GB 5009.222-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中桔青霉素的測(cè)定

016    前  言本標(biāo)準(zhǔn)代替008紅曲類產(chǎn)品中桔青霉素的測(cè)定、24262010進(jìn)出口糧谷中桔霉素含量檢測(cè)方法 液相色譜法和29162011出口食品中桔霉素的測(cè)定方法 免疫親和柱凈化本標(biāo)準(zhǔn)與008相比,主要變化如下:標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中桔青霉素的測(cè)定”;增加了凈化步驟;增加了適用范圍。0161    食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中桔青霉素的測(cè)定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中桔青霉素的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)第一法適用于大米、玉米、辣椒、紅曲類產(chǎn)品中桔青霉素的測(cè)定,第二法適用于大米、大麥、燕麥、小麥中桔青霉素的測(cè)定。第一法 免疫親和柱凈化理試樣中的桔青霉素用甲醇取液經(jīng)過(guò)濾、稀釋后,用免疫親和柱凈化,采用液相色譜結(jié)合熒光檢測(cè)器測(cè)定桔青霉素的含量,外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說(shuō)明,本方法所用試劑均為分析純,水為醇(色譜純。腈(色譜純。酸(色譜純。乙酸(色譜純。氧化鈉(溫20(化鈉(酸氫二鈉(酸二氫鉀(化鉀(氧化鈉溶液(2):于1 磷酸溶液(10,2 磷酸溶液(10,2 水溶解,0162    水定容至1000 溫20確移取1 酸溶液:準(zhǔn)確移取1 洗脫液:甲醇磷酸溶液(70+30)。脫液:酸溶液(70+30)。準(zhǔn)品桔青霉素(18純度或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱取一定量的桔青霉素標(biāo)準(zhǔn)品,度為100g/4下保存。準(zhǔn)中間液:甲醇定容,濃度為10g/4下保存。質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液:根據(jù)需要,取適量的標(biāo)準(zhǔn)中間液,用空白樣品提取液配成不同濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。青霉素免疫親和柱:柱體積3大柱容量20等效柱。璃纖維濾紙:直徑11 效液相色譜儀,配熒光檢測(cè)器。析天平:速均質(zhì)器:12000r/勻器。5 米、玉米、150入500+30)提取液,以高速均質(zhì)器高速均質(zhì)提取2濾提取液,于另一干凈的容器中,加入49磷酸溶液(釋、混勻;以玻璃纖濾紙過(guò)濾待免疫親和柱凈化。50入200+30)提取液,以高速均質(zhì)器高速均質(zhì)提取2濾提取液,于另一干凈的容器中,加入39勻;以玻璃纖濾紙過(guò)濾待免疫親和柱凈化。0163    米、玉米、辣椒將免疫親和柱連接于10述澄清濾液過(guò)免疫親和柱,以1滴/s2滴/入5磷酸(1滴/s2滴/至空氣進(jìn)入到親和柱中,棄去全部流出液。行洗脫,洗脫流速為1滴/s2滴/s。收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測(cè)用。曲及其制品將免疫親和柱連接于101滴/s2滴/溫201滴/s2滴/至空氣進(jìn)入到親和柱中,棄去全部流出液。紅曲及其制品)進(jìn)行洗脫,洗脫流速為1滴/s2滴/s。收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測(cè)用。白試驗(yàn)除不加試樣外,均按上述操作步驟進(jìn)行。米、玉米、辣椒液相色譜分析條件列出如下:a) 色譜柱:長(zhǎng)150徑5m,或等效柱;b) 柱溫:30;c) 流速:d) 進(jìn)樣量:50L;e) 檢測(cè)條件:激發(fā)波長(zhǎng)350射波長(zhǎng)500nm;f) 流動(dòng)相腈,流動(dòng)相0磷酸(流動(dòng)相及梯度洗脫條件見(jiàn)表1。表1 流動(dòng)相及梯度洗脫條件時(shí)間/流動(dòng)相曲及其制品液相色譜分析條件列出如下:a) 色譜柱:長(zhǎng)150徑5m,或等效柱;0164    b) 柱溫:30;c) 流速:d) 進(jìn)樣量:50L;e) 檢測(cè)條件:激發(fā)波長(zhǎng)350射波長(zhǎng)500nm;f) 流動(dòng)相腈,流動(dòng)相酸。流動(dòng)相及梯度洗脫條件見(jiàn)表2。表2 流動(dòng)相及梯度洗脫條件時(shí)間/流動(dòng)相儀器最佳工作條件下,用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)樣,以相應(yīng)的桔青霉素的色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo),以基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中桔青霉素的濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入高效液相色譜儀,測(cè)定相應(yīng)的峰面積。由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中桔青霉素的濃度。6 分析結(jié)果的表述試樣中桔青霉素含量按式(1)計(jì)算:X=V(1)式中:X試樣中桔青霉素的含量,單位為微克每千克(g/樣液中桔青霉素的濃度,單位為微克每升(g/L);V定容體積,單位為毫升(f樣液稀釋倍數(shù);m樣液所代表的試樣量,單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。0165    8 其他本方法中大米、玉米、辣椒粉樣品的檢出限和定量限分別為8g/曲及其制品的檢出限和定量限分別為25g/二法 理用乙腈18固相萃取小柱凈化,用配熒光檢測(cè)器的液相色譜儀測(cè)定,外標(biāo)法定量。10 試劑和材料除非另有說(shuō)明,本方法所用試劑均為分析純,水為丙醇(色譜純。腈(色譜純。酸(優(yōu)級(jí)純。醇(取溶劑:乙腈5+10+55),酸溶液():水定容至1L。動(dòng)相:乙腈5+10+55)。準(zhǔn)品桔青霉素(18純度99%。或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。青霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱取適量桔青霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),4保存。青霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液:根據(jù)需要用流動(dòng)相將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成25ng/0ng/00ng/00ng/000ng/18固相萃取柱:填料500體積3等效柱。璃纖維濾紙:直徑110166    11 效液相色譜儀:配有熒光檢測(cè)器。蕩器。心機(jī):6500r/空固相萃取裝置。吹儀。析天平:2 取取樣品500g,用粉碎機(jī)粉碎并通過(guò)830勻,分成2份,裝入潔凈容器內(nèi),密封保存。稱取試樣約5g(5010在振蕩器上振蕩提取303500r/清液轉(zhuǎn)入另一離心管中。在殘?jiān)性偌尤?重復(fù)上述操作,合并上清液。在提取液中加水至40玻璃纖維濾紙,待凈化。化將上述溶液過(guò)預(yù)淋洗好的5淋洗液全部流出柱子后,減壓抽干3集全部洗脫液,在40下,液相色譜測(cè)定。白試驗(yàn)除不加試樣外,均按上述操作步驟進(jìn)行。相色譜參考條件a) 色譜柱:長(zhǎng)250徑5m,或等效者;b) 流動(dòng)相:乙腈5+10+55);c) 流速:d) 進(jìn)樣量:50L;e) 柱溫:28;f) 檢測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng)331射波長(zhǎng)500譜測(cè)定根據(jù)樣液中被測(cè)桔青霉素含量情況,選定峰面積相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液中桔青霉素響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液等體積參插進(jìn)樣測(cè)定。在上述色譜條件下,3 分析結(jié)果的表述試樣中桔青霉素含量按式(2)計(jì)算:0167    X=Am(2)式中:X試樣中桔青霉素含量,單位為微克每千克(g/A樣液中桔青霉素的峰面積;標(biāo)準(zhǔn)工作液中桔青霉素的濃度,單位為微克每升(g/L);V樣液最終定容體積,單位為毫升(標(biāo)準(zhǔn)工作液中桔青霉素的峰面積;m最終樣液所代表的試樣量,單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果需扣除空白值,測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。14 精密度在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平