浮游菌測試操作規(guī)程

1、QCA/QC-SOP05-003山東良福制藥有限公司起草人日 期浮游菌測試操作規(guī)程審核人日 期批準人日 期第05版實施日期總頁數(shù)共8頁1. 主題內(nèi)容和適用范圍本規(guī)程規(guī)定了公司潔凈室（區(qū)）中浮游菌的測試條件，測試方法及控制標準。本規(guī)程適用于公司潔凈室（區(qū)）浮游菌的測定和潔凈度等級的驗證。2. 相關文件藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范 2010年版醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法 GB/T1629320103. 術語3.1 潔凈室（區(qū)） 對塵粒及微生物污染規(guī)定需進行環(huán)境控制的房間或區(qū)域。其建筑結構、裝備及其使用，均具有減少對該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功能。3.2 潔凈工作臺一種工作臺或者與之類似的

2、一個封閉圍擋工作區(qū)。其特點是自身能夠供給經(jīng)過過濾的空氣或氣體，如垂直層流潔凈工作臺、水平層流潔凈工作臺、自凈器等。3.3 菌落細菌培養(yǎng)后，由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落，簡稱CFU。通常用個數(shù)表示。3.4 浮游菌用本規(guī)程提及的方法收集到的活微生物粒子，通過專用的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。3.5 浮游菌濃度單位體積空氣中含浮游菌菌落的多少，以計數(shù)濃度表示，單位是個/m3或個/L 。3.6 靜態(tài)測試潔凈室（區(qū)）凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已處于正常運行狀態(tài)，工藝設備已安裝，潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒有生產(chǎn)人員的情況下進行的測試。3.7 動態(tài)測試潔凈室(區(qū))已處于正常生產(chǎn)壯態(tài)下進行的測試。4.

3、 職責中心化驗室微生物限度檢查室人員負責浮游菌的定期檢測工作。5. 質(zhì)量標準5.1 環(huán)境菌落監(jiān)測標準區(qū)域內(nèi)容D級潔凈區(qū)萬級潔凈區(qū)百級潔凈區(qū)標準cfu/平皿200平均100平均1警戒限度cfu/平皿1602-測定頻次1次/季1次/日1次/班說明D級區(qū)平皿菌落數(shù)平均不得超過200個。6. 材料與設備6.1 設備浮游菌采樣器、凈化工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、烘箱、高壓蒸汽滅菌器、放大鏡、顯微鏡、電冰箱、菌落計數(shù)器。6.2 用具培養(yǎng)皿（平皿）：90mm15mm的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。鋼精鍋：10000ml。三角瓶：300ml。天平、稱樣紙、勺。此外還需要棉塞、牛皮紙、線繩、微波爐、玻璃棒、海棉擦、毛刷等用具。6.

4、3 空白培養(yǎng)皿的準備6.3.1 包扎取潔凈、干燥的培養(yǎng)皿用牛皮紙或專用包皮布包嚴扎緊待滅。6.3.2 滅菌滅菌采用濕熱滅菌法。條件：0.12Mpa、121，20min。滅菌時要注意按照操作規(guī)程操作高壓蒸汽滅菌器。6.3.3 傳輸將滅菌并用余熱烘干后的平皿，傳至準備間，并用紫外線照射備用?？瞻灼矫笠话阍谧⒚笄?4小時內(nèi)滅菌，傳入。6.3.4 質(zhì)量要求已備好待用的平皿應確保無損、無污、無菌、干燥。6.4 培養(yǎng)基的準備及滅菌6.4.1 大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基制備。取大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基約34g，加蒸鎦水1000ml加熱溶解即得。6.4.2 溶解與分裝培養(yǎng)基配制好后，分裝入潔凈干燥的300ml三角瓶內(nèi)，

5、約200ml/瓶，并塞好棉塞，扎上牛皮紙帽，待滅。6.4.3 培養(yǎng)基的滅菌采用濕熱滅菌法。除另有規(guī)定外，條件0.12MPa，121，20分鐘。注意：滅菌結束后自然降壓，以防培養(yǎng)基在突然降壓后沸騰。6.5 注皿6.5.1 無菌室應整潔、有序，各用具處于定置狀態(tài)。6.5.2 注皿前對無菌室作適當消毒和清潔，并開紫外線照射30分鐘。6.5.3 把準備好的空白平皿去掉牛皮紙，放在工作臺上，按每若干個為一組摞齊擺好。6.5.4 滅菌的培養(yǎng)基，加熱溶化傳入無菌室，用75%酒精擦試瓶體后，放在工作臺上，打開紫外線照射，待其冷至45左右時，開始注皿。6.6 注皿操作6.6.1 操作員消毒手，做房間和工作臺環(huán)境

6、皿。6.6.2 操作員在符合100級空氣潔凈度條件的層流凈化工作臺上將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿。注入量：90mm培養(yǎng)皿15ml。注皿時，三角瓶傾斜，把皿蓋微微打開（不超過45O角），將培養(yǎng)基注入皿中，動作盡量快、穩(wěn)、輕。6.6.3 將注好的平皿，每若干個為一摞排放整齊，用浸有75%酒精的綢布蓋上，打開紫外燈照射待凝。6.6.4 凝固后，平板倒過來，收入筐內(nèi)，包好，放培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)，3035，48小時，看培養(yǎng)基本身是否染菌。6.6.5 質(zhì)量要求：制備好的培養(yǎng)皿（基），經(jīng)48小時培養(yǎng)后，無菌生長方可進入待用狀態(tài)。若長菌培養(yǎng)皿大于該全部培養(yǎng)皿的10%，視為該批培養(yǎng)基不合格。應倒掉重新配制。6.7 用具的洗滌

7、6.7.1 用后培養(yǎng)皿的清洗使用后，先用海棉擦沾水和洗衣粉擦去皿蓋上的記號，然后鏟出培養(yǎng)基，用海棉擦或毛刷蘸洗滌劑在溫水中洗干凈，用自來水沖四、五次，再用蒸鎦水沖洗23次，烘干，備用。6.7.2 用后三角瓶和鋼精鍋的清洗。使用后，先用熱水燙洗12次，然后用毛刷蘸洗滌劑刷洗干凈，用自來水沖四、五次，再用蒸鎦水沖洗23次，晾干，備用。7. 測試方法7.1 測試方法本測試方法通過帶浮游微生物空氣高速通過微孔，被均勻撞擊在培養(yǎng)皿內(nèi)的瓊脂表面；這些活體微生物在瓊脂表面獲得均勻和充分，在培養(yǎng)過程中，快速發(fā)生動態(tài)再水化過程，高速生長，從而更快得出結果。在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿

8、中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。7.2 培養(yǎng)皿選用90mm 型7.3 采樣點的布置培養(yǎng)皿應布置在具有代表性且氣流擾動極小的地方。采樣點位置的詳細規(guī)則見附件一A.1 潔凈室（區(qū)）采樣點布置宜力求均勻，避免采樣點在局部區(qū)域過于稀疏。下列多點采樣的采樣點布置圖示可作參考。（見圖A.1） 圖A.1 平面采樣點布置圖A.2 100級單向流區(qū)域，潔凈工作臺或局部空氣凈化設施的采樣點宜布置在正對氣流方向的工作面上，氣流形式可參考以下圖A.2、圖A.3。 圖A.2 水平單向流氣流形式 圖A.3 垂直單向流氣流形式7.4 最少采樣點數(shù)目參見5.4.1.1采樣點一般在工作

9、面上0.2m高度的平面上均勻布置。最少采樣點數(shù)目浮游菌的最少采樣點數(shù)目可按表一確定。表一 最少采樣點數(shù)目面積m2潔凈度級別10010000102322210204222204082224010016422100200401033200400802066400100016040131310002000400100323220008002006363注：對于100級的單向流潔凈室（區(qū)），包括100級潔凈工作臺（bench），面積指的是送風口表面積；對于10000級以上的非單向流潔凈室（區(qū)），面積指的是房間面積。表二 最小采樣量潔凈度級別采樣量 L/次100100010000500100100注：每

10、個采樣點一般采樣一次，對于單向流潔凈室或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室，采樣口應向上。培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)面在運輸過程中造成的影響，宜同時進行陰性對照試驗，每次或每個區(qū)域取一個對照皿，與采樣皿同法操作單不需要暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結果應無菌落生長。7.5 采樣方法7.5.1 環(huán)境皿對環(huán)境進行靜態(tài)測試，測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服，室內(nèi)測試人員不得多于二人，將已制備好的培養(yǎng)皿按要求放置，打開皿蓋約2/3，皿蓋搭在皿底沿上，不得過大或過小，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時后，將皿蓋合上。7.5.2 人員手皿在進入潔凈區(qū)前或

11、操作過程中對人員做手皿，操作者手拿制作好的培養(yǎng)皿，左手在下，右手在上，右手拿皿底，左手拿蓋始終向上，打開后，被檢者伸開手掌，手心向上，手指輕輕觸碰培養(yǎng)基，培養(yǎng)基上應有指紋，然后迅速合上蓋子。7.5.3 無菌衣的做皿對滅菌后的無菌衣做皿時，取中間部分，右手拿皿底，左手拿皿蓋和物品，將物品輕輕和培養(yǎng)基接觸，合上蓋子。7.5.4 工藝用水和消毒劑的做皿用管道輸送的工藝用水和消毒劑做皿時，在取樣處，打開龍頭，流量不要太大，打開平皿，令皿底側豎起來，迅速用工藝用水或消毒劑沖刷一下，然后迅速合上蓋子。7.6 培養(yǎng)7.6.1 培養(yǎng)溫度：3035；培養(yǎng)時間：48小時。7.6.2 每批培養(yǎng)基選定幾只培養(yǎng)皿作空白

12、對照培養(yǎng)，以檢驗培養(yǎng)基本身是否受到污染。7.7 菌落計數(shù)7.7.1 用肉眼直接計數(shù)，必要時用510倍放大鏡檢查有否遺漏，并記錄。7.7.2 若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辯時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。7.7.3 結果計算 菌落數(shù) 平均菌落數(shù)= - 采樣量 如發(fā)現(xiàn)某處連續(xù)染菌，則應用顯微鏡分析菌型，并進行原因分析。7.7.4 結果判定以浮游菌判斷潔凈室（或潔凈區(qū)）的潔凈度是否合格，依據(jù)按照5.1中的標準。7.7.5 測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。7.8 注意事項7.8.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性，正確性。7.8.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。7.8.3 對培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。7.8.4 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。7.8.5 采樣前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)，破