第二章 食品微生物檢驗的基本原理和方法

1、食品微生物檢驗的基本原理、方法和流程,第二章,一、微生物實驗的準備,玻璃器皿的洗刷與準備 潔凈劑及使用范圍 洗滌液的制備及使用注意事項 洗滌玻璃儀器的步驟與要求 玻璃儀器的干燥 玻璃器皿的包裝和滅菌,實驗前的準備,消毒與滅菌 基本概念 干熱滅菌 濕熱滅菌 其它消毒和滅菌方法,消毒： 是指應用消毒劑等方法殺滅物體表面和內(nèi)部的病原菌營養(yǎng)體的方法。 滅菌： 是指用物理和化學方法殺死物體表面和內(nèi)部的所有微生物，使之呈無菌狀態(tài)。,滅菌設(shè)備,蒸汽出口,二、微生物實驗操作,2.1 無菌操作的概念 2.2 酒精燈 2.3 接種針（環(huán)），制作，使用 2.4 移液管和加樣槍的使用 2.5 傾注平皿 2.6 液液接

2、種 2.7 平板劃線,微生物接種工具和方法,在微生物檢驗中，用得最多的接種工具是接種環(huán)、接種針。由于接種要求或方法的不同，接種針的針尖部常做成不同的形狀，有刀形、耙形等之分。有時滴管、吸管也可作 為接種工具進行液體接種。在固體培養(yǎng)基表面要將菌液均勻涂布時，需要用到涂布棒。 接種和分離工具 1接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀,斜面接種技術(shù),無菌操作,平板劃線,三、微生物實驗的觀察,3.1 顯微鏡觀察 3.2 平板菌落觀察 3.3 斜面培養(yǎng)物的觀察 3.3 液體培養(yǎng)物的觀察,3.1 顯微鏡觀察,活菌觀察：懸滴法和壓滴法，運動特性。 染色：單染色

3、，革蘭氏染色。,細菌的基本形態(tài)主要分為球菌、桿菌、螺旋菌三大類，近年還發(fā)現(xiàn)星狀和四方形細菌等。 細菌形態(tài)受培養(yǎng)時間、培養(yǎng)基成分、濃度、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間等發(fā)生變化。,革蘭氏染色法,1.涂片固定,2.單染結(jié)晶紫染液第一次染色 1min,3.媒染碘-碘化鉀溶液浸濕30S,4. 脫色95%乙醇溶液進行顏色洗脫,5.復染紅色的藩紅染液第二次染色,呈現(xiàn)第二次染色的效果紅色；稱革蘭氏陰性菌（紅陰G -）,細菌呈現(xiàn)第一次染色的效果紫色，革蘭氏陽性菌（紫陽G）；,3.2 平板菌落觀察,大小 形狀 色澤 邊緣 透明度 濕潤度 溶血性,大腸桿菌在普通營養(yǎng)瓊脂上生長表現(xiàn)3種菌落形態(tài)： （1）光滑型： 菌落邊緣整齊，

4、表面有光澤、濕潤、光滑、呈灰色，在生理鹽水中容易分散。 （2）粗糙型：菌落扁平、干澀、邊緣不整齊，易在生理鹽水中自凝。 （3）粘液型：常為含有莢膜的菌株。,菌落形態(tài)學Bacterial Colony Morphology,有莢膜的細菌菌落較大并且表面光滑，而沒有莢膜的則表面較粗糙； 具有芽孢的細菌菌落表面常有褶皺并且不透明。 沒有鞭毛不運動的細菌，特別是球菌，常形成較小、較厚、邊緣較整齊的菌落；有鞭毛的細菌則較大而扁平，邊緣波狀、鋸齒狀等；,蠟樣芽孢桿菌菌落,枯草芽孢桿菌菌落,3.3 斜面培養(yǎng)物的觀察,絲狀 樹狀 念珠狀 擴展狀 假根狀 刺毛狀,3.4 液體培養(yǎng)物的觀察,未接種 形成薄膜 形成

5、沉淀 混濁生長 絮狀生長,對氧氣要求：專性需氧菌 微需氧菌 兼性厭氧菌 專性厭氧菌 對CO2要求： 5% CO2,水 碳源 氮源 無機鹽 生長因子 有些細菌需要,培養(yǎng)微生物,4、對氣體要求,3、PH,2、溫度,1、營養(yǎng)物質(zhì),微生物的培養(yǎng) 微生物培養(yǎng)中的氧氣條件,培養(yǎng)設(shè)備：包括接種室、恒溫培養(yǎng)室、恒溫培養(yǎng)箱、液體發(fā)酵搖床、厭氧培養(yǎng)罐等。 好氧培養(yǎng)：例如平板培養(yǎng)、斜面培養(yǎng)、淺層液體培養(yǎng)、液體振蕩培養(yǎng)或通氣攪拌培養(yǎng)等都屬于好氧培養(yǎng)的方法。 厭氧培養(yǎng)：除了最簡便的深層液體培養(yǎng)以外，可以采用物理、化學或生物學的方法來排除培養(yǎng)容器中的空氣或空氣中的氧氣，創(chuàng)造厭氧條件。對于嚴格厭氧的微生物，要用化學和物理并

6、用的方法。在進行厭氧培養(yǎng)時，可以用指示劑檢查系統(tǒng)中的還原條件，一般實驗室中常用的如葡萄糖美蘭指示劑。,微生物的培養(yǎng) 微生物培養(yǎng)中的厭氧條件,生物學方法：利用植物呼吸作用，造成厭氧條件，常用的方法是在密封的干燥器底部放入發(fā)芽種子，因種子的呼吸作用增強，吸收氧氣，創(chuàng)造厭氧條件。此法簡易，但厭氧程度低。 化學方法：利用焦性沒食子酸吸收容器中的氧氣。在容器的一邊放一包用吸水紙包好的焦性沒食子酸，在另一邊放入堿液，容器密封后，讓堿液流向焦性沒食子酸一邊，兩者反應時吸收容器中的氧氣，創(chuàng)造厭氧條件。 物理方法：常用真空泵抽出密封干燥器內(nèi)的空氣或再充入其它惰性氣體，以保證厭氧條件。抽氣前，容器內(nèi)放入指示劑和培

7、養(yǎng)物。一般為達到嚴格厭氧目的，常采用物理和化學相結(jié)合并用的方法。,微生物的培養(yǎng) 微生物培養(yǎng)中的厭氧培養(yǎng),美蘭氧化還原指示劑：0.006N NaOH 0.015% 美蘭溶液 6 葡萄糖溶液 上列三種溶液在使用時等量混合，加熱使美蘭退色，迅速放入?yún)捬豕拗小?常見的生化反應：根據(jù)細菌具有不完全相同的酶，分解不同營養(yǎng)物質(zhì)的特點，用生化方法來鑒定細菌。,對 糖 的 發(fā) 酵,對 蛋白質(zhì)的發(fā)酵,枸櫞酸鹽利用試驗,尿素酶試驗,甲基紅（MR）試驗,靛基質(zhì)試驗,硫化氫試驗,糖發(fā)酵試驗,VP試驗,其他試驗,過氧化氫酶試驗,硝酸鹽還原試驗,淀粉水解試驗,糖酵解試驗,不同微生物分解利用糖類的能力有很大差異，或能利用（產(chǎn)

8、酸）或不能利用，能利用者，或產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣?？捎弥甘緞┘鞍l(fā)酵管檢驗。,葡萄糖：,七葉苷：,淀粉水解試驗,某些細菌可以產(chǎn)生分解淀粉的酶，把淀粉水解為麥芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再變藍色。,V-P試驗,某些細菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強堿環(huán)境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱VP（+）反應。,甲基紅（Methyl Red）試驗,腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產(chǎn)生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，可使培養(yǎng)基PH值下降至pH4.5

9、以下，使甲基紅指示劑變紅（+）；如酸性物質(zhì)進一步分解，會使pH上升在5.4以上，使甲基紅指示劑變黃（-）。,靛基質(zhì)（Imdole）試驗,某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應表現(xiàn)出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物（+）；無色則為陰性。,含硫有機物（如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸）能被部分細菌分解產(chǎn)生H2S，H2S和培養(yǎng) 基中的鉛鹽或鐵鹽反應，形成黑色的硫化鉛或硫化鐵沉淀。,硫化氫試驗,枸椽酸鹽試驗,某些細菌能利用枸椽酸鹽作為碳源，及磷酸銨作為氮源，將枸椽酸鹽分解為二氧化碳，培養(yǎng)基反應后成堿性，由于指示劑的作用，培養(yǎng)基變?yōu)樘m色（+）；陰性則不變色

10、（綠色）。,接種硝酸鹽肉湯，35培養(yǎng)5天， 加入0.2ml試劑A（對氨基苯磺酸），再加入 0.2ml試劑B（-萘胺），輕搖混合。,紅色：陽性,沒有顏色變化： 加入少量鋅粉 變紅陰性（硝酸鹽未被還原） 不變陽性（亞硝酸鹽已經(jīng)分解成氨和氮）,硝酸鹽還原試驗,原理：某些微生物可以將硝酸鹽還原成亜硝酸鹽，在酸性條件下，轉(zhuǎn)化為亞硝酸，與指示劑結(jié)合，呈紅色（+）。,菌落平板1滴3的過氧化氫。 陽性則產(chǎn)生大量氣泡。,過氧化氫酶：,過氧化氫酶又稱接觸酶，能催化過氧化氫分解成水和氧。,氨基酸脫羧酶試驗,某些細菌能產(chǎn)生氨基酸脫羧酶, 可使賴氨酸、鳥氨酸生產(chǎn)脫羧作用, 生成胺類物質(zhì)和CO2。胺類物質(zhì)使培養(yǎng)基呈堿性變

11、紫色，為陽性, 如呈黃色為陰性，以此鑒別細菌。,血漿凝固酶試驗,原理：致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，附著在細菌的表面，形成凝塊；或作用于血漿凝固酶原，使它成為血漿凝固酶，從而使抗凝的血漿發(fā)生凝固現(xiàn)象,為陽性。,尿素酶（Urease）試驗,有些細菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。,1、未接種 2、尿素酶陽性 3、尿素酶陰性,動力觀察：,MOTILITY TEST1. Pseudomonas aeruginosa（銅綠假單胞菌）：Motile 2. Staphylococcus aureus：Non-motile

12、3. Bacillus subtilis：Motile,Principle The lower agar concentration in the medium allows limited movement of motile bacteria from the area of the stab. Motility will be detectable as diffuse growth radiating from the stab line. A special dye, a tetrazolium salt (TTC) may be added to make the radiatin

13、g growth more visible as the reddish diffuse area.,IMViC試驗,IMViC就是：I吲哚（indoltest） M甲基紅（methylredtest） VV-P（Voges-Prolauertest） C檸檬酸鹽（citratetest） 這四個生化試驗，合稱IMViC試驗，主要用于腸道菌鑒定。,血清學反應是指：相應的抗原與抗體在體外一定條件下作用，可出現(xiàn)肉眼可見的沉淀、凝集現(xiàn)象。在食品微生物檢驗中，常用血清學反應來鑒定分離到的細菌，以最終確認檢測結(jié)果。,習慣上將經(jīng)典的血清學反應分三種類別： 凝集反應 沉淀反應 補體結(jié)合反應。,血清學試驗,O

14、抗原：存在于細胞壁脂多糖（LPS）層，具有屬、種特異性。其特異性取決于LPS分子末端重復結(jié)構(gòu)多糖鏈的糖殘基種類的排列。O抗原耐熱，100不被破壞。 H抗原：存在于鞭毛蛋白。不耐熱，6030分鐘即被破壞。H抗原的特異性決定于多肽鏈上氨基酸的排列順序和空間結(jié)構(gòu)。細菌失去鞭毛后，運動隨之消失；同時O抗原外露，是為H-O變異。 莢膜或包膜抗原：位于O抗原外圍，能阻止O凝集現(xiàn)象。多糖性質(zhì)，但6030分鐘可去除之。 毒力抗原（Vi抗原，ViVirulence）Vi antigen：定位于革蘭氏陰性細菌菌體抗原（O抗原）外側(cè)的易熱抗原。一般認為與毒力有關(guān)，因此稱為毒力抗原。與氯化鐵起反應，可用電子顯微鏡證實

15、其存在。一般認為毒力抗原由N-乙酰氨基糖醛酸的聚合物組成，在血清學上可與其他表面抗原區(qū)別開來。,抗原種類：,鞭毛抗原（H）,菌體抗原（O）,K或Vi抗原,三、微生物學檢驗,食品微生物學檢驗： 運用標準的儀器設(shè)備、試驗器材，按國家標準方法項目要求快速、準確地檢驗目的菌。 檢驗的范圍： 生產(chǎn)環(huán)境的檢驗：水、空氣、地面、墻壁 原材料的檢驗：包括添加到食品中的所有材料 食品加工、運輸、貯存、銷售過程中的檢驗：從業(yè)人員、材料、工具、設(shè)備的衛(wèi)生 食品本身的檢驗：半成品及出廠的產(chǎn)品、中毒的產(chǎn)品、值得懷疑的產(chǎn)品。 食源性疾病中食品樣品 食品安全事件中食品樣品,微生物檢驗流程,（一）、樣品的采集,取樣意義 （目

16、的） 監(jiān)督管理（企業(yè)、執(zhí)法機構(gòu)等） 為某一特殊目的（如食源性疾病、食物中毒、不明原因的疾?。┧阉髯C據(jù)。 采樣原則：確保所采集的樣品具有代表性 抽樣堅持隨機原則 采樣過程遵循無菌操作程序，防止一切可能外來污染。 保存和運輸?shù)倪^程，防止樣品中原有微生物的數(shù)量和質(zhì)量變化，保持樣品的原有狀態(tài)。,1、采樣的原則 具有代表性,代表采樣當時的及樣品整體的基本情況（隨機性、均勻性和數(shù)量） 代表樣品整體中微生物的數(shù)量、種類和活力（生長能力）（如防止外源性污染） 代表樣品整理的質(zhì)量（理化性質(zhì)），如防止樣品變質(zhì)。,2、采樣方案,采樣方案：在采樣計劃的基礎(chǔ)上，制定的采樣實施細則，包括用具的準備、人員安排、采樣過程質(zhì)量

17、控制、運輸送樣安排等。 在采樣方案中，用于分析的樣品的代表性是至關(guān)重要的，即樣品的數(shù)量、大小和性質(zhì)對結(jié)果判定產(chǎn)生重大影響。 按照相應產(chǎn)品標準中的規(guī)定執(zhí)行。,各取樣點,原料：原始材料、添加劑、輔助材料及生產(chǎn)用水等； 生產(chǎn)線樣品：食品生產(chǎn)過程中不同加工環(huán)節(jié)所取的樣品； 庫存樣品：測定保質(zhì)期樣品質(zhì)量 市場樣品：測定流通過程中微生物變化 口岸樣品：除了滿足合同條款外，還有滿足進口國相關(guān)法律規(guī)定。 可疑食品樣品（包括食源性疾病和食物中毒等）,各種取樣方案,進出口貿(mào)易合同對食品抽樣量有明確規(guī)定的，按合同規(guī)定抽樣。 合同沒有具體抽樣規(guī)定的，可根據(jù)檢驗的目的，產(chǎn)品及被抽樣品批的性質(zhì)和分析方法的性質(zhì)確定抽樣方案

18、。 參照同一產(chǎn)品的品質(zhì)檢驗抽樣數(shù)量抽樣，或按單位包裝件數(shù)N的開平方值抽樣。 參照GB 4789.1中華人民共和國國家標準 食品微生物學檢驗 總則。,采樣類型,基本原則 （1）各種微生物本身對人的危害程度各有不同。 （2）食品經(jīng)不同條件處理后，其危害度變化情況：降低危害度；危害度未變；增加危害度。 根據(jù)（1）（2）的情況來設(shè)定抽樣方案并規(guī)定其不同采樣數(shù)。 采樣方案：分為二級和三級采樣方案。,幾個字母代號,n：同一批次產(chǎn)品應采集的樣品件數(shù)； c：最大可允許超出m值的樣品數(shù)； m：微生物指標可接受水平的限量值； M： 微生物指標的最高安全限量值。表示邊緣的可接受數(shù)與邊緣的不可接受數(shù)之間的界限。,二級

19、抽樣方案,二級法只設(shè)有n、及m值 以其一點作為食品微生物的限量值，只設(shè)合格判定標準m值，超過m值的，則為不合格品。 以生食海產(chǎn)品魚為例 n=5，c=0，m=102，n=5即抽樣5個，c=0即意味著在該批檢樣中，未見到有超過m值的檢樣，此批貨物為合格品。 在中等或嚴重危害的情況下使用二級抽樣方案,三級抽樣方案,三級法有n、c、m及M值。M即附加條件后判定合格的菌數(shù)限量。 設(shè)有微生物標準m及M值兩個限量，超過m值的檢樣，即算為不合格品。其中以m值到M值的范圍內(nèi)的檢樣數(shù)，作為c值，如果在此范圍內(nèi)，即為附加條件合格，超過M值者，則為不合格。 例如：冷凍生蝦的細菌數(shù)標準 n=5，c=3，m=101，M=

20、102，其意義是從一批產(chǎn)品中，取5個檢樣，經(jīng)檢樣結(jié)果，允許3個檢樣的菌數(shù)是在mM值之間，如果有3個以上檢樣的菌數(shù)是在mM值之間或一個檢樣菌數(shù)超過M值者，則判定該批產(chǎn)品為不合格品。 對健康危害低的情況下建議使用三級抽樣方案,食品中致病菌限量標準,食品中致病菌限量標準,隨機抽樣方案,在現(xiàn)場抽樣時，可利用隨機抽樣表進行隨機抽樣。隨機抽樣表系用計算機隨機編制而成，包括一萬個數(shù)字。 其使用方法如下：a先將一批產(chǎn)品的各單位產(chǎn)品（如箱、包、盒等）按順序編號。如將一批600包的產(chǎn)品編為1、2600。b.隨意在表上點出一個數(shù)。c.根據(jù)單位產(chǎn)品編號的位數(shù)進行抽樣。重復抽樣，直到完成應抽樣品件數(shù)為止。,非隨機取樣計

21、劃,在食品生產(chǎn)或貯藏、銷售的整個中，微生物變化顯著； 整堆食品貯藏溫度和其它條件變化顯著； 出現(xiàn)食物中毒或流行性疾病暴發(fā)； 出現(xiàn)以上情況，需要非隨機取樣，并同時檢測環(huán)境情況。,食源性疾病及食品安全事件中食品樣品的采集,由工業(yè)化批量生產(chǎn)加工的食品污染導致的食源性疾病或食品安全事件，食品樣品的采集和判定原則按二級或三級采樣方案執(zhí)行。同時，確保采集現(xiàn)場剩余食品樣品。 由餐飲單位或家庭烹調(diào)加工的食品導致的食源性疾病或食品安全事件，食品樣品的采集按GB14938中衛(wèi)生學檢驗的要求，以滿足食源性疾病或食品安全事件病因判定和病原確證的要求。,3、取樣方法按不同目的制定,明確目的，確定采樣方案（由衛(wèi)生監(jiān)督員和

22、檢驗員討論確定）； 首選已包裝好的小包裝樣品（500g/mL）； 若是大包裝采集檢驗需用量的5倍以上。 a、無菌操作(滅菌的容器、工具)； b、固體食物：要代表性的多點采樣后混合均勻； c、液體食物：要注意表面、深度及搖均勻 d、流水線：前、中、后，分點取樣； e、檢驗表面污染（包括食品、生產(chǎn)工具）：涂、擦（用滅菌棉簽、檢驗紙片） 。,常見的采樣方法,1500g及以下的即食包裝食品：直到檢驗前不要開封，以防污染。 2大容器包裝的非即食液體食品：抽樣前搖動均質(zhì)，取樣不超過其容量的四分之三，測溫，記錄，冷卻（ 0-4 ），取樣檢測前再混勻一次。 3大容器包裝的非即食固體和固體食品：每份樣品在幾個不

23、同部位取樣，放入一個滅菌容器內(nèi)；肉類、魚類或類似食品要將表面樣品和深層樣品分開保存，防止交叉污染。,4大容器包裝的非即食冷凍食品：保持冷凍狀態(tài)。取樣時可以用駒子、木鉆等獲取深層樣品。樣品一旦融化，不可使其再凍，保持冷卻即可。 5生產(chǎn)過程中的抽樣：劃分檢驗批次，應注意同批產(chǎn)品質(zhì)量的均一性 。 6、表面取樣：通過惰性載體將表面樣品上的微生物轉(zhuǎn)移到合適的培養(yǎng)基中進行微生物檢測。適應于菌體數(shù)量較少的樣品。載體包括清水、拭子、膠帶等，其它有瓊脂腸、影印盤、觸片法、表面切片法等,散裝食品或現(xiàn)場制作食品,根據(jù)不同食品的種類和狀態(tài)及相應檢驗方法中規(guī)定的檢驗單位，用無菌采樣器現(xiàn)場采集5倍或以上檢驗單位的樣品，放

24、入無菌采樣容器內(nèi), 采樣總量應滿足微生物指標檢驗的要求。,樣品的種類,大樣：整批檢驗。 中樣：采樣員從大樣各部分取得的混合樣。 小樣：檢驗員用來檢驗的樣品。 表面污染：50cm2 （5cm 210處） 罐頭食品：罐/批、班次 一般每個品種3罐，可以以每配料罐或滅菌鍋為一批。,取樣前的準備工作,建立一個無菌取樣的分析清單 ，按清單準備工具、容器、設(shè)施（衣服、發(fā)網(wǎng)等）； 盛樣品的容器應當被預先標識，如樣品號、取樣日期、取樣人等； 檢查所有取樣設(shè)施、工具和容器的滅菌日期、滅菌時間，并做好標識； 注意干冰或濕冰的準備及保存。,無菌采樣,無菌采樣，意味著取樣過程中，避免操作過程引起污染。一個無菌樣品的采

25、集，應該通過這樣一種方式，即：在收集過程中，本身應避免污染，然后放入消毒容器中。,不能冤枉好人啊！,4、采樣的標識,對采樣前后的大、中、小樣均要進行標識，注明：編號、品名、來源、批號、數(shù)量、時間、采樣人姓名、采樣地點、保存條件等信息，并填寫記錄表格。 盛樣容器必須有和樣品一致的標記，并確保標記牢固并防水。 工廠一般用紅卡和藍卡來做已采樣標識。 樣品運送前必須封識樣品容器。,樣品的運送 盡可能保持樣品原有狀態(tài),防護包裝：液體防漏、冷凍食品防融，一般用減震材料（泡沫材料）和隔熱箱（內(nèi)裝干冰以維持0）； 盡快送檢：3小時； 冷凍食品應保持冷凍狀態(tài)，非冷凍食品保持15； 填寫送檢單，內(nèi)容與標識單相似，

26、有運送人簽字。 不能由專人運送的樣品，可以托運，但要確保安全。,（二）樣品檢驗,樣品的接收 1、查對樣品：根據(jù)送檢單對照樣品，要求樣、單一致； 2、填表登記：內(nèi)容與標識相似，注明接收日期等；一般先微檢，后化檢。 3、分類保藏：冷藏、冷凍或室溫。 檢驗的準備：按國標法準備藥品、儀器、培養(yǎng)基、工具、無菌水等,樣品的保存,樣品到實驗室后應在36h內(nèi)檢驗（貝類是6h）。 進行必要和清晰的標識：樣品名稱、樣品描述、樣品批號、企業(yè)名稱和地址、取樣人、時間、地點、溫度和測試目的。 樣品在保存過程中采用適當?shù)姆椒?，取保樣品和微生物的狀態(tài)，仍能代表取樣時的特性。（特別需要注意溫度、pH值、氧氣等條件變化） 對樣品的貯存過程應有記錄。,樣品的預處理,液體樣品：黏度不超過新鮮牛乳的粘性食品 先要勻表面消毒用無菌工具開罐吸樣（2.5cm深度） a、含CO2的飲料：須排除CO2（表面消毒、開罐、倒入無菌小瓶、蓋無菌紗布、輕搖使氣體逸出。） b、酸性飲料：pH4.5 用滅菌的10%Na2CO3調(diào)至中性。 固體樣品：注意均質(zhì)。例如：