生物制藥工藝學(xué)精ppt課件

.,生物制藥工藝學(xué),生物制藥工藝學(xué)主講教師：吳梧桐教授,.,生物制藥工藝學(xué)主要參考書,1吳梧桐主編生物制藥工藝學(xué)第二版，北京，中國醫(yī)藥科技出版社，2006.2王志軍主編生物技術(shù)藥物研究開發(fā)和質(zhì)量控制，北京，科學(xué)出版社，2002.3吳劍波微生物制藥，北京，化學(xué)出版社，2002.雜志期刊：1.中國抗生素雜志.2.藥物生物技術(shù).3.中國生物工程學(xué)報(bào).4.中國生化藥物雜志.5.中國天然藥物.6.中國醫(yī)藥工業(yè).,.,生物制藥工藝學(xué)Biopharmaceuticalprocess,一、學(xué)習(xí)本課程的目的：1、培養(yǎng)自己掌握扎實(shí)的專業(yè)知識，具有創(chuàng)新、創(chuàng)業(yè)能力的高素質(zhì)人才，按聯(lián)合國科教文組織對世界大學(xué)生的要求：（1）Learntoknow.(2)Learntodo.(3)Learntobe.(4)Learntotogether.2、培養(yǎng)自己成為藥物研究、生產(chǎn)、流通、應(yīng)用與管理的專門人才。為人民的防病、治病、保健、康復(fù)提供療效好，副作用少，價(jià)格便宜，使用方便的生物藥物。,.,二、本課程的性質(zhì)：是生物技術(shù)、生物工程、海洋藥學(xué)、生化制藥、微生物制藥、生物技術(shù)制藥的專業(yè)必修課，也是藥學(xué)專業(yè)的重要選修課。三、本課程研究內(nèi)容是從事各類生物藥物的研究，生產(chǎn)和制劑工藝過程的一門綜合性應(yīng)用技術(shù)科學(xué)。（1）生化與微生物藥物制造工藝。（2）生物技術(shù)藥物與生物制品制造工藝。（3）其它生物醫(yī)藥產(chǎn)品（康復(fù)保健品）制造工藝。四、學(xué)習(xí)任務(wù)與要求：（1）掌握制造工藝基本原理及相關(guān)基礎(chǔ)理論。（2）熟練制造技術(shù)過程及制劑技術(shù)。（3）熟悉生物藥物的來源、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及臨床用途。,.,第一章生物藥物概述IntroductionofBiopharmaceutics,1藥物Medicine(remedy)藥物是用于預(yù)防、治療或診斷疾病與調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能、促進(jìn)康復(fù)促健的物質(zhì)，有4大類：（1）預(yù)防藥物：如疫苗、卡介苗、艾滋病疫苗、SARS疫苗、腫瘤疫苗。（2）治療藥物：如抗生素、INS、尿激酶。（3）診斷藥物：如肝腎功能檢查試劑盒、免疫診斷試劑盒。（4）康復(fù)保健藥物：如維生素、氨基酸、葉酸。,.,2藥品Drug直接用于臨床的藥物制劑產(chǎn)品，是特殊商品。藥品特點(diǎn)：有固定組成，明確規(guī)定有適應(yīng)癥、用法與用量，療程，并說明可能存在的毒副反應(yīng)。還規(guī)定使用有效期。藥品有3大類：（1）化學(xué)藥品，（2）生物藥品，（3）中藥（藥材，飲片，中成藥）。,.,生物藥物Biopharmaceutics,是以生物材料（生物體、生物組織或其成分：組織、細(xì)胞、細(xì)胞器、細(xì)胞成分、代謝物、排泄物）為原料，綜合應(yīng)用生物學(xué)、物理化學(xué)與現(xiàn)代藥學(xué)的原理與方法加工制成的藥物。通常有5類：（1）生化藥物Biochemicalmedicine（2）微生物藥物Microbialmedicine（3）海洋藥物Marinemedicine（4）生物制品Biologics(biologicals)（5）生物醫(yī)藥產(chǎn)品Biologicalmedicinalproducts,.,隨著生物技術(shù)藥物的快速發(fā)展，現(xiàn)代生物藥物已形成4大類：（1）重組DNA藥物（包括基因工程和蛋白質(zhì)工程藥物）（2）基因藥物geneticmedicine（核算類藥物，以遺傳物質(zhì)DNA、RNA為治療物質(zhì)基礎(chǔ)的藥物），如核算疫苗、反義藥物。（3）天然生物藥物（4）合成或半合成藥物。,.,第一節(jié)生物藥物的研究與發(fā)展前景,一、生物藥物研究發(fā)展現(xiàn)狀生物藥物的發(fā)展已走過傳統(tǒng)生物制藥技術(shù)和工業(yè)化生物制藥時(shí)代，從1982年10月rhIns上市，正式步入現(xiàn)代生物制藥階段。1、世界現(xiàn)狀：已上市200多種生物技術(shù)藥物，已進(jìn)入其臨床400種；其中200種進(jìn)入FDA審批，還有700多種進(jìn)入-期臨床，在各個(gè)不同臨床前研究的有2600多種。,.,二、生物藥物的發(fā)展與展望,1生物技術(shù)藥物研究已進(jìn)入蛋白質(zhì)工程藥物時(shí)代第一代重組藥物時(shí)代：一級結(jié)構(gòu)與功能和天然活性蛋白質(zhì)完全一樣；第二代重組藥物時(shí)代：對天然產(chǎn)物表達(dá)物進(jìn)行簡單修飾，如PEG化或糖基化；第三代重組藥物時(shí)代：蛋白質(zhì)工程藥物，在DNA水平上，合理設(shè)計(jì)、改造、創(chuàng)制新型治療蛋白。目的：（1）提高活性；（2）減少或消除毒副作用；（3）提高體內(nèi)外穩(wěn)定性；（4）產(chǎn)生新的功能特性。如：快速Ins，B9-SerB9-Asp,B27-ThrB27-Glu長效Ins,B21-AsnB21-Gly,B-C末端加入2個(gè)ArgPI由pH5.4pH6.8,.,2.中國現(xiàn)狀：（1）生產(chǎn)生化藥物100多種，抗生素近100種；（2）已批準(zhǔn)生物技術(shù)藥物30多種：如INF-1b,INF-2a,INF2b,INF-,IL-2,IL2-ser125,IL-11,G25F,GM-CSF,-SK，GH，EPO，TPO，EGF，EGF衍生物，bFGF，Ins，TNF衍生物，腦鈉素，心鈉素，抗IL-8單抗乳膏劑，胸苷激酶基因工程細(xì)胞制劑，CHO乙肝疫苗，痢疾疫苗，WuT3單抗（抗CD3CMAb，抗腎移植排斥），131I-chTNT人鼠嵌合型單抗（治肺癌），P53腺病毒抗癌注射劑，葡激酶等，已進(jìn)入臨床的有SARS疫苗，禽流感疫苗，艾滋病疫苗。中國生物制藥企業(yè)近代生物制藥企業(yè)通過GMP的廠家已近200家，年產(chǎn)值400多億元，僅占全國醫(yī)藥產(chǎn)值7.5%發(fā)展空間可觀（美國400多億美元/年），已開始進(jìn)入自主創(chuàng)新階段。如：（1）-bFGF(全球首家上市)；（2）思凱通（注射SK，1997年上市）；（3）注射用重組葡激酶（2003年上市）；（4）今又生Gendicine（P53腺病毒注射劑）；（5）TNF衍生物,.,2.哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物所占比重快速增加2000年已批準(zhǔn)創(chuàng)新生物技術(shù)藥物：酵母表達(dá)產(chǎn)品2種，E.coli表達(dá)產(chǎn)品4種，分子量均在3.5KDa6KDa,表示它表達(dá)多肽有優(yōu)勢，而通過動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)22種（包括抗體、酶、凝血因子）如：TNKase(t-pA突變體)；（58KDa）；AlsuraZyme（laromidase）(58KDa治療粘多糖病)Fabrazyme（Algasidasebeta,100KDa,治療Fabrys?。?.治療性抗體發(fā)展迅猛FDA已批準(zhǔn)17種治療性抗體，在抗腫瘤、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，防止感染、抗血小板凝集等方面療效突出。在369種進(jìn)入臨床試驗(yàn)的生物技術(shù)藥物中有75種是抗體類產(chǎn)品，預(yù)計(jì)2008年會(huì)有17種上市。如抗TNF嵌合抗體，TNF-R-Fc融合蛋白?？贵w人源化分為（1）嵌合抗體：用人源抗體恒定區(qū)替換鼠源抗體恒定區(qū)，保留抗體可變區(qū)。(2)人源化抗體:可變區(qū)中僅CDR（輕鏈可變區(qū)）為鼠源，其FR及恒定區(qū)均來自人源。,.,4、干涉RNA（RNAi）RNAinterference，是細(xì)胞內(nèi)外源性或內(nèi)源性雙鏈RNA，可引起與其同源的mRNA特異性降低，抑制基因表達(dá)，是抗病毒、抗腫瘤治療劑的重要設(shè)計(jì)方向。5、基因治療劑：DNA疫苗與基因藥物發(fā)展迅速，將功能基因與表達(dá)載體重組，導(dǎo)入人體細(xì)胞，使其在體內(nèi)表達(dá)活性蛋白，產(chǎn)生免疫或治療作用。已研究成功乳腺癌DNA疫苗（可能對病毒性腫瘤均可獲得成功），還有黑色瘤基因治療也取得突破（使病人晚期腫瘤消失），將病人的T-cell分離出來，用腫瘤抗原受體基因改造T-cell，再注入人體，可以對黑色素瘤產(chǎn)生有效清除作用。,.,第二節(jié)生物藥物的性質(zhì)與類別,一、生物藥物的特性（CharacterizationofBiopharmaceutics）（一）生物學(xué)特性：1、組成、結(jié)構(gòu)與天然活性物質(zhì)一致，是生物進(jìn)化與自然選擇的結(jié)果。2、具有調(diào)節(jié)、控制生物功能，戰(zhàn)勝疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)。3、對人體進(jìn)行補(bǔ)充、調(diào)整、增強(qiáng)、抑制，替換或糾正代謝失調(diào)更為合理和有效。4、活性強(qiáng)，毒副作用一般較少，針對性強(qiáng)，療效確切，還有營養(yǎng)作用。5、是創(chuàng)新藥物的優(yōu)良先導(dǎo)物，通過分子設(shè)計(jì)可以研制新型有效藥物，如從抑長素研制環(huán)己肽（環(huán)6肽）。28肽環(huán)6肽Pro-Phe-D-TrpPe-Thr-Lys,.,(二)、化學(xué)特性：（1）含量低、雜質(zhì)多、工藝復(fù)雜、收率低、技術(shù)要求高；（2）組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜，具嚴(yán)格空間結(jié)構(gòu)，才有生物活性。對多種物理、化學(xué)、生物學(xué)因素不穩(wěn)定，故研究時(shí)要執(zhí)行GLP規(guī)范，生產(chǎn)時(shí)要求GMP管理。（3）活性高，有效劑量小，對制品的有效性，安全性要嚴(yán)格要求（包括標(biāo)準(zhǔn)品的制訂）。,.,二、生物藥物的類別：共分4大類（一）天然生物藥物1微生物藥物microbilmedicine由微生物產(chǎn)生的生理活性物質(zhì)：包括初級及次級代謝產(chǎn)物和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。（1）抗生素：抗菌、抗腫瘤抗生素，如青霉素，鏈霉素，紅霉素，四環(huán)素，多粘菌素，兩性霉素B，氯霉素，利福霉素，磷霉素等。（2）酶抑制劑：如克拉維酸，-內(nèi)酰胺酶抑制劑(青霉素增效劑)（3）免疫抑制劑:如環(huán)孢霉素A,.,2生化藥物（含海洋藥物）：Biochemicalmedicine用生物化學(xué)的原理與技術(shù)從動(dòng)植物、海洋生物和微生物制取的生化活性物質(zhì)。（1）氨基酸類藥物aminoAcid如胱AA、色氨酸、精氨酸等。（2）多肽類藥物Polypeptide如縮宮素、加壓素等。（3）蛋白質(zhì)類藥物如人血白蛋白，r-球蛋白（4）酶類藥物如胃蛋白酶，尿激酶（5）輔酶類藥物如CoQ10,CoASH（6）核苷酸與核酸類藥物如RNA注射液：PolyI:C（7）多糖類藥物（polysaccharide）:如肝素、玻璃酸。（8）脂類藥物：如去氫膽酸，膽紅素、PGE1、PGE2。,.,（二）生物技術(shù)藥物（新生物制品）Biotech-drugs1.DNA重組藥物（DNArecombinantmedicine）基因工程與蛋白質(zhì)工程藥物（1）細(xì)胞因子干擾素類藥物:IFN,IFN-,IFN（2）細(xì)胞因子白介素類和腫瘤壞死因子:IL-2,IL-6,IL-11;TNF-,TNF-R（3）造血系統(tǒng)生長因子類：G-CSF,GM-CSF,EPO,TPO,SCF（4）重組蛋白和多肽類激素藥物：Ins，rHGH,FSH,LH,HCG（5）生長因子類藥物:EGF，PDGE，TGF，NGF（6）心血管病治療劑與酶制劑:水蛭素，t-PA，尿激酶，門冬酰胺酶（7）重組蛋白疫苗與基因工程治療性抗體：乙肝疫苗、丙肝疫苗、對淋巴瘤CD3單抗（OKT3）抗排斥。HER-2（表皮生長因子受體抗體），抗乳腺癌轉(zhuǎn)移（人源化抗體）,.,2.基因藥物（核酸類藥物）(1)核酸疫苗：將目的基因與表達(dá)載體構(gòu)建成重組體導(dǎo)入人體，使其表達(dá)免疫蛋白，呈遞免疫應(yīng)答，如乳腺癌疫苗。(2)反義藥物ISIS2900，用于治療巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎。（三）合成或半合成生物藥物：如催產(chǎn)素，降鈣素，PEG-腺苷脫氨酶，PEG-門冬酰胺酶,.,第二章生物制藥工藝技術(shù)基礎(chǔ)Basisofbiopharmaceuticaltechnology第一節(jié)微生物制藥工藝技術(shù)基礎(chǔ),一、菌種的選育與保芷1自然選育是一種純種選育方法，依據(jù)自發(fā)突變原理，通過不斷分離篩選，除去衰變型菌落，選擇高產(chǎn)菌，達(dá)到強(qiáng)化、復(fù)壯、穩(wěn)定生產(chǎn)目的。操作：單孢子懸浮液分離及單菌落培養(yǎng)篩選純培養(yǎng)：從一個(gè)單細(xì)胞微生物取得的后代培養(yǎng)稱純培養(yǎng)方法：（1）平板劃線法（2）稀釋平板法,.,2誘變育種（1）誘變處理：化學(xué)誘變；物理誘變（2）代謝調(diào)節(jié)選育（3）基因重組技術(shù)改變代謝途徑（4）原生質(zhì)體融合突變株篩選一般進(jìn)程如圖所示第三第四輪同第二輪,.,3菌種保存,（1）保存目的：防止退化（2）菌種退化檢查方法（3）菌種退化防止方法（4）菌種保芷方法：斜面低溫保存4，濕度105倍)已有高溫DNA聚合酶，故操作已自動(dòng)化（PCR儀）（3）化學(xué)合成法在已知DNA序列或多肽的一般結(jié)構(gòu)時(shí)，如鏈長在60bp100bp可用化學(xué)合成法直接合成DNA。,.,2DNA重組體的構(gòu)建將目的基因與基因載體連接，構(gòu)成重組體基因載體（Vector）有（1）E.coli載體如PBR322（非表達(dá)型載體）表達(dá)型：PUC質(zhì)粒，PKK233-3，PET系統(tǒng)：PET28a，PET32（2）芽孢桿菌載體如PUB110pE194和pC194（3）鏈霉菌載體如PIJ101PSG5（4）噬菌體載體如gt10(非表達(dá)型)gt11(表達(dá)型)*非表達(dá)型用于構(gòu)建克隆基因擴(kuò)增與鑒定，表達(dá)型用于構(gòu)建生產(chǎn)目的蛋白的工程菌。一般目的基因10Kb，可選用噬菌體DNA為載體。,.,cDNA與載體連接方法同聚尾連接法用3-脫氧核苷末端轉(zhuǎn)移酶，使cDNA與載體DNA3末端帶上互補(bǔ)同型多聚體序列：如質(zhì)粒-poly-C（或A）cDNA-poly-G(或T)兩者退火后，經(jīng)T4DNA連接酶封口，構(gòu)建重組體。,3脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶cDNAcDNA-polyA(C)dNTP載體DNA-polyT(G)人工接頭連接法用T4DNA連接酶在平端上連接上人工接頭，再用工具酶切開成粘性末端。目的基因+cDNA接頭工具酶（內(nèi)限性內(nèi)切酶）,.,3重組體的表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)方式常用有胞漿內(nèi)表達(dá)分泌表達(dá)周質(zhì)表達(dá)（1）原核表達(dá)系統(tǒng)E.coli；芽孢桿菌Bacillus；鏈霉菌StreptomycesE.coli表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)：易大量生產(chǎn)，成本低，周期短，相對較安全，已公認(rèn)可供大量生產(chǎn)。缺點(diǎn)：多為胞內(nèi)表達(dá)、純化困難，易生成包含體，復(fù)性困難，產(chǎn)物多為AuG(Met)起始密碼，有內(nèi)毒素污染的可能。,.,（2）真核表達(dá)系統(tǒng)1）酵母屬單細(xì)胞真核生物非分泌型載體如PA815,PPIc2,分泌型PHIL-S1優(yōu)點(diǎn)：易培養(yǎng)無毒性可分泌表達(dá)產(chǎn)物可糖基化常用酵母表達(dá)體系釀酒酵母（Saccharomycescoeviviae）表達(dá)，畢赤酵母（pichiapsatoris）特點(diǎn)：啟動(dòng)子為AOX1,屬乙醇氧化酶I基因,受甲醇誘導(dǎo)易高密度發(fā)酵,達(dá)100g/L(10%)已成功用于表達(dá)INF,乙肝表面抗原疫苗,Ins,Aibumin2）動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)體系A(chǔ)哺乳動(dòng)物細(xì)胞CHO(病毒質(zhì)粒為載體)B昆蟲細(xì)胞家蠶細(xì)胞,如生產(chǎn)INF,.,4表達(dá)與表達(dá)產(chǎn)物的純化（1）選擇高效表達(dá)工程菌，優(yōu)化發(fā)酵條件（培養(yǎng)基組成，接種量，溫度，溶氧，pH，誘導(dǎo)作用，發(fā)酵動(dòng)力學(xué)）進(jìn)行擴(kuò)大發(fā)酵.（2）分離純化要求：技術(shù)條件要溫和選擇性要高收率要高步驟要少，時(shí)間短E純度95%。,.,表達(dá)產(chǎn)物流程*inclusionbodies由表達(dá)產(chǎn)物重組蛋白,宿主蛋白和膜蛋白組成，以表達(dá)產(chǎn)物為主，其一級結(jié)構(gòu)正確，但空間結(jié)構(gòu)錯(cuò)誤，沒有活性，不溶于水，可低速離心收集包涵體，用變性劑SDS尿素，鹽酸胍溶解，再稀釋透析除去變性劑，使其復(fù)性。,.,為防止或減少包含體的形成常用方法：（1）降低培養(yǎng)溫度從37降到30可顯著降低包含體形成率。（2）以硫氧還原蛋白為載體進(jìn)行融合表達(dá)。硫氧還原蛋白是E.coil的一種同源蛋白，定位于粘附區(qū)，富含-SH,可保目的蛋白不發(fā)生分子錯(cuò)誤折疊，是一種熱穩(wěn)定蛋白，表達(dá)產(chǎn)物聚集于粘附區(qū)，通過振擾提取使產(chǎn)物進(jìn)入介質(zhì)中，再酶解就得到目的蛋白。,.,二、酶工程制藥技術(shù)基礎(chǔ)1、什么是酶工程（1）酶的發(fā)現(xiàn)，分離，純化與酶制劑的工業(yè)化應(yīng)用。（2）酶與細(xì)胞的固定化技術(shù)與酶反應(yīng)器。（3）生物酶工程：以基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)研究酶工程。（4）酶工程技術(shù)的工業(yè)化應(yīng)用。2、優(yōu)點(diǎn)（1）固定化穩(wěn)定性提高（2）可重復(fù)使用，提高使用效率，降低成本（3）提高強(qiáng)度，便于連續(xù)化，自動(dòng)化，規(guī)?；a(chǎn)（4）便于產(chǎn)物的分離、純化,.,3、制備方法：吸附法，包埋法、共價(jià)鍵結(jié)合法、交聯(lián)法（1）包埋法：將酶或細(xì)胞定位于凝膠高聚物網(wǎng)絡(luò)中，如卡拉膠，海藻膠，聚丙烯酰胺如用卡拉膠固定L-蘋果酸合成酶生產(chǎn)L-蘋果酸，卡拉膠加水（加熱）溶解成5%（冷卻40）加入產(chǎn)酶菌體（攪拌均勻）冷卻（冷凍）切塊（1-2CM2）KCl固化裝柱（2）共價(jià)鍵結(jié)合法：酶分子與載體分子，通過化學(xué)偶聯(lián)使酶與載體共價(jià)結(jié)合，一般純酶固定化，用此法適用批量小，附加值高的產(chǎn)品生產(chǎn)。如用CNBr活化纖維素載體再與酶蛋白共價(jià)結(jié)合。利用固定化胰蛋白酶親和層析制備胰蛋白酶抑制劑（3）交聯(lián)法：用雙功能試劑，將酶與載體交聯(lián)固定化如用二醛和明膠交聯(lián)固定化前列腺素合成酶合成PGE1，PGE2,.,4固定化酶性質(zhì)：（1）通過固定化酶活一般下降，因酶的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，或酶與底物結(jié)合時(shí)有空間位阻，因此要測定固定化酶的表現(xiàn)活力，再計(jì)算總活力，并與使用半衰期的延長時(shí)間，統(tǒng)計(jì)分析固定化工藝的有效性（2）提高穩(wěn)定性，因固定化酶表現(xiàn)活力下降，但穩(wěn)定性提高，因此其穩(wěn)定性和測定對評價(jià)工藝效益十分重要，半衰期t1/2=0.693KDKD=2.303lg(ED)/(E)為起始活力，E為時(shí)間t后殘留活力。故常常要研究E的操作，儲(chǔ)存穩(wěn)定性或?qū)H對熱的穩(wěn)定性和對蛋白酶的穩(wěn)定性。通過E一般可以提高穩(wěn)定性（包括對溫度，pH，蛋白酶，變性劑和抑制劑的耐受程度）因此有利工業(yè)化的連續(xù)化與自動(dòng)化應(yīng)用。所以在生物工藝中就得到廣泛應(yīng)用。如制造r-氨基丁酸，天冬氨酸，L-蘋果酸，丙氨酸，色氨酸，苯丙氨酸等。還用于從丙烯氰生產(chǎn)丙烯酰胺,.,第四節(jié)生物制藥工藝中試放大設(shè)計(jì)一、中試放大目的與規(guī)模1目的：（1）建立穩(wěn)定工藝、大批量制備足量合格產(chǎn)品，供應(yīng)臨床前與臨床研究；（2）研究工藝參數(shù)制定工藝規(guī)程和檢定規(guī)程，為正式生產(chǎn)提供工藝參數(shù)，保證能在以后生產(chǎn)中應(yīng)用。二、規(guī)模：中試是由小試轉(zhuǎn)入工業(yè)化生產(chǎn)的過渡性研究，是取得成功產(chǎn)業(yè)化的關(guān)鍵。,.,三、中試放大特點(diǎn)1、改進(jìn)小試操作，穩(wěn)定工藝2、提高收率，提高產(chǎn)品質(zhì)量3、降低消耗，確定原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)4、形成批量生產(chǎn)，制定制造規(guī)程和檢定規(guī)程四、中試放大時(shí)應(yīng)具備的條件（1）有穩(wěn)定的工藝：收率，質(zhì)量可靠（2）操作條件基本確立（3）已建立中間品和成品分析方法（4）生物材料已鑒定（5）物料平衡、三廢處理已基本解決（6）中試規(guī)模、產(chǎn)品產(chǎn)量，規(guī)模已確定（7）安全生產(chǎn)已有方案,.,五中試放大要解決的問題（1）原輔材料規(guī)格（2）設(shè)備選型與材質(zhì)選用（3）反應(yīng)條件（4）原輔料中間品、產(chǎn)品質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)與檢定方法（5）下游工藝優(yōu)化與穩(wěn)定制造規(guī)程的制定六中試放大方法與總結(jié)內(nèi)容1、放大方法（1）經(jīng)驗(yàn)放大（2）相似放大（3）數(shù)學(xué)模型放大2、總結(jié)內(nèi)容：（1）確定工藝路線，優(yōu)化工藝條件，制定制造規(guī)程。（2）制定崗位操作、投產(chǎn)（3）進(jìn)行材料衡算（4）安全生產(chǎn)與處理（5）原輔料及產(chǎn)品質(zhì)控方法與標(biāo)準(zhǔn)測定。（6）產(chǎn)品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)制定（7）消耗定額，成本核算，工時(shí)，生產(chǎn)周期計(jì)算。中試完