產(chǎn)前篩查實驗室檢查ppt課件

1、產(chǎn),篩,實,驗,室,檢,教學技能培訓小講座,支小敬/陳幫丹,日期：2018年5月16日,六盤水市人民醫(yī)院檢驗科,查,第一部分,產(chǎn)篩背景介紹,出生缺陷,唐氏綜合癥,18-三體綜合征,開放性神經(jīng)管缺陷,產(chǎn)前篩查,產(chǎn)前篩查是指通過簡便、經(jīng)濟和較少創(chuàng)傷的檢測方法，從孕婦群體中發(fā)現(xiàn)某些懷疑有先天性缺陷或遺傳性疾病胎兒的高危孕婦，以便進一步明確診斷,出生缺陷,出生缺陷又稱先天缺陷，是指由于先天性、遺傳性和不良環(huán)境等原因引起的出生時存在的各種結(jié)構(gòu)性畸形和功能性異常的總稱。 我國是人口大國，也是缺陷和殘疾高發(fā)國家,每年約有2030萬肉眼可見先天畸形兒出生，加上出生后數(shù)月或數(shù)年才顯現(xiàn)出來的缺陷，先天殘疾兒總數(shù)竟

2、高達80120萬，約占我國每年出生人口總數(shù)的4%6,常見出生缺陷,神經(jīng)系統(tǒng)畸形：無腦畸形、腦膨出、脊柱裂、先天性腦積水等 遺傳代謝病及多發(fā)畸形：21-三體綜合征、苯丙酮尿癥等 頭部器官畸形：先天性白內(nèi)障、小眼畸形等 腹壁缺損及疝：腹裂畸形、臍膨出、臍疝等 消化系統(tǒng)畸形：腭裂、唇裂、食道閉鎖、狹窄和食道氣管瘺等 先天性心臟?。悍?、室間隔缺損、法洛四聯(lián)癥等 泌尿生殖系統(tǒng)畸形：尿道下裂、先天性腎囊腫、隱睪、外生殖器兩性畸形。 四肢畸形：足變形、多指（趾）畸形等 皮膚畸形：血管瘤、色素痣,唐氏綜合癥,唐氏綜合征，又名21三體綜合征，是一種人類最常見的染色體異常引起的疾病,發(fā)病率約為1：6001：800

3、,21三體綜合征的臨床特征： 先天性智力障礙 特殊面容、精神、體格發(fā)育遲滯 器官組織的多發(fā)性畸形 (心臟, 消化道等,臨床表現(xiàn),18-三體綜合征,也稱為Edward綜合征,18-三體綜合征,生長發(fā)育遲緩，嚴重智力低下。多數(shù)在出生后一歲內(nèi)死亡，極少數(shù)活到兒童期,唇裂或腭裂，全身骨骼發(fā)育異常。特殊握拳姿勢，手指弓形紋增多，1/3為貫通掌“搖椅樣畸形足,臨床 表現(xiàn),眼間距寬、眼裂小、內(nèi)眥贅皮，耳廓 畸形低位,開放性神經(jīng)管缺陷,神經(jīng)管缺陷是一類中樞神經(jīng)系統(tǒng)的出生缺陷，是一種多基因遺傳病，是從胚胎時期發(fā)育時神經(jīng)管不能閉合所致的畸形。臨床上的主要表現(xiàn)有無腦兒、開放性脊柱裂、閉合性脊柱裂、腦膨出等。胎兒常在

4、圍產(chǎn)期死亡，即使存活下來也有嚴重的功能障礙，不能正常生活,產(chǎn)篩必要性,我國目前每年新生兒2000萬，其中有13-20的先天性缺陷患兒 21-三體綜合征、18-三體綜合征，神經(jīng)管畸形，危害非常嚴重，而且發(fā)病率較高，據(jù)統(tǒng)計三種疾病的發(fā)病率如下表,我國約為1/600-1/800；我國新生兒年出生約為2000萬，則每年新增唐氏兒27000余名,產(chǎn)篩必要性,據(jù)統(tǒng)計我國每出生一例唐氏患兒將給社會造成25萬元左右的經(jīng)濟負擔。每年政府將支付67.5億元左右的經(jīng)費用于患兒的醫(yī)療、生活、和社會救濟。同時對患兒的家庭造成長期沉重的精神負擔和經(jīng)濟壓力，對我們國家的人口素質(zhì)、國民經(jīng)濟發(fā)展以及社會穩(wěn)定都會產(chǎn)生重大的影響，

5、由此可見唐氏綜合征已成為影響我國國民經(jīng)濟發(fā)展和出生人口素質(zhì)的重要因素之一。如何在產(chǎn)前發(fā)現(xiàn)唐氏綜合征胎兒，防止和減少唐氏綜合征胎兒的出生，是當前優(yōu)生和產(chǎn)前診斷的重要任務(wù)。 由于這些缺陷缺乏有效的治療手段，患兒的出生給家庭和社會帶來了眾多的不良影響。 綜上所述，進行產(chǎn)前篩查對提高出生人口質(zhì)量來講具有特殊重要性,第二部分,產(chǎn)前篩查血清學指標,PAPP-A,AFP,F- HCG,E3,抑制素A,產(chǎn)前篩查血清學檢查,產(chǎn)前篩查血清學檢查是通過孕期母體血清甲胎蛋白（AFP）、血清人絨毛膜促性腺激素（HCG）、血清人絨毛膜促性腺激素游離亞基（F- HCG）、抑制素A、妊娠相關(guān)蛋白A（PAPP-A）和非結(jié)合雌三

6、醇（E3）指標結(jié)合孕婦的年齡、體重、孕周、病史等進行綜合風險評估，得出胎兒罹患唐氏綜合癥、18-三體綜合征和開放性神經(jīng)管缺陷的風險,產(chǎn)前篩查血清學指標,1,PAPP-A,PAPP-A是一個大分子蛋白復(fù)合物，產(chǎn)生于胎盤，孕3-4周即可在母體中檢出，其后隨著孕周的增多而增高。在早孕期為異常胎兒表現(xiàn)為降低異常,產(chǎn)前篩查血清學指標,2,AFP,AFP是來源于胎兒肝臟和卵黃囊的一種糖蛋白，從妊娠7周起濃度逐漸升高，至28-32周達到高峰，少量AFP經(jīng)腎臟排泄進入羊水，并通過胎盤屏障進入母親血液循環(huán)中。唐氏兒和18三體患兒.由于肝臟發(fā)育不全，AFP合成減少，所以母血中相應(yīng)減少，懷有21-三體綜合征胎兒的孕

7、婦其血清AFP水平為正常孕婦的70%。 開放性神經(jīng)管缺陷患兒由于無腦畸形和脊柱裂的發(fā)生，AFP可大量進入羊水中，使母體血液循環(huán)中的AFP濃度增加,產(chǎn)前篩查血清學指標,3,F-HCG,HCG 是由胎盤合體滋養(yǎng)層細胞分泌的一種糖蛋白，孕婦血清中HCG主要以完整形式存在，游離-HCG約占18%。唐氏的胎盤較正常成熟晚，所以HCG水平升高，患兒的母親血清游離-HCG較正常孕婦增加,產(chǎn)前篩查血清學指標,4,E3,E3是由胎兒腎上腺和肝臟合成的甾體類激素，它以游離形式直接由胎盤分泌入母血。隨孕周的增長而不斷升高。唐氏兒的腎上腺皮質(zhì)發(fā)育不良，導致UE3的前體-硫酸脫氫表雄酮的合成減少，從而使UE3減少,產(chǎn)前

8、篩查血清學指標,5,抑制素A,抑制素A是一個異二聚體的糖蛋白的激素，由女性卵巢的顆粒細胞分泌。抑制素A在孕10-12周時增加并達到高峰，在妊娠中期下降成一個平臺，但到妊娠晚期時再一次升高，足月時達最高水平。和HCG一樣在唐氏綜合癥胎兒的母體血清抑制素A水平高于正常妊娠孕婦水平。抑制素在母體的血清濃度不依賴于HCG濃度的變化,產(chǎn)前篩查血清學指標,孕婦篩查指標與胎兒畸形的關(guān)系,產(chǎn)前篩查方案,孕早期： PAPP-A + Free -hCG 孕中期： AFP + hCG AFP + Free -hCG,孕早期： PAPP-A + Free -hCG + NT 孕中期： AFP + hCG + uE3

9、AFP + Free -hCG + uE3,AFP + hCG + uE3 + Inhibin A AFP + Free -hCG + uE3 + Inhibin A,產(chǎn)篩檢出率要求,1,二聯(lián)篩查,2,3,三聯(lián)篩查,四聯(lián)篩查,唐氏綜合征： 檢出率60%,假陽性率8%; 18-三體綜合征： 檢出率80%,假陽性率5%: 開放性神經(jīng)管缺陷(ONTD)： 檢出率85%6,假陽性率5,唐氏綜合征： 檢出率70%,假陽性率5%; 18一三體綜合征： 檢出率85%,假陽性率5%; 開放性神經(jīng)管缺陷(ONTD)： 檢出率85%,假陽性率5,唐氏綜合征： 檢出率80%,假陽性率5%; 18一三體綜合征： 檢出

10、率85%,假陽性率1%; 開放性神經(jīng)管缺陷(ONTD)： 檢出率85%,假陽性率5,第三部分,產(chǎn)篩實驗室檢測,儀器試劑,方法原理,標本采集與接收,樣本檢測,報告發(fā)放,資料保存,儀器,試劑組成,羅氏提供原裝配套試劑,免疫技術(shù)的發(fā)展,電化學發(fā)光反應(yīng)原理,以甲胎蛋白（AFP）檢測方法原理,第二步：加入鏈酶親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過生物素與鏈酶親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上,第一步：10L標本、生物素化的抗AFP單克隆抗體和釕（Ru）標記的抗AFP單克隆抗體混勻，形成夾心復(fù)合物,第三步：反應(yīng)混合液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學發(fā)光，通過

11、光電倍增管進行測定,檢測結(jié)果有機器自動從標準曲線上查出。此曲線由儀器通過2點定標校 正，由從試劑條形碼掃描入儀器的原版標準曲線而得,操作步驟,采集孕婦外周血2-3ml，不抗凝，無需空腹。采集標本后應(yīng)在采血管標簽上寫明患者的姓名、采血時間及唯一標識號（此步驟主要由婦產(chǎn)科門診完成,樣本采集,標本接收,1,2,3,樣本接收時，認真核對送檢單各項目填寫是否完整、準確；是否已簽署知情同意書和填報產(chǎn)前篩查申請單,對送檢的使用抗凝劑的標本，溶血、高脂血等標本拒收,對申請單項目填寫不完整者，應(yīng)詢問孕婦后補填相關(guān)信息，若孕婦不能提供準確信息者拒收,標本接收,樣本檢測,標本處理,樣本上機,儀器準備,校準質(zhì)控,1.

12、樣本編號：在采血管及申請單上編號 2.樣本離心：2000rpm10分鐘分離血清備用（離心后觀察標本是否有溶血、脂血情況,試驗記錄：應(yīng)包括實驗室溫度、濕度、儀器運行情況、試劑充足與否等,校準方法：全點，校準品為羅氏提供的兩個水平 質(zhì)控檢測：質(zhì)控品為羅氏提供的兩個水平PCU1和PCU2,按e601操作規(guī)程編程上機 注意：質(zhì)控應(yīng)和樣本同批上機檢測，質(zhì)控品測定值在參考范圍內(nèi)，方可確定標本的測定值,1,2,3,4,報告發(fā)放,a.將儀器所測結(jié)果與申請單上相關(guān)信息錄入產(chǎn)篩分析軟件，軟件自動得出所篩查疾病風險率,報告發(fā)放,b.所得篩查結(jié)果以書面形式發(fā)放，結(jié)果必須經(jīng)副高以上 職稱的具有從事產(chǎn)前診斷技術(shù)人員復(fù)核后

13、方可發(fā)放。 c.篩查報告應(yīng)包括 所有生化標記物的絕對值 MOM值 風險度 陽性結(jié)果與高風險切值 有關(guān)說明:低風險或陰性的報告(1/270),只表 明你的胎兒發(fā)生該種先 天異常的機會很低,并 不能排除這種異?；蚱渌惓５目赡苄?。高風 險也并不是確診,須進一步羊水穿刺細胞遺傳學 檢查以確定診斷。 有相關(guān)的提議和建議:包括21三體、18三體、 NTD及高齡孕婦的提議與建議,資料保存,資料保存,血清保存,申請單保存,產(chǎn)篩數(shù)據(jù)保存,血清收集到離心管注明姓名及標號后保存至-40 冰箱（一個月集中一次），以備復(fù)查。剩余樣本管保存至2-8 冰箱1周后高壓消毒有專門人員運送離開,申請單保存至專門存放處（一個月集

14、中裝訂一次） 血清與申請單編唯一標識號：年月日+編號。例如：2018年5月7日所檢標本第一個編號為201805070001,所得實驗數(shù)據(jù)記錄與申請單按要求均應(yīng)保存5年以上,資料保存,第四部分,報告單分析,檢測結(jié)果的換算,風險率的表達,高危孕婦的處理,報告單分析,將檢測到的標本標記物濃度轉(zhuǎn)化為相應(yīng)孕周的中位數(shù)倍數(shù)( mui tiple of medium,MOM), 結(jié)合孕婦的年齡、孕周、體重等資料,使用專門的風險計算軟件分別計算胎兒罹患唐氏綜合癥、18-三體綜合征和開放性神經(jīng)管缺陷( open neural tube defects,ONTD)的風險,唐氏綜合癥、18-三體綜合征的風險率以1/

15、n的方式來表示， 意味著出生的某一患兒存在1/n的可能性。開放性神經(jīng)管缺陷篩查結(jié)果可以風險率(1/n)的方式來表示,也可以高風 險或低風險表示,對高危孕婦提出相應(yīng)意見與建議 年齡 35歲 唐氏 1/270 18-三體1/350 AFP 2.5MOM,報告單分析,統(tǒng)計學名詞，是指將數(shù)據(jù)按大小順序排列起來，形成一個數(shù)列，居于數(shù)列中間位置的那個數(shù)據(jù),小知識,中位 數(shù),中位數(shù)值的倍數(shù)，指產(chǎn)前篩查中，孕婦個體的血清標志物的檢測結(jié)果是正常孕婦群在該孕周時血清標志物濃度中位數(shù)的倍數(shù),MOM 值,用1/n表示，意味著出生某一患兒存在1/n的可能性，n值越大患病風險越低，n值越小患病風險越高,風險率,產(chǎn)前診斷,

16、超聲排查,及時通知,跟蹤觀察,終止妊娠,年齡 35歲 唐氏 1/270 18-三體1/350 AFP 2.5MOM,高危孕婦的處理,第五部分,注意事項,注意事項,1、孕周的確定: 當被檢測孕婦的血清標記物（AFP、-HCG、PAPP-A）數(shù)值異常時（過高或過低），應(yīng)特別注意孕周的確定是否準確。建議應(yīng)采用B超確定孕周，排除由此引起的誤差。 （1）末次月經(jīng)(LMP)： 以末次月經(jīng)第一天來計算是最常用的方法之一,注意事項,2）B超(B超下的雙頂徑BPD)： 當孕周14周，末次月經(jīng)日期不肯定或末次月經(jīng)所記妊娠周數(shù)與臨床醫(yī)生檢查結(jié)果不符時，推薦用B超下的BPD來確定孕周.在妊娠的這個時期，B超下BPD決

17、定孕周準確性在10天以內(nèi)，與LMP決定的孕周相比，提高了母血清篩查的敏感性，降低了假陽性的數(shù)目。 一般來講，脊柱裂病例的BPD較正常胎兒小2周，用BPD調(diào)整后的孕周，改進了用母血清AFP篩查脊柱裂的敏感性。不推薦用B超測量的股骨或弘骨長度來估計胎齡，因為唐氏綜合征時，這些長骨可能變短。 當孕周14周，采用CRL確定孕周,注意事項,2、所有異常實驗結(jié)果的病人都應(yīng)該推薦進行遺傳咨詢。 咨詢內(nèi)容為是否應(yīng)復(fù)查一次，異常胎兒風險大小、病人可以有的選擇如B超，產(chǎn)前診斷等。 盡管產(chǎn)前篩查所用檢測方法與臨床檢驗類似，但其結(jié)果的解釋與一般臨檢不同，篩查結(jié)果和胎兒異常的風險預(yù)測有關(guān)，要求咨詢醫(yī)生給病人解釋風險及提出可能的選擇,注意事項,3、 孕周的計算采用三舍四入的方法（如17周+3天=17周，17周+4天=18周）。 4、 各個實驗室正常的中位值應(yīng)計算修正。 （1）正常值應(yīng)