復(fù)件無菌技術(shù)及無菌操作1

1、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn),無菌技術(shù)及無菌操作,無菌技術(shù) 滅菌方法 細(xì)胞培養(yǎng)無菌操作基本技術(shù),無菌技術(shù),無菌技術(shù)是用于細(xì)胞培養(yǎng)過程的術(shù)語，其基本原理可用于所有的細(xì)胞類型。無菌技術(shù)有兩個(gè)主要目的，一是防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他來源的微生物（如皮膚、衣服或周圍環(huán)境的微生物）污染。二是防止實(shí)驗(yàn)工作者（包括老師和學(xué)生）被微生物感染。,無菌試驗(yàn),無菌實(shí)驗(yàn)室,無菌操作,細(xì)胞培養(yǎng)無菌操作,P2 級(jí)無菌操作臺(tái),無菌操作,無菌操作室,無菌操作室,滅菌方法,消毒：一般指消滅病原菌和有害微生物 的營養(yǎng)體。 滅菌：一般指殺滅一切微生物的芽孢孢子及休眠體。 滅菌的方法： 一、加熱法 二、過濾除菌 三、輻射滅菌 四、化學(xué)藥品滅菌,一、加

2、熱法,1、干熱滅菌 方法：熱空氣滅菌和 灼燒。 機(jī)理：利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌目的。,2、濕熱滅菌 方法：高壓蒸汽滅菌法、常壓蒸汽滅菌法、煮沸消毒法和超高溫殺菌法。 機(jī)理：利用高溫（高于100）導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)變性達(dá)到目的。,干熱滅菌箱,濕熱滅菌分類,1 高壓蒸汽滅菌法 2 常壓蒸汽滅菌法（間歇滅菌） 可采用阿諾氏流動(dòng)蒸汽滅菌器進(jìn)行。 3 煮沸消毒法 4 超高溫殺菌,二、過濾除菌,主要是選用孔徑?。ㄒ话?.2微米或0.4微米）的微孔材料（如磁土、 石棉、超濾膜等）制作成專門的細(xì)菌濾器，通過抽氣泵進(jìn)行減壓過濾。 最廣泛的過濾器有蔡氏過濾器和微孔濾膜過濾器。許多材料如血清、抗

3、生素及糖溶液都是采用此中方法過濾。 無菌濾膜（孔徑0.2微米）過濾可以有效除去細(xì)菌，但不能除去病毒，因此過濾后的溶液不一定是沒有病毒的。,配液 過濾 除菌連動(dòng)線,三 、輻射滅菌,實(shí)驗(yàn)室的輻射滅菌通常用紫外線滅菌。 紫外線波長在200300nm具有殺菌作用， 其中以265266nm殺菌力最強(qiáng)。 機(jī)理：紫外線誘導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA鏈的交聯(lián)，另外由于輻射使空氣中的氧氣電離成氧離子，氧離子再使氧氣氧化生成臭氧或使水氧化生過氧化氫，過氧化氫和臭氧有殺菌作用。紫外燈照射距離以不超過1.2米為宜。,四、化學(xué)藥品滅菌,化學(xué)藥品滅菌是應(yīng)用能抑制或殺死微生物的化學(xué)制劑進(jìn)行消毒滅菌的方法。 機(jī)理：能破壞

4、細(xì)菌代謝機(jī)能使細(xì)菌不能增殖。 殺菌劑：能破壞細(xì)菌代謝機(jī)能并有致死作用的化學(xué)試劑 。如重金屬離子等。 抑菌劑：只是阻抑細(xì)菌代謝機(jī)能使細(xì)菌不能增殖的化學(xué)試劑。如磺胺類試劑等 實(shí)驗(yàn)室常用的殺菌劑有2%煤酚皂溶液（來蘇爾），0.1%升汞，3%5%甲醛溶液，75%乙醇溶液等。,細(xì)胞培養(yǎng)無菌操作基本技術(shù) (1)實(shí)驗(yàn)前,無菌室及無菌操作臺(tái)用紫外燈照射30-60分鐘滅菌,用70% 酒精擦拭無菌操作臺(tái)面,并開啟無菌操作臺(tái)風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后,才可開始實(shí)驗(yàn)操作.每次操作只處理一株細(xì)胞,以免造成細(xì)胞交叉污染.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái).如需要繼續(xù)進(jìn)行下一個(gè)實(shí)驗(yàn),則用70% 酒精擦拭無菌操作臺(tái)面,再讓無菌操作臺(tái)風(fēng)

5、機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后,才可進(jìn)行下一個(gè)實(shí)驗(yàn)操作。,(2)無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔與寬敞,必要物品,如試管架,移液器或吸管頭等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完后應(yīng)及時(shí)移出,以利氣體流通.實(shí)驗(yàn)用品要用70%酒精擦拭后才能帶入無菌操作臺(tái)內(nèi).實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在操作臺(tái)中央無菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,勿在邊緣非無菌區(qū)域操作。 (3)小心取出無菌實(shí)驗(yàn)用品,避免造成污染.切勿碰觸吸管與吸頭頭部或容器瓶口,不要在打開的容器正上方操作實(shí)驗(yàn).容器打開后,用手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放在臺(tái)面上。,(4)工作人員應(yīng)注意自身的安全,必須穿戴實(shí)驗(yàn)衣與手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn).對于來自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無菌操作臺(tái)(至少兩級(jí)).操作過程中,應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生,小心有毒性試劑,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳物品傷人等。 (5)定期檢查下列項(xiàng)目:CO2鋼瓶內(nèi)的CO2壓力;CO2培