膠體金試紙條檢測技術

膠體金試紙條診斷技術,一、簡介,膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層析技術研制而成，該技術是90年代初在免疫滲濾技術的基礎上建立的一種簡易快速的免疫學檢測技術，最先用于人絨毛膜促性腺激素（HCG）的測定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等檢測。,膠體金（Colloidalgold）是氯金酸（HAuCl4）的水溶膠，氯金酸在還原劑的作用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。,zeta電位可以使膠體金顆粒之間相互排斥，以維持膠體金的穩(wěn)定狀態(tài)。,基礎金核雙離子內層負離子（AuC12）zeta電位外層離子層H+分散在膠體間的溶液中,膠體金顆粒對蛋白質有很強的吸附功能，而不被壞其生物活性，可以與蛋白質等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非共價結合，形成膠體金標記物。,質量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球形，大小均一，無棱角。質量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀各異。,膠體金的質量判定標準,膠體金標記的原理：膠體金在堿性條件下帶負電荷，與蛋白質分子的正電荷基團藉靜電吸引而形成牢固結合。膠體金標記技術（Immunogoldlabelingtechnique）是以膠體金作為示蹤標記物應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。,二、膠體金試紙條診斷技術的原理,以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛細血管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，通過抗原抗體結合，并利用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應，檢測抗原/抗體。有三種反應模式：夾心法，間接法，競爭抑制法。最常用的是雙抗夾心法檢測抗原,膠體金試紙條示意圖,測定時將試紙條下端浸入液體標本中，下端吸水材料即吸取液體向上端移動，流經(jīng)C處時使干片上的免疫金復合物復溶，并帶動其向膜條滲移。,測定,若標本中有待測特異抗原，即可與免疫金復合物中的抗體結合，此抗原抗體復合物流至測試區(qū)即被固相抗體捕獲，在膜上顯出紅色反應線條（T）。,測定,測定,過剩的免疫金復合物繼續(xù)前行，至參照區(qū)與固相抗小鼠IgG結合（免疫金復合物中的單克隆抗體為小鼠IgG），而顯出紅色質控線條（R）。,測定,陰性標本則無反應線條，而僅顯示質控線條。,膠體金快速診斷技術的特點,簡捷快速：操作簡單，一般只要5-10min就會出結果，而其它方法如ELISA需要1-2h，PCR需要時間更長。結果易于判定：陰、陽性呈色很明顯，肉眼很容易判斷。特異性好：因為該技術大多用單克隆抗體標記，這決定了它具有很好的特異性。,病毒性疾?。簜魅拘苑ㄊ夏也　⑶萘鞲?、新城疫、犬細小病毒、豬瘟等。寄生蟲疾?。貉x病、旋毛蟲病、囊蟲病、恙蟲病。細菌性疾病：霍亂弧菌、類鼻疽。,膠體金快速診斷技術的應用,H5亞型AIV尿囊液陽性結果,陰性對照,陰性對照