動物細(xì)胞融合與單克隆抗體第二課時

1、一、動物細(xì)胞融合,1.概念,動物細(xì)胞融合（cell fusion）也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程,融合和形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞,2、原理,細(xì)胞膜的流動性,2.2.2動物細(xì)胞融合與單克隆抗體,誘導(dǎo)方法,物理方法,化學(xué)法,生物法,滅活的病毒,電激等,聚乙二醇（PEG,3.融合過程,誘導(dǎo)融合的方法？滅活病毒,植物細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合的比較,細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞的全能性,細(xì)胞膜的流動性,纖維素酶、果膠酶,物理方法 （離心、振蕩、電激） 化學(xué)方法（PEG,物理、化學(xué)方法 滅活的病毒,去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合,使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合,

2、4.意義,突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能,5.應(yīng)用,最重要的用途是 制備單克隆抗體,1. 抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？ 2. 抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？ 與抗原作用的特點？ 主要分布在哪里？ 3. 用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體,二、單克隆抗體的制備,抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法,從血清中分離抗體,該法制備抗體的特點： 產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低,多種效應(yīng)B細(xì)胞,動物體內(nèi),多種抗體,抗原,單克隆抗體的制備,單克隆抗體:單個細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一,特異性強的抗體,利用效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能 利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性 利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞

3、融合獲得雜交瘤細(xì)胞 利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞,設(shè)計方案,單克隆抗體的制備過程,整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選,第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），在特定的選擇性培養(yǎng)基上,未融合的親本細(xì)胞(漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞)和融合的具有同種核的細(xì)胞(BB融合細(xì)胞、瘤瘤融合細(xì)胞)都會死亡,只有融合的雜種細(xì)胞(雜交瘤細(xì)胞)才能生長,第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。由于該細(xì)胞群是單個雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個細(xì)胞克隆的含義，只不過克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜

4、交瘤細(xì)胞,三、單克隆抗體的應(yīng)用,1）作為診斷試劑最廣泛應(yīng)用 準(zhǔn)確、高效、簡易、快速,如同位素標(biāo)記單克隆抗體，可診斷腫瘤、心血管畸形等,2）運載藥物,生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥物，治療腫瘤,“生物導(dǎo)彈” 單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭,下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌單克隆抗體的實驗方案,制備單克隆抗體,B細(xì)胞,抗體,細(xì)胞融合,滅活病毒,雙親細(xì)胞,分泌抗體,無限增殖,原代,傳代,50,例1,1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（ ） A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞 B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞 D.沒

5、經(jīng)過免疫的淋巴細(xì)胞,A,鞏固練習(xí),2.動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（ ） 誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B.所用的技術(shù)手段基本相同 C. 操作步驟基本相同 D. 都能形成雜種細(xì)胞,D,3. 單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是（ ） A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合 B.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 C.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 D.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成,D,4.只能使動物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是（ ） APEG B滅活的病毒 C電刺激 D離心,B,5. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基

6、篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是 （ ） 淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞 A. B. C. D,C,6.“生物導(dǎo)彈”是指 （ ） A.單克隆抗體 B.雜交瘤細(xì)胞 C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞 D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物,D,A 、 B細(xì)胞為動物細(xì)胞,請據(jù)圖回答問題,A細(xì)胞,B細(xì)胞,C細(xì)胞,D細(xì)胞,1)若A細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞B細(xì)胞為淋巴細(xì)胞,那么D細(xì)胞稱為 細(xì)胞,D細(xì)胞具有兩個親本細(xì)胞的特征,一方面因具有骨髓瘤細(xì)胞的 性質(zhì),通過 方式產(chǎn)生大量細(xì)胞,我們稱之為 過程;另一方面能分泌大量的抗體,我們把該過程分泌的抗體稱,雜交瘤,連續(xù)分裂,有絲分裂,單克隆,單克隆抗體,練一練,2)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體其化學(xué)本質(zhì)是 ,合成該物質(zhì)的場所是 ,它是由 控制合成的,合成過程包括 和 兩個重要步驟,球蛋白,核糖體,基因,轉(zhuǎn)錄,翻譯,3)D細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體具有 作用,與血清抗體相比其優(yōu)越之處在于 強 高,免疫,特異性,靈敏度,4)若A為人細(xì)