紫茉莉葉片組織培養(yǎng)綜述

1、紫茉莉葉片組織培養(yǎng)綜述摘要：目前，組織培養(yǎng)技術(shù)是一項(xiàng)處于快速發(fā)展并有待完善的新型生物培養(yǎng)技術(shù)，其在生物研究個(gè)方面都有很高的利用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)以紫茉莉葉片為研究材料，研究不同濃度配比的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)紫茉莉生長(zhǎng)愈傷組織產(chǎn)生的影響，最終確立最適的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的配比，為紫茉莉優(yōu)良變異種的保存利用奠定基礎(chǔ)。在紫茉莉葉片愈傷誘導(dǎo)中，最適生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比的確立需要考錄到愈傷組織的褐化、氧化、玻璃苗的防止，最終培養(yǎng)出健康生長(zhǎng)力旺盛的愈傷組織，以便于更好的誘導(dǎo)不定芽以及不定根，為紫茉莉苗木再生體系的建立打下基礎(chǔ)。組織培養(yǎng)中保持無菌環(huán)境是實(shí)驗(yàn)成敗的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：紫茉莉 組織培養(yǎng) 最適生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度 愈傷組織 無菌環(huán)境

2、引言：組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)是細(xì)胞的全能性，細(xì)胞全能性是指細(xì)胞經(jīng)分裂和分化后仍具有形成完整有機(jī)體的潛能或特性。在多細(xì)胞生物中每個(gè)體細(xì)胞的細(xì)胞核具有個(gè)體發(fā)育的全部基因，只要條件許可，都可發(fā)育成完整的個(gè)體。本實(shí)驗(yàn)就是根據(jù)這一理論基礎(chǔ)將高分化的紫茉莉葉片細(xì)胞脫分化形成原始干細(xì)胞團(tuán)即愈傷組織。愈傷組織就是紫茉莉在分化，擴(kuò)大培養(yǎng)的原始材料。生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在植物生長(zhǎng)發(fā)育上有很重要的作用，合理的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比濃度能使高度分化的植物組織細(xì)胞脫分化，產(chǎn)生原始干細(xì)胞，即愈傷組織。再用合適的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度處理愈傷組織即可脫分化產(chǎn)生再生植株。在愈傷組織誘導(dǎo)的時(shí)候容易產(chǎn)生褐化、氧化現(xiàn)象，其影響因素有培養(yǎng)基類型、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃

3、度、光照、溫度等。正文：一、培養(yǎng)條件：紫茉莉的組織培養(yǎng)即無菌培養(yǎng)，也就是要求培養(yǎng)的材料不帶有雜菌。從農(nóng)場(chǎng)切取葉片材料時(shí)，應(yīng)選擇健壯無病蟲母株，取幼嫩、分生能力強(qiáng)的部位，以利生長(zhǎng)。去材料后需要滅菌處理，先用自來水沖洗十幾分鐘，沖洗干凈后，用70%的酒精浸泡20-30秒鐘消毒。接著用無菌水（經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水）沖洗三次，再用0.1%的氯化汞浸泡6分鐘消毒，最后用無菌水沖洗3-4次本研究的所有離體培養(yǎng)試驗(yàn)中，每處理組接種十瓶，重復(fù)3次，培養(yǎng)基pH值均調(diào)至5.86.0。蔗糖濃度單位為g/L，激素濃度單位為mg/L。培養(yǎng)溫度為25，先暗培養(yǎng)一周，再在光照強(qiáng)度為2000-2500lx，光照/黑暗時(shí)間是12

4、h/12h進(jìn)行培養(yǎng)。二、試驗(yàn)過程1.培養(yǎng)基配制（1）準(zhǔn)備母液：取50mL燒杯，量取25mL大量元素母液、0.5mL微量元素母液、5mL有機(jī)母液、5mL鐵鹽母液，適宜濃度的激素置于燒杯中備用。（2）制備培養(yǎng)基：取500mL燒杯一只，加入500mL蒸餾水，標(biāo)記液位線，將蒸餾水到出2/3。稱取2.5克瓊脂粉倒入燒杯中，將燒杯放在電爐上煮沸，待瓊脂完全溶化后加入15g蔗糖，充分溶解后加入含有大量元素母液、微量元素母液等的混合液完全倒入大燒杯中，加熱至沸騰后將燒杯遠(yuǎn)離火源，并用蒸餾水定容至液位線。（3）調(diào)pH：用1mol/L HCL或1mol/L NaOH將溶液培養(yǎng)基的pH調(diào)至5.8-6.0。（4）分裝

5、：將配好的培養(yǎng)基分裝至100mL的三角瓶中，每瓶約裝2030mL。分裝完成后，用封口膜封口，貼上標(biāo)簽。（5）高壓滅菌：將分裝好的培養(yǎng)基放入滅菌鍋的消毒桶內(nèi)，在外層鍋內(nèi)加入適量水，將排氣管插入消毒桶的槽內(nèi)后蓋上鍋蓋，擰緊螺絲，接通電源。壓力升值0.05MPa時(shí)，斷開電源打開放氣閥，待壓力歸零后繼續(xù)加熱。壓力指針移至0.10.15MPa時(shí)，通過控制電源使壓力維持在這個(gè)區(qū)間15至20分鐘。關(guān)閉電源，打開放氣閥，待壓力歸零后取出培養(yǎng)基。室溫下放置培養(yǎng)基2-3天，確定培養(yǎng)基沒有被污染后可用于接種。2.材料接種用75%酒精擦拭超凈工作臺(tái)臺(tái)面，將培養(yǎng)基以及接種用具置于超凈工作臺(tái)上，用紫外線滅菌30分鐘，通風(fēng)

6、10分鐘后開始接種工作。材料消完毒后用經(jīng)過高壓滅菌的濾紙將外植體表面的水吸干，用經(jīng)過滅菌的剪刀剪成適當(dāng)大小的塊體，然后迅速將外植體接種到培養(yǎng)基表面，正面向上。揭開培養(yǎng)瓶時(shí)要在酒精燈的無菌區(qū)內(nèi)進(jìn)行，注意剪刀和鑷子要經(jīng)過酒精燈烘烤消毒，冷卻后再用來處理外植體，以免燙傷燙死培養(yǎng)材料。三、結(jié)果與分析不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)組合對(duì)愈傷形成的影響1.無生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑加入的培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的外植體生長(zhǎng)緩慢，無愈傷組織產(chǎn)生，在14天時(shí)由葉脈處發(fā)出不定根。2.在有添加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基里，八個(gè)處理（MS+2，4-D0.5mg/L+6-BA0.5mg/LMS+2，4-D1.0mg/L+6-BA1.0mg/LMS+2，4-D1.5mg/L+6-BA1.5mg/LMS+2，4-D 2.0mg/L+6-BA2.0mg/LMS+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/LMS+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L MS+NAA1.5mg/L+6-BA1.5mg/LMS+NAA2.0mg/L+6-BA2.0mg/L）在14天后均有粉紅色、綠黃色愈傷組織發(fā)生，但以的愈傷長(zhǎng)勢(shì)較好，三周后愈傷停止生長(zhǎng)并漸漸變黑，繼代后愈傷組織又開始生長(zhǎng)，但繼續(xù)變黑，繼代后兩周大多數(shù)愈傷組織變黑死亡。（問題待解決中）四、討論變黑問題中猜測(cè)原因：1.營(yíng)養(yǎng)缺乏，培養(yǎng)后期變黑因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)缺乏導(dǎo)