暗視場(chǎng)和相差顯微鏡.ppt

1、暗視場(chǎng)顯微鏡及相差 顯微鏡的使用,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握暗視場(chǎng)顯微鏡及相差顯微鏡的原理、構(gòu)造及使用方法 。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,一 暗視場(chǎng)顯微鏡 1 實(shí)驗(yàn)原理 2 結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 3 使用方法 4 注意事項(xiàng) 二 相差顯微鏡 1 實(shí)驗(yàn)原理 2 結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 3 使用方法 三 觀察動(dòng)植物細(xì)胞的胞質(zhì)運(yùn)動(dòng)和胞質(zhì)環(huán)流,一 暗視場(chǎng)顯微鏡,（一 ）實(shí)驗(yàn)原理 暗視野顯微鏡是以丁達(dá)爾效應(yīng)為基礎(chǔ)，通過特殊的聚光器，使照射樣品的直射光不能進(jìn)入物鏡，只有被照樣品表面反射或衍射的散射光進(jìn)入物鏡，因而在黑暗的視野中形成物體明亮的像。,圖1 暗視野聚光器工作原理,（二） 結(jié)構(gòu)特點(diǎn),1.丁達(dá)爾效應(yīng)：光通過渾濁媒質(zhì)時(shí) ,渾濁媒質(zhì)所呈現(xiàn)的光的強(qiáng)烈散射現(xiàn)象,

2、通常稱為丁達(dá)爾效應(yīng) 2.暗視野照明方法 （1）暗視場(chǎng)光擋 （2）暗視場(chǎng)聚光器 拋物面聚光器 心形聚光器,（三 ）使用方法,1. 換上暗視野聚光器 2. 聚光器和載玻片之間加香柏油并貼緊（或直接用干燥系聚光器） 3. 聚光器光路合軸 4. 更換需用的高倍物鏡進(jìn)行鏡檢觀察,（四）應(yīng)用價(jià)值及注意事項(xiàng),觀察活細(xì)胞結(jié)構(gòu) ,細(xì)胞器運(yùn)動(dòng)等分子布朗運(yùn)動(dòng) . 觀察超微質(zhì)點(diǎn)位移(0.20.004微米) 提高分辨力50倍 由于是散射光成像和實(shí)體有差別 ,僅有結(jié)構(gòu)的光輪廓，不能分辨內(nèi)部改造,觀察原生動(dòng)物的結(jié)構(gòu)，細(xì)胞器，細(xì)胞質(zhì)中超微質(zhì)點(diǎn)的運(yùn)動(dòng)，存在方式，觀察植物細(xì)胞器，細(xì)胞質(zhì)運(yùn)動(dòng)。,（五） 鏡檢,二 相差顯微鏡,（一）

3、實(shí)驗(yàn)原理 相差顯微鏡是利用特殊的相差裝置 ,通過光的衍射和干涉效應(yīng)把光波通過樣品的相位差變?yōu)檎穹钜栽龃笸该魑矬w的明暗反差 ,從而可以用來觀察未染色的活體組織和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的一種儀器,相位: 是指在某一時(shí)間上，光的波動(dòng)所能達(dá)到的位置 . 相差: 是指相同波長(zhǎng)的光線經(jīng)過折射率不同的介質(zhì)，其相位發(fā)生變化而產(chǎn)生的位差，相差一般不為肉眼所分辨，而相位的變化是由光程的差別造成的。 光程: 是指媒質(zhì)的折射率和媒質(zhì)厚度的乘積。 衍射: 光在不均一的媒質(zhì)中傳播，其方向發(fā)生彎曲變化，形成衍射光，此為衍射現(xiàn)象。衍射光和直射光比較有1/4 的相位差，振幅亦弱 。 干涉: 直射光和衍射光相遇會(huì)發(fā)生迭加現(xiàn)象造成振幅的變化，

4、或明或暗。,圖2 光波通過不同介質(zhì)時(shí)產(chǎn)生的相位差,圖3 直射光及衍射光的產(chǎn)生與波動(dòng),圖4 相差顯微鏡的光路圖,（二 ） 相差顯微鏡的結(jié)構(gòu)特 1. 用環(huán)狀光闌代替可變光闌：把直射光所成的像從衍射旁像中分出來。 2. 用相差物鏡(內(nèi)含相板)代替普通物鏡 相板結(jié)構(gòu) 共軛面:環(huán)狀，通過直射光 補(bǔ)償面:非環(huán)狀，通過衍射光 相板作用:將直射光和衍射光分別加以相位調(diào)整 及強(qiáng)度削弱 . 相板類型:明相差或負(fù)相差 ,暗相差或 正相差 . 3. 用中心望遠(yuǎn)鏡合軸調(diào)中 4. 光源和濾色鏡：強(qiáng)光低熱和綠色濾色鏡,圖5 相板結(jié)構(gòu)示意圖,相差裝置的安裝 相差物鏡的調(diào)換安裝 轉(zhuǎn)盤聚光器的調(diào)換安裝 把綠色濾色鏡放入鏡座的濾色

5、鏡架上 聚光器的調(diào)中 相板圓環(huán)與環(huán)狀光闌圓 ,薄則環(huán)的合軸調(diào)中 相差物鏡與環(huán)狀光闌的匹配 把CT放入目鏡筒 明環(huán)和暗環(huán)的聚焦 明環(huán)和暗環(huán)的調(diào)中重疊 回裝觀察目鏡,（三） 使用方法,圖6 相差聚光器及合軸望遠(yuǎn)鏡,圖7 光環(huán)與相板的合軸過程 a 未調(diào)整狀態(tài) b 近調(diào)整狀態(tài) c 正常態(tài),字母反差 應(yīng) 用 P 正觀察細(xì)胞和細(xì)胞核的內(nèi)部結(jié)構(gòu) N 負(fù)觀察微小的物體 ,如孢子 ,鞭毛和活的樣品等 H 高當(dāng)樣品反差較低時(shí) L 低當(dāng)樣品反差較高時(shí) M 中當(dāng)樣品反差為中等時(shí),四 相差物鏡的選擇,圖8 光的干涉及明暗相差形成的圖解,（五）觀察: 培養(yǎng)的草履蟲裝片及其它原生動(dòng)物 鴨趾草下表皮（質(zhì)點(diǎn)顫動(dòng)） 鴨趾草雄蕊毛（胞質(zhì)環(huán)流） 注意事項(xiàng): 制片愈薄愈好（20微米以下） 必須加蓋片，否則圓環(huán)和亮環(huán)不重合，反差不好。 玻片無傷，均勻，平整，以免亮環(huán)發(fā)生歪斜，制片厚度不