基因工程的基本操作程序ppt課件

1、基因工程的基本操作程序,1.2,1,基因工程的基本操作程序,1.目的基因的獲取,2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建,3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,4.目的基因的檢測(cè)與鑒定,2,目前被較廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干擾素基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗病基因等。,基因操作的基本步驟,一、提取目的基因 將需要的基因從供體生物的細(xì)胞內(nèi)提取出來。,3,獲得目的基因的方法,1. 從基因文庫(kù)中獲取目的基因,什么是基因文庫(kù)？ 什么是部分基因文庫(kù)？ 怎樣從基因文庫(kù)中得到我們所需的目的基因？ 目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？,4,2.人工合成基因法PCR擴(kuò)增技術(shù),獲得目的基因的方法,PCR (

2、polymerase chain reaction) 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 是一項(xiàng)再生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。通過此技術(shù)，可獲取大量的目的基因。,5,PCR技術(shù),原理： 前提： 過程：,PCR擴(kuò)增儀,DNA雙鏈復(fù)制的基本原理,一段已知目的基因的核苷酸序列,目的基因DNA受熱變性，解鏈； 引物與單鏈互補(bǔ)結(jié)合； 合成鏈在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸。,6,二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因工程的核心,基因操作的基本步驟,目的： 所需物質(zhì)：,使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。,它們各自的作用是什么?,7,用與提取目的基因相同的限制酶切割質(zhì)粒使之出

3、現(xiàn)一個(gè)切口，將目的基因插入切口處，讓目的基因的黏性末端與切口上的黏性末端互補(bǔ)配對(duì)后，在連接酶的作用下連接形成重組DNA分子。,8,三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化,基因操作的基本步驟,基因工程中常用的受體細(xì)胞有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。 用人工的方法使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，主要是借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，就可以隨著受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制，由于細(xì)菌繁殖的速度非常快，在很短的時(shí)間內(nèi)就能夠獲得大量的目的基因。,9,將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞并使之?dāng)U增,10,將目的基因?qū)敫黝惣?xì)胞的方法,將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞 將

4、目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞,農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法,顯微注射技術(shù),感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,11,農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,你能說說農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的大概過程嗎？ 根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理，你能分析出農(nóng)桿菌不能將目的基因?qū)雴巫尤~植物的原因嗎？ 如果想將一個(gè)抗病基因?qū)雴巫尤~植物，理論上你認(rèn)為該怎么做？,12,顯微注射技術(shù),導(dǎo)入貯藏蛋白基因的超級(jí)羊和超級(jí)小鼠,13,將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞,利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素。若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？,14,四、目的基因的檢測(cè)與鑒定 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因 檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA 檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),基因操作的基本步驟,分子雜交技術(shù),15,1）以下說法正確的是 （ ） A、所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列 B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體 C、運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接 D、基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來,C,練習(xí),16,2) 有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是（ ） A、DNA連接酶將黏性末端的堿基對(duì)連接起來 B、 限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得 C、目的基因須由運(yùn)載