微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-2培養(yǎng)基的制備與高壓蒸汽滅菌ppt課件

.,1,微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-2,實(shí)驗(yàn)三培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)四高壓蒸汽滅菌,.,2,實(shí)驗(yàn)三培養(yǎng)基的制備,實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告思考題,明確培養(yǎng)基的配置原理。通過(guò)對(duì)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,1.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備2.高氏一號(hào)培養(yǎng)基的制備3.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）的制備,1溶液或試劑：牛肉膏，蛋白胨，瓊脂，可溶性淀粉，葡萄糖，NaCl，KNO3，K2HPO43H2O，MgSO47H2O，F(xiàn)eSO47H2O，lmol/LNaOHlmol/LHCl。2儀器或其他用具：試管，三角瓶，燒杯，量筒，玻棒，培養(yǎng)基分裝器，天平，牛角匙，電爐，高壓蒸汽滅菌鍋，pH試紙（pH5.59.0），棉花，牛皮紙，記號(hào)筆，麻繩，紗布等。,實(shí)驗(yàn)器材,牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂15.020.0g水1000mlpH7.47.6,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方,可溶性淀粉20.0gKNO31.0gNaCl0.5gK2HPO43H2O0.5gMgSO47H2O0.5gFeSO47H2O0.01g瓊脂15.020.0g水1000mlpH7.47.6,高氏一號(hào)培養(yǎng)基配方,馬鈴薯（去皮）200g葡萄糖20g瓊脂1520g水1000mlpH自然,PDA培養(yǎng)基的配方,制法：先將新鮮無(wú)病害的馬鈴薯洗凈，去皮后切成小薄片，稱200克，加水1000毫升，煮沸20分鐘后過(guò)濾，其濾汁為馬鈴薯煮汁，然后加瓊脂和葡萄糖煮溶，后補(bǔ)足水分至1000毫升，裝管（瓶）滅菌備用。,Na2HPO412H2O1.3gKH2PO43H2O0.36gNaCl0.5g脫脂牛奶100ml瓊脂15.020.0g水900mlpH7.2,脫脂乳培養(yǎng)基配方,1.稱量在上述燒杯中先加人少于所需要的水量，按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取放入燒杯中用玻棒攪勻。2.溶化在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解，并加水補(bǔ)足體積。3.調(diào)pH在未調(diào)pH前，先用pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入lmolLNaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH，直至pH達(dá)7.6。反之，用lmolLHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。,實(shí)驗(yàn)方法,4.過(guò)濾用濾紙或多層紗布過(guò)濾。一般無(wú)特殊要求的情況下，這一步可以省去。5.分裝按實(shí)驗(yàn)要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角燒瓶?jī)?nèi)。分裝試管，其裝量不超過(guò)管高的1/5，滅菌后制成斜面。,6.加塞在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進(jìn)人培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能。7.包扎在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時(shí)冷凝水潤(rùn)濕棉塞，其外再用繩子扎好。注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。8.滅菌將上述培養(yǎng)基以0.103MPa121，20min高壓蒸汽滅菌。,9.擺斜面將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長(zhǎng)度以不超過(guò)試管總長(zhǎng)的一半為宜。,1.蛋白胨很易吸濕，在稱取時(shí)動(dòng)作要迅速。另外，稱藥品時(shí)嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈，擦干，再稱取另一藥品。2.在瓊脂溶化過(guò)程中，應(yīng)控制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器。配置培養(yǎng)基時(shí)，不可用銅或鐵鍋加熱熔化，以免離子進(jìn)入培養(yǎng)基中，影響細(xì)菌生長(zhǎng)。3.pH不要調(diào)過(guò)頭，以避免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。4.分裝過(guò)程中，注意不要使培養(yǎng)基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。,注意事項(xiàng),1培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無(wú)菌的？2在配制培養(yǎng)基的操作過(guò)程中應(yīng)注意些什么問(wèn)題？為什么？,思考題,.,16,實(shí)驗(yàn)四高壓蒸汽滅菌,實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)思考題,了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍。學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌的操作方法。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加熱滅菌鍋內(nèi)，通過(guò)加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒羝呐蛎泬?，所以，?dāng)水蒸汽中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。,實(shí)驗(yàn)原理,滅菌鍋內(nèi)留有不同分量空氣時(shí)，壓力與溫度的關(guān)系,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基高氏一號(hào)培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、移液管手提式高壓蒸汽滅菌鍋等,實(shí)驗(yàn)器材,1.加水：將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水使水面與三角擱架相平為宜。,實(shí)驗(yàn)方法,2.放回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌物品。,3.加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓。,4.通電加熱，待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)用0.1Mpa，121.5，20min滅菌。5.滅菌所需的時(shí)間到后，關(guān)閉電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表降至“0”時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品。6.將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37溫箱培養(yǎng)24h，經(jīng)檢查若無(wú)雜菌生長(zhǎng)，即可待用。,每組準(zhǔn)備下列物品（滅菌）,1.培養(yǎng)基2瓶（500ml培養(yǎng)基用250ml三角瓶分裝）2.試管10支（內(nèi)裝3ml培養(yǎng)基）3.無(wú)菌水1瓶（150ml三角瓶，內(nèi)裝99ml水、玻璃珠）4.試管4支（內(nèi)裝9ml水）5.培養(yǎng)皿2包（20個(gè)）,1切勿忘記加水，同時(shí)加水量不可過(guò)少，以防滅菌鍋燒干而引起炸裂事故。2壓力一定要降到“0”時(shí)，才能打開(kāi)排氣閥，開(kāi)蓋取物。否則就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然