2448h后觀察結(jié)果。,.,31,實(shí)驗(yàn)程序1（細(xì)菌的純種分離平板劃線法）,.,32,實(shí)驗(yàn)程序2（細(xì)菌的接種技術(shù)）,接種方法：常用的有斜面接種法、平板接種法、液體接種法、試管深層固體培養(yǎng)基的穿刺接種法。接種工具：常用的有接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種圈、接種鏟或接種鋤、玻璃涂棒等。,圖6,.,33,實(shí)驗(yàn)程序2（細(xì)菌的接種技術(shù)斜面接種法）,左手平托兩支試管，拇指壓住兩支試管。外側(cè)是菌種試管，內(nèi)側(cè)是待接種的空白斜面(兩支試管的斜面同時(shí)向上)。右手將棉塞旋松，以便在接種時(shí)容易拔出。右手拿接種環(huán)，在火焰上先將環(huán)端燒紅滅菌，然后將有可能伸入試管的其余部位也過(guò)火滅菌。將兩支試管的上端并齊，靠近火焰，用右手小指、無(wú)名指和手掌將兩支試管的棉塞一并夾住拔出，棉塞仍?shī)A在手中，然后讓試管口緩緩過(guò)火焰。,1,2,3,.,34,實(shí)驗(yàn)程序2（細(xì)菌的接種技術(shù)斜面接種法）,將已灼燒過(guò)的接種環(huán)伸入菌種試管內(nèi)。先冷卻，而后再用環(huán)挑取少許菌種，將接種環(huán)抽出并迅速伸入待接種試管底部，在斜面上由底部向上劃線。抽出接種環(huán)，塞上棉塞將試管插在試管架上，最后再次燒紅接種環(huán)，則接種完畢。,4,5,6,7,8,.,35,實(shí)驗(yàn)程序2（細(xì)菌的接種技術(shù)液體接種和穿刺接種）,液體接種法(從斜面菌種接入培養(yǎng)液)：用接種環(huán)挑取斜面菌種送入培養(yǎng)液中，使環(huán)在液體表面與管壁接觸輕輕研磨，將環(huán)上的菌種全部洗入培養(yǎng)液中，取出接種環(huán)塞上棉塞。將試管輕輕撞擊手掌使菌體在培養(yǎng)液中均勻分布。最后將接種環(huán)燒紅滅菌。穿刺接種法(從斜面菌種接入(半)固體培養(yǎng)基)：用接種針經(jīng)火焰滅菌后，挑取少量菌種，垂直地穿入試管固體培養(yǎng)基中心至底部，然后穿刺線緩慢將針抽出，塞上棉塞。燒紅接種針滅菌，則接種完畢。,.,36,實(shí)驗(yàn)程序2（細(xì)菌的接種技術(shù)稀釋平板涂布法）,稀釋樣品：方法同稀釋平板分離法倒平板：將融化并冷至50左右的培養(yǎng)基倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，冷凝后即成平板用無(wú)菌移液管吸取一定量的經(jīng)適當(dāng)稀釋的標(biāo)志樣品