同型半胱氨酸測定檢測操作程序

1、.概述血清同型半胱氨酸(Hcy)是人體內(nèi)含硫氨基酸的一個重要的代謝中間產(chǎn)物，可能是動脈粥樣硬化等心血管疾病發(fā)病的一個獨立危險因子。Hcy水平升高被認為是動脈粥樣硬化性疾病獨立的漸進性致病因素，血漿中同型半胱氨酸含量與遺傳因素、營養(yǎng)因素、雌激素水平、年齡因素等有關(guān)，同型半胱氨酸又稱為高半胱氨酸，Hcy的正常參考值隨測定方法和種族人群的不同而有所不同，一般正?？崭寡獫{總Hcy水平為5-15mol/L。研究表明：Hcy每升高5umol/L腦卒中風險升高59%，缺血性心臟病風險升高32%；Hcy每降低5umol/L腦卒中風險降低24%，缺血性心臟病風險降低16%.Hcy水平與心血管事件風險呈正相關(guān)。1

2、 目的規(guī)范血清同型半胱氨酸檢測測試，確保檢測結(jié)果準確性和重復性。2 檢測方法和原理2.1檢測方法：速率法2.2檢測原理：本產(chǎn)品基于一種新型酶法，樣本中的氧化型Hcy被轉(zhuǎn)化為游離型Hcy后，進行一系列循環(huán)反應，這種基于共價 底物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的酶循環(huán)反應系統(tǒng)大大提高了檢測的靈敏度，主要是利用S-腺苷同型半胱氣酸(SAH)水解酶反應原理， 在該反應中SAH被水解酶水解成腺苷和Hcy,腺苷立即水 解成氨和次黃嘌呤，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，NADH 轉(zhuǎn)化為NAD,樣本中Hcy濃度與NADH轉(zhuǎn)化速率成正比。3 標本采集與保護新鮮無溶血血清或EDTA、肝素抗凝血漿遵守以下推薦的血清標本處理，運行和儲存步驟3.

3、1用真空采樣管采集血液標本時須遵守常規(guī)注意事項3.2離心前使標本完全自然形成凝塊3.3全程保證樣品管的密閉狀態(tài)3.4盡快分離血清，并及時測定3.5如果標本不能在24小時內(nèi)檢測或運送標本時，將標本保存在4或更低溫度的環(huán)境中：3.6冷藏標本室溫放置20分鐘后再測定；3.7冷凍標本室溫解溶后放置20分鐘后再測定3.8不符合標本處理3.8.1溶血和乳糜血標本在報告單的備注欄注明3.8.2標本量過少的標本，嚴重溶血和乳糜血標本與臨床溝通并將標本退回，填寫不合格標本拒接登記。4 試劑和設(shè)備4.1試劑采用深圳奧薩制藥有限公司試劑4.1.1試劑組成試劑1 S-腺苷甲硫氨酸（SAM) 0. 1 mM煙酸胺腺嘌呤

4、二核苷酸（NADH) 0. 3 mM三（2-羧乙基）膦氯化氫（TCEP) 0. 5 mM酮戊二酸（Oxoglutarate) 5. 0 mMHcy甲基轉(zhuǎn)移酶（HMTase) 5.0 KU/L試劑2 谷氨酸脫氫酶（GLDH） 10.0 KU/L S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）水解酶（SAHase） 3.0 KU/L腺苷脫氨酶（ADA） 5.0 KU/L4.1.2試劑準備;恢復室溫后使用4.1.3試劑保存試劑28避光保存，并于有效期為12個月4.2質(zhì)控品質(zhì)控品為與試劑配套的臨床化學質(zhì)控品4.3警告和注意事項4.3.1只可用于體外診斷；4.3.2試劑中含有防腐劑和穩(wěn)定劑，可能存在一定刺激作用和毒性，

5、請勿直接接觸皮膚和眼睛，請勿吞服；4.3.3試劑盒的測定結(jié)果僅作為臨床各種疾病的輔助診斷依據(jù)4.4儀器便攜式同型半胱氨酸監(jiān)測儀5 操作程序5.1檢測過程流程簽收樣品離心上機檢測審核報告簽發(fā)報告標本保存5.2樣本簽收嚴格按標本接收程序簽收標本5.3標本處理以3000r/min，離心610min，分離血清上機測定，若標本不能及時檢測，將分離血清冷藏于28的冰箱內(nèi)5.4標本檢測5.4.1從冰箱中取出試劑1 (R1)和試劑2 (R2),使試劑恢復至室溫；5.4.2按照便攜式同型半胱氨酸檢測儀操作方法，插卡，輸入樣本信息，確認；5.4.3按照儀器提示，精密量取8 u 1樣本加入試劑1的比色管中；5.4.

6、4啟動反應，等到儀器發(fā)出提示音后，按照儀器操作步驟，精密量取40 u 1試劑2加入比色管中；5.4.5儀器啟動檢測；5.4.6自動檢測完成后，讀取檢測結(jié)果或打印報告5.5檢驗后標本保存保存在標本冰箱內(nèi)，保存期為7d6 校準程序6.1校準品的準備和儲存直接使用，28保存。6.2校準條件在室內(nèi)質(zhì)控失控，或更換儀器主要配件，或進行大保養(yǎng)后均需校準。無特殊情況校準周期為21d6.3校準程序本儀器校準由廠家工程師負責校準。7 質(zhì)量控制程序7.1控制品的準備和儲存試劑28避光保存7.2控制品水平和分析批長度每24h至少進行1批。7.3質(zhì)控操作程序參見生化組的質(zhì)量控制操作程序。8 性能參數(shù)8.1準確性 線性

7、偏差不超過10%8.2精密度 CV108.3線性范圍 348umol/L9 生物參考區(qū)間015umol/L10異常結(jié)果的處理結(jié)果與診斷不符或兩次結(jié)果差異較大時，應及時與臨床溝通。11 臨床意義10%的冠心病患者與同型半胱氨酸升高有關(guān)，輕、中度同型半胱氨酸水平升高可使心血管疾病死亡危險性增加4-6倍，血漿總Hcy水平每升高5mol/L則冠心病危險性男性增加60%，女性增加80%，相對危險性男性為1.6，女性為1.8，相當于總膽固醇每升高20mg/dL的危險性，因此成為冠心病的一個獨立危險因素。血漿同型半胱氨酸水平與冠狀動脈病變血管的支數(shù)有一定關(guān)系，有人研究結(jié)果表明，單支、雙支、多支血管病變的患者

8、血漿Hcy水平呈逐級上升趨勢。并且與血管病變的嚴重程度有關(guān)，研究表明，冠狀動脈狹窄99%的患者血漿Hcy水平明顯高于狹窄75%的患者。血漿同型半胱氨酸水平還與冠心病患者的遠期預后、生存率、病死率有關(guān)。12 干擾因素抗壞血酸0.5g/L對實驗結(jié)果無影響。膽紅素855mol/L對實驗結(jié)果無影響。血紅蛋白5.0g/L對實驗結(jié)果無影響。乳糜2.0%對實驗結(jié)果無影響。13 安全防護措施13.1血液標本運輸必須保證運輸過程的生物安全，防止溢出。血液標本溢出后，應立即對污染環(huán)境和設(shè)備進行消毒處理；13.2對標明有污染性疾病的血液標本應特別的防護，以不污染環(huán)境和保證工作安全為前提；13.3在進行血液分析的一切

9、操作過程中應按照檢驗科生物安全管理程序進行；13.4與血液標本接觸的一切器皿。儀器組裝/拆卸組合零件都應視為污染源，因此操作人員不小心接觸到了這種污染源時，應立即用清水清洗被污染區(qū)域并進行消毒；13.5如果操作人員皮膚或衣服上污染（沾到）了血液或廢液應立即沖洗并進行消毒處理。如果眼睛被濺入了血液或廢液應立即用大量清水沖洗并進行必要的醫(yī)療措施。13.6血液標本離心的過程中所有標本都應該加蓋，離心后，開啟試管時應注意防止氣溶（霧）膠污染環(huán)境；13.7所有檢測過的血液標本及有關(guān)廢物，都會給您帶來潛在的危險及生物污染。所有廢棄樣本及廢物的處理方法同血液標本的處理程序。14 參考文獻14.1深圳奧薩制藥有限公司試劑盒說明書14.2臨床實驗