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文檔簡介

1、提取基因組DNA,基本實驗流程,獲取鼠尾組織,PCR 擴增,瓊脂糖凝膠電泳,成像分析,一、動物基因組DNA的提取,實驗原理 真核生物的一切有核細胞（包括培養(yǎng)細胞）都能用來制備基因組 DNA。真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細胞核內(nèi)，因此，制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質(zhì)、脂類和糖類等分離，又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質(zhì)，再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質(zhì)，得到的DNA溶液經(jīng)乙醇沉淀使DNA從溶液中析出,獲取鼠尾組織,每只小鼠鼠尾加入500ul裂解液和10ul 蛋白酶K(20mg/ml)，

2、55度水浴過夜，至鼠尾溶解,提DNA步驟： 1. 每管鼠尾加入300ul飽和NaCl，充分混勻，12500rpm 離心20min 2. 取上清700ul至新的離心管中，加入預冷的異丙醇700ul，上下顛倒混勻，動作輕柔，直至看到絮狀DNA析出為止, 12500rpm 離心20min，棄上清 3. 加入800ul 75%乙醇于離心管中，洗沉淀，12500rpm離心10min 4. 晾干沉淀，加入100ul的PCR級的水,二、PCR擴增,cycle,2530 次循環(huán)后，模板DNA的含量可以放大100萬倍以上,動畫,PCR:（20ul體系,2x Mix 10ul 無菌水 2ul 2pmol引物1 2

3、ul 2pmol引物2 2ul 2pmol引物3 2ul 模板DNA 2ul,PCR擴增儀,95 3min 95 30sec 60 30sec 72 30sec 72 5min,35 cycles,三、瓊脂糖凝膠電泳,原理： 在pH8.08.3的緩沖液中，核酸分子帶負電荷，向正極移動。由于不同大小和構(gòu)象的核酸分子電荷密度大致相同，因此在自由泳動時，各種核酸分子的遷移率相似，無法分開。然而，在濃度適當?shù)哪z中，由于分子篩效應，使大小和構(gòu)象不同的核酸遷移率出現(xiàn)差異，從而把它們分開。核酸在凝膠中的遷移率取決于其分子大小、高級結(jié)構(gòu)、膠濃度和電場強度，與分子的堿基組成及電泳溫度（430之間）無明顯關(guān)系。一般說，同樣

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