生物制藥作業(yè)

1、 生物制藥思考題1、基因工程藥物制造的主要程序有哪些？ 主要程序：制備目的基因 構(gòu)建重組質(zhì)粒 構(gòu)建基因工程菌或細(xì)胞 培養(yǎng)基因工程菌 分離純化產(chǎn)物 過濾除菌 半成品鑒定 成品鑒定 包裝2、 對由基因重組技術(shù)所獲得的蛋白質(zhì)藥物產(chǎn)品進(jìn)行鑒定時，常做哪些項(xiàng)目分析？ 常做的項(xiàng)目分析：生物活性測定，即效價(jià)測定和蛋白質(zhì)的比活性的測定 理化性質(zhì)鑒定（包括非特異性鑒別、特異性鑒別、相對分 子質(zhì)量測定、等電點(diǎn)測定、肽圖分析、氨基酸成分分析、 蛋白質(zhì)二硫鍵分析） 蛋白質(zhì)含量測定 蛋白質(zhì)純度測定 雜質(zhì)檢測 穩(wěn)定性考察 產(chǎn)品一致性的保證3、 動物基因工程藥物的研究前沿和熱點(diǎn)是什么？研究的前沿和熱點(diǎn)：改進(jìn)表達(dá)載體，提高表

2、達(dá)水平和產(chǎn)量 改進(jìn)培養(yǎng)工藝，降低生產(chǎn)成本 抑制細(xì)胞凋亡，延長培養(yǎng)周期 采用糖基化工程，提高產(chǎn)品質(zhì)量 轉(zhuǎn)基因動物的研究 組織工程的研究4、 什么是單克隆抗體？單克隆抗體有哪些不足？ 單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。不足之處：單克隆抗體固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應(yīng)用范圍。由于單克隆抗體不能進(jìn)行沉淀和凝集反應(yīng)，所以很多檢測方法不能用單克隆抗體完成。單克隆抗體的反應(yīng)強(qiáng)度不如多克隆抗體。制備技術(shù)復(fù)雜，而且費(fèi)時費(fèi)工，所以單克隆抗體的價(jià)格也較高。5、 什么是分子靶向藥物？ 分子靶向藥物是一類作用在細(xì)胞的分子水平上，利用腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間的分子細(xì)胞生物

3、學(xué)上的差異，采用封閉受體、抑制血管生長、阻斷信號傳導(dǎo)通路等方法作用于腫瘤細(xì)胞特定的靶點(diǎn)，特異性地抑制腫瘤細(xì)胞的生長，促使腫瘤細(xì)胞凋亡，同時還降低了對正常細(xì)胞的殺傷作用的藥物。淺談酶法制藥及其應(yīng)用酶，指具有生物催化功能的高分子物質(zhì)。幾乎所有的細(xì)胞活動進(jìn)程都需要酶的參與，以提高效率。沒有酶的參與，新陳代謝幾乎不能完成，生命活動就根本無法維持。酶有如此重要作用，也因此得到重視與開發(fā)。酶作為一種高效生物催化劑，具有高度的特異立體選擇性及區(qū)域選擇性，并在常壓、常溫和pH值中性附近條件下具有十分高效的催化活力。利用酶的高效選擇性催化作用可制造出種類繁多的目的產(chǎn)物，免了化學(xué)法合成中的許多不足。目前，酶工程技

4、術(shù)廣泛應(yīng)用于生物制藥這一領(lǐng)域，作為十分優(yōu)良的手性催化劑酶，用于多種高效手性藥物的合成及制備將十分有效，潛力巨大?，F(xiàn)代酶工程具有技術(shù)先進(jìn)、投資小、工藝簡單、能耗量低、產(chǎn)品收率高、效率高、效益大和污染小等優(yōu)點(diǎn)。以往采用化學(xué)合成、微生物發(fā)酵及生物材料提取等傳統(tǒng)技術(shù)生產(chǎn)的藥品，皆可通過現(xiàn)代酶工程生產(chǎn)，甚至可以獲得傳統(tǒng)技術(shù)不可能得到的藥品。通過查閱資料，在應(yīng)用酶工程法進(jìn)行制藥主要有一下幾個方面：一、應(yīng)用酶工程制備生物代謝產(chǎn)物應(yīng)用固定化細(xì)胞可大量生產(chǎn)各種初級代謝產(chǎn)物或中間產(chǎn)物，如糖、有機(jī)酸和氨基酸等。產(chǎn)品有D-果糖、甘油、1，6-二磷酸果糖、檸檬酸、蘋果酸、富馬酸、乳酸、右旋糖酐、丙氨酸、天冬氨酸、苯丙氨

5、酸、色氨酸、賴氨酸等。利用酶工程技術(shù)生產(chǎn)抗菌素、色素、生物堿、性引誘劑、信息素等生物次級代謝產(chǎn)物，典型的產(chǎn)品有6-氨基青霉烷酸（6-APA）、7-烷基頭孢烷酸（7-ACA）及7-氨基脫乙酰氧頭孢烷酸（7-ADCA）、麥角生物堿、羥化孕酮、可的松和肉瘤堿等。我國用固定化大環(huán)內(nèi)酯-4-丙酯化酶將螺旋霉素轉(zhuǎn)化為丙酰螺旋霉素，用固定化生產(chǎn)米卡鏈霉菌突變菌株也可完成產(chǎn)品的轉(zhuǎn)化。二、應(yīng)用酶工程技術(shù)轉(zhuǎn)化甾體利用微生物酶工程技術(shù)不僅研究提高某一步轉(zhuǎn)化反應(yīng)的專一性和收率或?qū)ふ夷骋晦D(zhuǎn)化反應(yīng)代替某一個用化學(xué)合成法難以進(jìn)行的反應(yīng)，而且進(jìn)一步綜合應(yīng)用了酶抑制劑、生化阻斷突變株和細(xì)胞通透性的改變等生物技術(shù)，從而制得了雄甾

6、-1，4-二烯-3,17-二酮（ADD）、雄甾-4-烯-3,17-二酮（4AD）和3-氧聯(lián)降膽甾-1，4-二烯-20酸（BDA）等關(guān)鍵中間體，是復(fù)雜的天然資源經(jīng)過幾步反應(yīng)就和合成了各種性激素和皮質(zhì)激素。應(yīng)用固定化生物細(xì)胞技術(shù)可生產(chǎn)強(qiáng)的松、11-取氧強(qiáng)的松、氫化可的松、-膽甾烯酮、-雄二烯-3.17-二酮等甾體化合物。三、應(yīng)用酶工程生產(chǎn)抗生素和維生素應(yīng)用酶工程可以制備6-APA（青霉素?；福?、7-ACT（頭孢菌素?；福㈩^孢菌素(頭孢菌素酰化酶)、7-ADCA(青霉素?；?、脫乙酰頭孢菌素(頭孢菌素乙酸酯酶)，今年來還進(jìn)行固定化產(chǎn)黃青霉（青霉素合成酶系）細(xì)胞生產(chǎn)青霉素的研究，合成青霉素和頭

7、孢菌素前體物的最新工藝也采用酶工程的方法。制造2-酮基-L-古龍?zhí)撬?山梨糖脫氫酶及L-山梨糖醛氧化酶)、肌醇(肌醇合成酶)、L-肉毒堿(膽堿酯酶)、等。由山梨醇和葡萄糖生產(chǎn)維生素及丙稀酰胺的生產(chǎn)也采用酶工程的方法。四、應(yīng)用酶工程生產(chǎn)氨基酸和有機(jī)酸 生產(chǎn)DL-氨基酸(氨基?；?、L-賴氨酸(二氨基庚氨酸脫羥酶或-氨基-己內(nèi)酰胺水解酶和消旋酶)、尿酐酸(L-組氨酸氨解酶)、L-酪氨酸及L-多巴(-酪氨酸酶)、L-天冬氨酸(天冬氨酸合成酶)、L-苯丙氨酸(L-苯丙氨酸氨解酶)、L-谷氨酸(L-谷氨酸合成酶)、L-絲氨酸(轉(zhuǎn)甲基酶)、L-色氨酸(色氨酸合成酶)、天冬酰胺(天冬酰胺合成酶)、谷胱甘肽

8、(復(fù)合酶系)、-氨基丁酸(谷氨酸脫羧酶)等氨基酸。生產(chǎn)乳酸(乳酸合成酶系)、葡萄糖酸(葡萄糖氧化酶與過氧化氫酶)、L-蘋果酸(延胡索酸酶)、長鏈二羧酸(加氧酶和脫氫酶)、衣康酸(復(fù)合酶系)、L(+)-酒石酸(環(huán)氧琥珀酸水解酶)等有機(jī)酸.五、應(yīng)用酶工程生產(chǎn)核苷酸類藥物腺嘌呤核苷酸（AMP）由產(chǎn)蛋白假絲酵母菌體用熱水提取核酸，再經(jīng)核酸酶水解制得。脫氧核苷酸由魚白提取脫氧核糖核酸（RNA）后，經(jīng)5-磷酸二酯酶酶解制得。現(xiàn)有富含核酸的動植物（花粉等）提取核糖核酸（RNA），再用5-磷酸二酯酶酶解為磷酸酰苷（AMP）、磷酸胞苷（CMP）、磷酸尿苷（UMP）及磷酸尿苷（GMP）制得混合核苷酸。肌苷酸由酰苷脫氨酶制得。ATP和AMP分別由氨甲酰磷酸激酶、激酶加乙酸激酶制得。酶工程作為生物工程的重要組成部分，其作用之重要、研究成果之顯著已為世人所公認(rèn)。充分發(fā)揮酶的催化功能、擴(kuò)大酶的應(yīng)用范圍、提高酶得應(yīng)用效率是酶工程應(yīng)用研究的主要目標(biāo)。21世紀(jì)酶工程的發(fā)展主題是：新酶的研究與開發(fā)、酶的優(yōu)化生產(chǎn)和酶的高效應(yīng)用。除處采用常用技術(shù)外，還要借助基因?qū)W和蛋白質(zhì)組學(xué)的最新知識，借助DNA重排和細(xì)胞、噬菌體表面展示技術(shù)進(jìn)