分析方法驗(yàn)證與確認(rèn)管理規(guī)程

1、3 定義3.1 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證：證明采用的方法適用于相應(yīng)檢測(cè)要求。 3.2 檢驗(yàn)方法確認(rèn)：證明使用法定方法在目前實(shí)驗(yàn)室條件下是否能獲得可靠結(jié)果，是否適用于相應(yīng)的檢測(cè)工作。在本質(zhì)上和驗(yàn)證一樣，但不一定是驗(yàn)證項(xiàng)目的全部。3.3 藥典方法：經(jīng)過(guò)國(guó)家藥監(jiān)部門(mén)批準(zhǔn)的藥典收載的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)方法3.4 法定方法：法定方法包括藥典方法、國(guó)標(biāo)方法等。3.5 準(zhǔn)確度：是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率表示。3.6 精密度：是指在規(guī)定的測(cè)試條件下同一個(gè)均勻供試品經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。3.7 重復(fù)性：在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性。3.8 中間

2、精密度：在同一個(gè)試驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果之間的精密度稱為中間精密度。3.9 重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的精密度稱為重現(xiàn)性。3.10 專屬性：是指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)物質(zhì)的特性。3.11 檢測(cè)限：是指供試品中被測(cè)物能被檢出的最低量。3.12 定量限：是指供試品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量。3.13 線性：是指在設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接成正比關(guān)系的程度。3.14 范圍：是指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低濃度或量的區(qū)間。3.15 耐用性：是指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)

3、，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。4 職責(zé)4.1 標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證崗4.1.1 提升現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)工作時(shí)，對(duì)研究后確定的標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行檢驗(yàn)方法驗(yàn)證工作，以確保檢驗(yàn)方法的適用性、科學(xué)性。4.1.2 對(duì)技術(shù)部移交的新品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)方法適用性、科學(xué)性。4.1.3 對(duì)技術(shù)部移交的新品應(yīng)研究建立設(shè)備清潔驗(yàn)證殘留物檢驗(yàn)方法，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。4.2 理化檢驗(yàn)崗4.2.1 對(duì)首次采用的藥典或國(guó)標(biāo)檢驗(yàn)方法，進(jìn)行檢驗(yàn)方法確認(rèn)工作，以證明檢驗(yàn)方法的適用性，確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠。4.2.2 對(duì)標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證崗研究后確定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案中變更后的檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)。4.3 微生物崗4.3.1 凡有國(guó)家檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)成品或中間

4、體微生物限度檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)過(guò)的，則該方法可直接用于檢驗(yàn)，否則需要按照藥典附錄要求進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。4.3.2 建立產(chǎn)品的微生物限度檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證和控制菌檢查方法的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)和控制菌的測(cè)定。5 規(guī)程內(nèi)容5.1 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的基本原則用于檢驗(yàn)的分析方法符合下列情形之一但不限于以下情況的，應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證：5.1.1 新建的檢驗(yàn)方法，包括新建的產(chǎn)品檢驗(yàn)方法和設(shè)備清潔驗(yàn)證殘留物檢驗(yàn)方法等。5.1.2 檢驗(yàn)方法需變更的。5.1.3 采用中華人民共和國(guó)藥典及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法。5.1.4 法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方

5、法。5.1.5 將法定方法用于測(cè)定新藥，或?qū)⒛骋黄贩N的法定測(cè)定方法用于另一品種。5.1.6 檢驗(yàn)用設(shè)備主要部分改變。5.1.7 藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更。5.1.8 檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響到檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，方法應(yīng)重新驗(yàn)證。5.2 需要驗(yàn)證的分析項(xiàng)目有：5.2.1 理化檢驗(yàn)方法：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)定量檢查或限度檢查、原料藥或制劑中有效成分含量測(cè)定，以及制劑中其他成分（如防腐劑等）的測(cè)定。藥品溶出度、釋放度等檢查中，其溶出量等的測(cè)試方法也應(yīng)做必要的驗(yàn)證。5.2.2 微生物檢驗(yàn)方法：細(xì)菌、霉菌和酵母菌的定量檢查，控制菌的定性檢查。5.3 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證內(nèi)容有：5.3.1 理化檢驗(yàn)方法：準(zhǔn)確度、精密度

6、（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。視具體方法擬定方案。5.2項(xiàng)下列出的分析項(xiàng)目和相應(yīng)的驗(yàn)證內(nèi)容可供參考。5.3.2 微生物限度檢驗(yàn)方法：微生物限度檢驗(yàn)方法：細(xì)菌、霉菌和酵母菌數(shù)的計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證（菌液回收率），控制菌的專屬性的驗(yàn)證。5.4 檢驗(yàn)方法應(yīng)有詳細(xì)說(shuō)明，并提供足夠的信息，能使經(jīng)過(guò)正確培訓(xùn)的檢驗(yàn)人員可靠的進(jìn)行檢驗(yàn)。5.4.1 理化檢驗(yàn)方法要說(shuō)明的內(nèi)容至少應(yīng)包括檢測(cè)條件（如色譜檢測(cè)器）、所需試劑、對(duì)照品、結(jié)果計(jì)算的公式和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。5.4.2 微生物檢驗(yàn)方法要說(shuō)明的內(nèi)容至少應(yīng)包括使用的菌種、菌液含量、所需培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、計(jì)數(shù)方法、結(jié)果

7、計(jì)算的公式。5.5 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證應(yīng)該依據(jù)驗(yàn)證方案執(zhí)行。方案應(yīng)該包括所有項(xiàng)目的檢測(cè)方法和接受標(biāo)準(zhǔn)。驗(yàn)證結(jié)果應(yīng)如實(shí)填寫(xiě)，準(zhǔn)確完整記錄在驗(yàn)證報(bào)告中。5.6 理化檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的分析項(xiàng)目 項(xiàng)目?jī)?nèi)容鑒別限量檢查含量測(cè)定及溶出量測(cè)定定量限度準(zhǔn)確性+重復(fù)性+中間精密度+重現(xiàn)性+專屬性+檢測(cè)限+定量限+線性+范圍+耐用性+注：已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需要驗(yàn)證中間精密度。重現(xiàn)性只有在該分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)做。如有一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充。以上表中列舉了在不同類型的分析方法驗(yàn)證中被認(rèn)為是最重要的項(xiàng)目，“”表示通常不需要驗(yàn)證的項(xiàng)目，“+”表示通常需要驗(yàn)證的項(xiàng)目，如遇特殊情況，仍應(yīng)根據(jù)具體分析對(duì)象和情

8、況而定。5.7 檢驗(yàn)方法確認(rèn)的基本原則5.7.1 法定方法中的鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)定量檢查或限度檢查、原料藥或制劑中有效成分含量測(cè)定需要酌情考慮進(jìn)行方法確認(rèn)，其余方法不需要進(jìn)行確認(rèn)。5.7.2 從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)方法轉(zhuǎn)移，可采用對(duì)照試驗(yàn)法，即取同一批樣品，按此法在兩實(shí)驗(yàn)室分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將結(jié)果進(jìn)行比較。5.7.3 檢驗(yàn)方法確認(rèn)內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）專屬性、定量限。視具體方法擬定方案。5.8項(xiàng)下列出的分析項(xiàng)目和相應(yīng)的確認(rèn)內(nèi)容可供參考。5.7.4 檢驗(yàn)方法確認(rèn)應(yīng)依據(jù)確認(rèn)方案執(zhí)行。方案應(yīng)該包括所有項(xiàng)目的檢測(cè)方法和接受標(biāo)準(zhǔn)。確認(rèn)結(jié)果應(yīng)如實(shí)填寫(xiě)，準(zhǔn)確完整記錄在確認(rèn)

9、報(bào)告中。5.8 理化檢驗(yàn)方法確認(rèn)的分析項(xiàng)目原料藥理化檢驗(yàn)方法確認(rèn)的項(xiàng)目項(xiàng)目?jī)?nèi)容鑒別有關(guān)物質(zhì)檢查含量測(cè)定滴定法HPLC準(zhǔn)確度精密度視情況而定視情況而定視情況而定專屬性視情況而定+視情況而定檢測(cè)限定量限+制劑理化檢驗(yàn)方法確認(rèn)的項(xiàng)目項(xiàng)目?jī)?nèi)容鑒別檢查（不溶性微粒檢查、含量均勻度、溶出度檢查）雜質(zhì)（有關(guān)物質(zhì)、殘留溶劑）含量測(cè)定準(zhǔn)確度視情況而定視情況而定視情況而定精密度+專屬性+檢測(cè)限定量限視情況而定+注：以上表中列舉了在不同類型的檢驗(yàn)方法確認(rèn)中被認(rèn)為是最重要的項(xiàng)目，“”表示通常不需要確認(rèn)的項(xiàng)目；“+”表示通常需要確認(rèn)的項(xiàng)目；如遇特殊情況，仍應(yīng)根據(jù)具體分析對(duì)象和情況而定。5.9 理化檢驗(yàn)方法驗(yàn)證各分析項(xiàng)目

10、的內(nèi)容描述5.9.1 準(zhǔn)確度：用于定量測(cè)定的分析方法均需做準(zhǔn)確度驗(yàn)證。準(zhǔn)確度一般用回收率表示，應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)試。5.9.1.1 可用已知純度的做加樣回收測(cè)定，即于已知被測(cè)成分含量的供試品中再加入一定量的已知純度的被測(cè)成分對(duì)照品，依法測(cè)定。用實(shí)際值與供試品中含有量之差，除以加入對(duì)照品量計(jì)算回收率。 公式中：A表示供試品所含被測(cè)成分量，一般是采用重復(fù)性結(jié)果的均值。B表示加入對(duì)照品量 C表示實(shí)測(cè)值5.9.1.2 數(shù)據(jù)要求：a）在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，加入的的量與所取供試品含量之比控制在1：1左右；b）或設(shè)計(jì)3不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用

11、9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，一般中間濃度加入量與所取供試品含量之比控制在1：1左右。5.9.1.3 記錄結(jié)果：應(yīng)報(bào)告供試品取樣量、供試品中含有量、對(duì)照品加入量、測(cè)定結(jié)果和回收率（%）計(jì)算值，以及回收率（%）的相對(duì)平均偏差（RSD%）。5.9.2 精密度：5.9.2.1 精密度包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)表示。5.9.2.2 重復(fù)性：在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或者設(shè)計(jì)3不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定,用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。5.9.2.3 中間精密度：是同一實(shí)驗(yàn)室的變化（通常是不同日期，不同分析人員、不同的設(shè)備

12、等），測(cè)定結(jié)果之間的精密度。如果進(jìn)行重現(xiàn)性評(píng)價(jià)，中間精密度就不需要了。5.9.2.4 重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室、不同分析人員檢驗(yàn)相同產(chǎn)品的結(jié)果應(yīng)平行，樣品批數(shù)至少是3批。5.9.3 專屬性：5.9.3.1 應(yīng)該在鑒別試驗(yàn)，限度檢查、含量測(cè)定等方法均應(yīng)考察其專屬性。5.9.3.2 鑒別試驗(yàn)：以不含被測(cè)成分的供試品（除去含待測(cè)成分藥材或不含待測(cè)成分的模擬方），不得干擾測(cè)定，以說(shuō)明方法的專屬性。應(yīng)附加相應(yīng)的代表性圖像或圖譜。5.9.3.3 含量測(cè)定和限量檢查：以不含被測(cè)成分的供試品（除去含待測(cè)成分藥材或不含待測(cè)成分的模擬方），不得干擾測(cè)定，以說(shuō)明方法的專屬性。色譜法、光譜法等應(yīng)附代表性圖譜，并表明相關(guān)成分

13、在圖中的位置，色譜中的分離度應(yīng)符合要求。必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行峰純度檢查。5.9.4 檢測(cè)限：確定檢測(cè)限的常用方法如下：5.9.4.1 直觀法：用一系列已知濃度的供試品進(jìn)行分析，試驗(yàn)出能被可靠的檢測(cè)的最低濃度或量。5.9.4.2 信噪比法：僅適用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度供試品的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1或2：1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率：檢測(cè)限度其中S：校正曲線的斜率，S值是被分析物的校正曲線的斜率。：響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差，值可根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)差：通過(guò)分析11份空白樣

14、品的分析，測(cè)出分析背景響應(yīng)值的大小，然后計(jì)算這些響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。5.9.4.3 數(shù)據(jù)要求：應(yīng)附測(cè)試圖譜，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和檢測(cè)限結(jié)果。5.9.5 定量限：確定檢測(cè)限的常用方法如下：5.9.5.1 信噪比法：僅適用于能顯示基線噪音的分析方法。一般以信噪比為10：1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率：定量限度。S：校正曲線的斜率 ：響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差S值是被分析物的校正曲線的斜率。值可根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)差：通過(guò)分析11份空白樣品的分析，測(cè)出分析背景響應(yīng)值的大小，然后計(jì)算這些響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。5.9.5.2 數(shù)據(jù)要求：應(yīng)附測(cè)試圖譜，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和定量限結(jié)果。5.9.6 線性：5.9.

15、6.1 可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試品的方法進(jìn)行測(cè)定，至少制備6個(gè)濃度的供試品。5.9.6.2 以測(cè)得的相應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。5.9.7 范圍：應(yīng)依據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果及要求確定。無(wú)特殊要求時(shí)，通常采用以下標(biāo)準(zhǔn)。5.9.7.1 原料藥和制劑的含量測(cè)定，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80%120%。5.9.7.2 制劑含量均勻度檢查，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度70%130%，根據(jù)劑型特點(diǎn)，如氣霧劑和噴霧劑，范圍可適當(dāng)放寬。5.9.7.3 溶出度應(yīng)為測(cè)試或釋放度的溶出量

16、測(cè)定，范圍應(yīng)為限度的20%；如果規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的20%至上限的+20%。5.9.7.4 如果含量測(cè)定與雜質(zhì)檢查同時(shí)測(cè)定，用面積歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的20%至含量限度（或上限）的+20%。5.9.7.5 雜質(zhì)測(cè)定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)測(cè)，擬定出規(guī)定的限度的+20%。5.9.7.6 對(duì)于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其范圍應(yīng)大于限定含量的區(qū)間。5.9.8 耐用性：試驗(yàn)說(shuō)明小的變動(dòng)能否通過(guò)設(shè)計(jì)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以確保方法有效。如果測(cè)試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫(xiě)明。5.9.8.1 液相色譜法中變動(dòng)因素有：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時(shí)間，流動(dòng)相的組成比例或pH值，不

17、同廠牌或批號(hào)的同類型色譜柱，柱溫，流速及檢測(cè)波長(zhǎng)等。5.9.8.2 氣相色譜法變動(dòng)因素有：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時(shí)間，不同廠牌或批號(hào)的同類型色譜柱，柱溫，固定相，不同類型的擔(dān)體，柱溫，進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等。5.9.8.3 薄層色譜的變動(dòng)因素有：不同廠牌的薄層板，點(diǎn)樣方式及薄層展開(kāi)時(shí)溫度及相對(duì)濕度等。5.10 微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的內(nèi)容計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證：細(xì)菌、霉菌和酵母菌的定量檢測(cè)5.10.1 各試驗(yàn)組制備方法：5.10.1.1試驗(yàn)組：a） 平皿法計(jì)數(shù)時(shí)，取試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液1ml 和50100cfu 試驗(yàn)菌，按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。b）薄膜過(guò)濾法計(jì)數(shù)時(shí)，取規(guī)定量試驗(yàn)可能用的最低稀釋

18、級(jí)供試液，過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入50100cfu 試驗(yàn)菌，過(guò)濾，按薄膜過(guò)濾法測(cè)定其菌數(shù)。5.10.1.2 菌液組：測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù)，菌液含量在50100cfu。5.10.1.3 供試品對(duì)照組：取規(guī)定量供試液，按菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定供試品本底菌數(shù)，供試品對(duì)照組含菌量不能超過(guò)10 cfu/ml。5.10.1.4 稀釋劑對(duì)照組：若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過(guò)濾等特殊處理時(shí)，應(yīng)增加稀釋劑對(duì)照組，以考察供試液制備過(guò)程中微生物受影響的程度。試驗(yàn)時(shí)，可用相應(yīng)的稀釋液替代供試品，加入試驗(yàn)菌，使最終菌濃度為每1ml 供試液含50100cfu，按試驗(yàn)組的供試液制備方法和菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定

19、其菌數(shù)。5.10.2 計(jì)數(shù)方法檢測(cè)：計(jì)數(shù)方法包括平皿法、薄膜過(guò)濾法、培養(yǎng)基稀釋法及中和法。驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3 次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。菌液回收率%=5.10.3 結(jié)果判斷：在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的菌回收率（稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）應(yīng)均不低于70%。若試驗(yàn)組的菌回收率（試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）均不低于70%，照該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測(cè)定供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)，驗(yàn)證通過(guò)；若任一次試驗(yàn)中試驗(yàn)組的菌回收率低于70%，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過(guò)濾法、中和

20、法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。5.10.4 報(bào)告：供試品制備方法、菌液組平均菌落數(shù)、供試品中菌液加入量、試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)、供試品對(duì)照組平均菌落數(shù)、測(cè)定結(jié)果和菌液回收率（%）計(jì)。5.11 控制菌檢查方法的驗(yàn)證：5.11.1 依各品種項(xiàng)下微生物限度標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)驗(yàn)證的菌株。驗(yàn)證大腸菌群檢查法時(shí)，應(yīng)采用大腸埃希菌作為驗(yàn)證菌株。5.11.2 驗(yàn)證方法：5.11.2.1 取規(guī)定量供試液及10100cfu試驗(yàn)菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行下一步生化反應(yīng)等檢查。5.11.2.2 當(dāng)采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，取規(guī)定量供試液，過(guò)濾，沖洗，試驗(yàn)菌應(yīng)加在最后一次沖洗液中，過(guò)濾后，注入增菌培養(yǎng)基或取出濾膜接入增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行下一步生化反應(yīng)等檢查。5.11.2.3 驗(yàn)證中設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。5.11.3