小球藻的培養(yǎng)

1、小球藻的培養(yǎng)一、小球藻小球藻是單細(xì)胞植物,種類較多，多數(shù)生活在淡水中,少數(shù)生活在海洋里。按植物學(xué)分類,小球藻屬于小球藻綱綠藻目原球藻科生物,其體型小，直徑一般為5m，在顯微鏡下，需要放大0060倍才能看到,我們?nèi)庋劭吹降闹徊贿^是含有小球藻的綠色的水。小球藻所含的營養(yǎng)成分很高，其蛋白質(zhì)含量達(dá)到%60%（相當(dāng)于花生米的2倍、雞蛋的5倍）,含脂肪10%0%,還含有多種維生素。小球藻的生物活性物質(zhì)糖蛋白和多糖體的含量也相當(dāng)高,這些生物活性物質(zhì)具有增強(qiáng)人體免疫力、抗癌、降血壓、抑制血糖上升、排除體內(nèi)毒素和迅速恢復(fù)機(jī)體損傷等功能。因此,小球藻的培養(yǎng)前景廣闊。 作為培養(yǎng)原料的小球藻,可以到較清潔的池塘、水坑

2、中采集綠色的水，在顯微鏡下鑒定,然后再用。也可以向培養(yǎng)它的人索取。 1 容器的準(zhǔn)備小規(guī)模的培養(yǎng)可用瓶、缸等,大規(guī)模的培養(yǎng)可用水泥池。首先,要對所使用的容器進(jìn)行消毒,一般用100mg/l的漂白粉水溶液浸泡,再用水沖刷數(shù)次。(1m/l的漂白粉水溶液的配制:天平稱量2%漂白粉澄清液；定量轉(zhuǎn)移至容量瓶中；加水至1;混勻。2%漂白粉上清液的配制法:取漂白粉2克,加少量水?dāng)噭?，再加水?0毫升，充分調(diào)勻后,待澄清后取上清液使用。） 2培養(yǎng)液的準(zhǔn)備（1）bg11液體培養(yǎng)基配方： stock1定容100l 檸檬酸 03g檸檬酸鐵胺 0.3g etana2 005g stoc 定容1000l ano 3g hp

3、o40.8 mso47ho1.5g stk3 定容1ml cacl22o1. tock4 定容100 na2co32g toc5 定容100m ho3 2.8g mncl24ho .81g zno472o 0.22gna2mno42o 0.391g cuo5h2o 0079go(no3）262o0.049g stock1 取用2ml stock2 取用20ml sock3 取用2m stoc4 取用1ml tck5 取用1ml 總定容 10m（2)購買2000元/套,九種原液各0l（稀釋100倍)，10瓶。培養(yǎng)基各取ml。聯(lián)系電話:135627288 3 藻種購買:淘寶 輪蟲小球藻套裝。40元

4、一套 4 接種 選取生活力強(qiáng)、生長旺盛的藻種,在天氣晴朗的上午接種。一般情況下,作為第1級培養(yǎng),可按藻液與培養(yǎng)液的比例進(jìn)行接種。接種的量大，可使藻種迅速成為培養(yǎng)液中的優(yōu)勢種，利用生物間的拮抗作用，減少了污染機(jī)會，縮短了小球藻的培養(yǎng)時間。待擴(kuò)大培養(yǎng)時,可按藻液與培養(yǎng)液14的比例進(jìn)行接種。 管理 5.1 攪拌 由于小球藻不能游動,只能浮在水中生活，所以必須對培養(yǎng)液進(jìn)行攪拌，讓藻體不斷變換位置,使光照、養(yǎng)料和水溫均衡，這樣有利于藻體的迅速生長和繁殖。常用的攪拌工具有玻璃棒、竹棒,每天攪拌3次,每次分鐘。 5光照 小球藻的培養(yǎng)要有充分的光照,陰雨天光線不足時，可在培養(yǎng)室內(nèi)用人工光源進(jìn)行補(bǔ)充，通常用冷白

5、熒光燈,光照強(qiáng)度為20003000lx;但在光線強(qiáng)烈的夏天,要用遮陽網(wǎng)等進(jìn)行適當(dāng)避光。 .3 溫度及 溫度保持在2530,最適宜生長溫度為26。ph保持在68。 5.污染的防治 在小球藻的培養(yǎng)過程中,要經(jīng)常觀察藻液的顏色是否正常、是否有沉淀和附壁現(xiàn)象、液面是否有菌膜等異常情況。造成藻種污染的多數(shù)情況是原生動物及雜藻的生長。如果顯微鏡下檢查有原生動物生活,可用1m/l的漂白粉滅殺。對付其他雜藻最好的辦法是嚴(yán)格控溫和經(jīng)常檢查培養(yǎng)液的ph。 采收當(dāng)小球藻的培養(yǎng)液變成綠色、用顯微鏡觀察1l。培養(yǎng)液中大約有10個小球藻時，就可以采收或擴(kuò)大再培養(yǎng)了。采收時，用0.3%.5的明礬粉溶解在培養(yǎng)液里，約1小時后

6、，小球藻沉在了水底，除去上層的水,就能獲得小球藻的濃縮液。二、硅藻1. 儲存液:(1) 金屬液(每升含) eta二鈉 4.60 g 氯化鐵晶體 - 5 五水硫酸銅 0.00 g 七水硫酸鋅 - .22 g 六水氯化鈷- 0.00 四水氯化錳 - .8 g 二水鉬酸鈉 0.006 g（2)維生素液(每升含) b2 - .005g 維生素b5鹽酸鹽 - 0.1 g 生物素- 0.0005g 1l培養(yǎng)基配方：硝酸鈉- 0.75g二水合磷酸二氫鈉 - 0.005 g金屬液 1.00 ml維生素液 1.00ml硅酸鈉m加水至1l。硅藻培養(yǎng)溫度在22,光照照度在000lux（不要太陽直射)以上。大量培養(yǎng)中

7、曾出現(xiàn)過雜藻污染問題,主要是浮游的藍(lán)纖維藻及部分柵藻和小球藻。我們利用藻類比重、懸浮習(xí)性不同來排除雜藻。發(fā)現(xiàn)雜藻時,停止攪拌數(shù)小時,使硅藻下沉，藍(lán)纖維藻等懸浮在水中。然后將上清液傾棄,再將沉淀硅藻用蒸餾水反復(fù)清洗幾次后,加入新鮮培養(yǎng)基,即可獲得純化。補(bǔ)充：1藻種培養(yǎng)設(shè)施:藻種的培養(yǎng)要在保種室中進(jìn)行,保種室要求通風(fēng)條件好,光線條件好,溫度可控性好，保種室要配有空調(diào)、冰箱、具有人工光源的培養(yǎng)架等。培養(yǎng)中常用培養(yǎng)儀器有顯微鏡、解剖鏡等，容器有三角燒瓶、廣口玻璃瓶等。保種室要嚴(yán)格消毒,防止病菌的侵入。2容器、工具的消毒：進(jìn)行單細(xì)胞藻類的純培養(yǎng),容器、工具、培養(yǎng)基都要進(jìn)行嚴(yán)格滅菌，但一般生產(chǎn)性的單種培養(yǎng)

8、，則只須達(dá)到消毒目的就可以了。常用的消毒方法有高溫消毒法和化學(xué)藥品消毒法。高溫消毒法是利用高溫殺死微生物的方法。不耐高溫的容器如塑料和橡膠制品等不能利用高溫法消毒。a、直接灼燒消毒接種環(huán)、鑷子等金屬小工具，試管口、瓶口等可以直接在酒精燈火焰上短暫灼燒消毒。載玻片、小刀等則最好先蘸酒精,然后在酒精燈火焰上點(diǎn)燃，等器具上的酒精燒完，也就完成了滅菌操作。b、煮沸消毒把容器、工具放入鍋中,加水煮沸消毒,一般煮沸10-20分鐘。大型錐形瓶消毒，可在瓶口上放一普通的玻璃漏斗，再在漏斗上放一稱量瓶蓋,在錐形瓶內(nèi)加少量淡水，置電爐上加熱煮沸50分鐘，可使整個瓶壁消毒。消毒完畢即用消毒的紙或消毒的紗布包扎瓶口。

9、此法適合消毒小型的容器工具。c、烘箱干燥消毒將玻璃容器、金屬工具用清水洗干凈后,放入烘箱。關(guān)閉烘箱門，打開通氣孔,接通電源加熱。當(dāng)溫度上升到120時，關(guān)閉通氣孔，停止加熱。如果進(jìn)行純培養(yǎng)，容器必須滅菌,當(dāng)溫度上升到15時,關(guān)閉通氣孔,繼續(xù)加熱至160,保持溫度,恒溫2小時，然后停止加熱。必須要等到溫度下降到60以下,才能打開烘箱門。有棉塞和紙包扎的容器、工具滅菌,不能超過180,以免烘焦?；瘜W(xué)藥品消毒主要用于生產(chǎn)性大量培養(yǎng)中,大型容器、工具、水泥池等常用化學(xué)藥劑消毒。a、漂白粉消毒工業(yè)用漂白粉一般含有效氯25%35%，消毒時按萬分之的含量配成水溶液,把容器、工具在溶液中浸泡半小時，再用消毒水沖

10、洗4次即可。b、酒精消毒酒精消毒常用于中小形容器和工具,方法是用紗布蘸7%酒精在容器、工具的表面涂抹即可。c、高錳酸鉀消毒以百分之五的比例配成溶液把要消毒的容器、工具浸泡5分鐘，然后取出用消毒水沖洗23次，便可達(dá)到消毒目的。如果是對玻璃鋼水槽、水泥池等消毒，可以用高錳酸鉀溶液撥在池壁上,撥灑幾遍后刷洗池底，分鐘后再用消毒水沖洗干凈。石炭酸石炭酸消毒按%5的比例配成消毒液，把要消毒的容器和工具放在其中浸泡半小時,再用消毒水沖洗23次。微藻的培養(yǎng)液是在消毒的海水或淡水中加入各種營養(yǎng)鹽配制而成。培養(yǎng)液的配制，首先按配方先后稱量各種營養(yǎng)物質(zhì),可逐一溶解,也可以同時溶解。遇到難溶的含金屬的物質(zhì)可以加熱或

11、與naedta一起溶解，配方中的維生素一般等水溫降至60后再加。生產(chǎn)上為了方便可以將營養(yǎng)鹽配方濃縮1000000倍配成母液，使用時可以根據(jù)培養(yǎng)水體多少量取母液的體積即可。3.培養(yǎng)液的制備和消毒：保種培養(yǎng)液的消毒一般采用加熱消毒法,經(jīng)沉淀、過濾的海水,一般加溫至90左右維持5分鐘或達(dá)到沸騰即可。由于海水中的一些對藻類生長有促進(jìn)作用的有機(jī)物在高溫時易遭破壞，所以加溫時間不宜太長。接種:接種就是把作為藻種的藻液接入新配好的培養(yǎng)液中,進(jìn)行豐富培養(yǎng)。選擇無污染、生長旺盛、顏色正常、藻液中無沉淀、細(xì)胞無附壁的藻種進(jìn)行接種。一般來說藻種液和新培養(yǎng)液的比例為:。接種的時間最好在上午的8時，這個時間是藻類細(xì)胞代

12、謝最旺盛的時候。培養(yǎng)條件:保種的條件最好保證在藻種的最適生長條件，要保證藻種不受污染。5.藻種培養(yǎng):溫度保持在253。p保持在68。6日常培養(yǎng)管理：1）注意保種室的衛(wèi)生，定時打掃，謝絕無關(guān)人員的進(jìn)入等；2）外觀檢查。檢查藻液顏色是否不再淺變濃,或是出現(xiàn)渾濁或沉降等反映藻體生長不正常，處于老化時期受到病蟲侵染的現(xiàn)象。3）鏡檢檢查是否發(fā)生污染，是否老化,以確保試驗的順利進(jìn)行。4）控制溫度。通過暖氣控溫裝置控制溫度,使試驗藻細(xì)胞在適宜的溫度環(huán)境中。5）搖瓶。在培養(yǎng)過程中每天搖瓶3次,使藻均勻分布。6)調(diào)節(jié)光強(qiáng)。保持合適的光強(qiáng),白天避免陽光直射。7藻種保藏方法：存藻種時可以根據(jù)保種目的和保種條件的不同

13、分別采取不同的保種方法。1)固體培養(yǎng)基保存法。保種用的固體培養(yǎng)基的營養(yǎng)濃度應(yīng)比正常的液體培養(yǎng)液的高,一般增加一倍。瓊脂量為1-1.5%。固體培養(yǎng)基分裝滅菌后,冷卻待用。將無污染的藻種用噴霧法或劃線法接種到固體培養(yǎng)基上。常用固體培養(yǎng)基保種方法有兩種,一種通常把藻種接種在固體培養(yǎng)基上,在弱光低溫條件下慢慢培養(yǎng)保存，接種一次可以保存半年到一年。另一種方法，接種后首先放在光線充足的地方（防止直射光照射),使藻類細(xì)胞較快速地繁殖起來,直到培養(yǎng)基上出現(xiàn)顏色,即可放入冰箱或冷庫中,一般在5左右的低溫下保存。每天給藻種幾個小時的弱光照。此法保存的時間可長達(dá)2至3年。2)液體培養(yǎng)基保存法。低溫、弱光下培養(yǎng)。一般

14、兩個月更換一次培養(yǎng)液。淡水小球藻在國內(nèi)的培養(yǎng)有幾十年的歷史,因為培養(yǎng)方式簡單，生長速度快，被譽(yù)為罐裝的太陽,一度被大力推廣。小球藻是培育淡水輪蟲的有效餌料之一。 淡水小球藻的培養(yǎng),無非幾個要素，光照、適宜的溫度、營養(yǎng)液。首先說一下光照,一般是大于50l，溫度以5為最佳，在25-3度間都能夠很好的生長，每20個小時就能分裂成4個細(xì)胞。那么第三個要素是營養(yǎng)液，而營養(yǎng)液無非就是氮源、磷源、碳源及一些微量元素,目前使用較多的營養(yǎng)液配方有bg-11、f/2、se培養(yǎng)基等，同時強(qiáng)調(diào)一點(diǎn),實(shí)驗表明，適當(dāng)補(bǔ)充尿素是促進(jìn)小球藻生長的一個很好的方式，同時小球藻可以異養(yǎng)，適當(dāng)添加葡萄糖可以縮短培養(yǎng)時間。藻種的獲得很容易,但是建議用純種的規(guī)范操作的藻種,好的種源是開口的第一步，現(xiàn)在藻種獲得可以通過某寶直接搜索小球藻藻種購買,也可以通過向水生所采購,但是那里藻種普遍較貴，差不多10大洋10ml左右，如果不是科研要求,不建議如此購買，還有就是通過科研院校索要。首先我們要獲得小球藻藻種,這個某