waters sugar-pak1使用注意

1、waters sugar-pak1使用注意用前需注意在使用前請遵從以下的忠告1.將Sugar-pak1連接在HPLC系統(tǒng)上.2.設(shè)置流速在0.2-0.3ml/min直到柱溫達(dá)到70.3.在柱溫達(dá)到70時,流速增至0.6ml/min,流速變化應(yīng)該以0.1ml/min為增量,待反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速.最大流速不應(yīng)超過0.6ml/min.Waters Sugar-pak1柱是用來分析糖產(chǎn)品,甜菜,甘蔗,淀粉這些作物在水解過程中的產(chǎn)物,以及用來做糖產(chǎn)品的質(zhì)量檢查,能夠?qū)⑵咸烟?果糖,麥芽糖, 麥芽多糖從典型的玉米糖漿中的高聚物中分離出來.也可用于酒精的發(fā)酵過程中跟蹤監(jiān)控發(fā)酵糖的減少和酒精的產(chǎn)生.流動

2、相要求:此色譜柱由鈣基樹脂填裝而成,氫離子或其它離子會取代鈣離子,或是引起與柱中糖的置換,尤其是像蔗糖這樣易于置換的糖.因此推薦在流動相中加入一定量的鈣離子來保持平衡和防止與樣品的置換推薦的流動相為去離子的無菌水,含EDTA鈣鹽約0.0001M(50mg/L).水應(yīng)去離子化,大于2兆歐的電阻率,水中應(yīng)不含多價離子,尤其是過渡金屬元素和重金屬離子.使用前需用真空泵通過0.45um或更小孔徑的濾膜除去細(xì)菌和其它顆粒.溶劑過濾推薦使用溶劑過濾器(可從Waters公司獲得:110V,部件號:WAT085113, 220V, 部件號:WAT085102,)合適的濾膜為Millipore的HAWP0470

3、0(Waters 部件號:WAT085117).雖然流動相已經(jīng)在真空過濾時脫氣,但還是應(yīng)該通過以下程序來完全脫氣.如果系統(tǒng)連續(xù)使用不止一天,請將流動相置于錐形瓶中,放在攪拌器/電爐上,用鋁箔封上瓶口以減小蒸發(fā),用前將流動相燒至沸點(diǎn)幾分鐘,使用時保持溫度70-90.這個操作能夠保證氣體(尤其是CO2)不再重新溶解在流動相中,同時也會防止微生物的滋生.EDTA 鈣鹽通常有以下幾個通用的名字Calcium di-sodium(ethylene dinitrilo)tetra-acetic acidCalcium di-sodium ethylene diamine tetraacetateCalci

4、um di-sodium edentate要保持裝流動相的容器干凈,有蓋,且新鮮,流動相需每24小時重新配制.平衡:為了保證新柱能在分析使用之前得到足夠的鈣離子的平衡,我們推薦使用以下程序.1.將柱子按照通常使用的反方向安裝(標(biāo)簽上的箭頭指向柱子的入口端).也可用反沖閥.2.用至少100ml的0.001M的EDTA鈣鹽溶液在90用0.5ml/min流速反沖柱子.500mg/L的EDTA鈣鹽的濃度大約為0.001M.3.將柱子反過來(回到通常的流動方向)用分析所用的流動相沖柱子,(用與上一個步驟同樣的條件)直到基線平穩(wěn)方可使用.注意事項(xiàng):通常推薦壓力不超過2000psi最大流速不超過0.6ml/

5、min(70)? 不要在流動相中使用氯化鈣,硝酸鈣以及其它的強(qiáng)酸的鈣鹽,這樣會腐蝕柱子,破壞填料. ? 流動相中有機(jī)相的最大含量為5%(V/V),樣品中少量的乙腈,乙醇,甲醇和異丙醇不會影響柱子的性能.? 柱子的溫度不要超過95.通常高溫會帶來高的分辨率,但在90-95之間幾乎沒有變化,70以下對于許多糖,就異構(gòu)體的分離來說不能提供足夠的分辨率,對于乙醇的定量,柱溫應(yīng)在75.? 柱溫的快速變化不會對柱子帶來什么反作用,如果柱子在60以下,那么最高的流速為0.2ml/min,由于水在低溫時的高的粘度因此高的流速會帶來很高的反壓.? 定期反向沖洗色譜柱(在每5L流動相之后),這將會有效地延長色譜柱

6、的壽命.? 流速的變化不能超過0.5ml/min,流速變化應(yīng)該緩慢進(jìn)行,建議改變流速時以0.1ml/min為增量,直到反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速.任何的流速變化均要在不超過0.5ml/min下進(jìn)行. 在溶劑輸出系統(tǒng)中壓力限制的設(shè)定應(yīng)比普通的工作壓力高出幾百psi,從而避免任何儀器未被注意的額外壓力升高.? 如果分析的是不易于置換的糖,那么就沒有必要在流動相中使用EDTA Ca,純水需過濾和脫氣,如果要保持柱子適宜的性能,柱子的再生和流路的方向變化要經(jīng)常進(jìn)行.保存條件:(72小時以上不用)? 關(guān)掉柱溫箱,停泵.? 當(dāng)柱子冷卻,從系統(tǒng)中移出,換上起初隨柱子的堵頭,柱子在保存過程中要防止揮干,通常的流

7、動相都可作為保存柱子的適宜溶劑.在冰箱中5保存(不要冷凍),以防止微生物的滋生.? 柱子拆掉后要用不銹鋼堵頭裝在系統(tǒng)上,沖洗整個液相色譜系統(tǒng)先用水,然后用甲醇,最后系統(tǒng)保存在甲醇中.在關(guān)機(jī)后的重新啟動當(dāng)開啟帶有一個柱溫很低的柱子的系統(tǒng)時,打開柱溫箱,流速開始不要超過0.2ml/min.待系統(tǒng)在此條件下穩(wěn)定至少二十分鐘達(dá)到工作溫度后再按通常的工作條件操作.整夜的停機(jī)(放置少于72小時)柱子留在系統(tǒng)中流速降到0.2ml/min.循環(huán)溶劑,將流出的管路插入流動相瓶中,如果不想開著柱溫箱,那就關(guān)掉泵和柱溫箱讓其冷卻.在整夜停機(jī)后的開啟打開柱溫箱,流動相的流速不要超過0.1-0.2ml/min,保持此流

8、速至少二十分鐘直到達(dá)到柱子工作所需溫度,然后再按照通常分析條件來設(shè)置.故障檢查Sugar-pak1是以樹脂的膨脹形態(tài)緊密裝填的,如果樣品進(jìn)行了很好的前處理,那么大部分產(chǎn)生的問題都和樹脂填料有關(guān),由于單向閥的損壞或是突然地反壓增加, 脆弱的樹脂填料可能被泵的波動沖到柱子的后篩板處.反壓的增加是否會發(fā)生,要經(jīng)常檢查在線過濾器以及保護(hù)柱中是否截留了微粒.如果不是此問題,那么很可能是樹脂部分地堵在了出口端的篩板處,檢查這種情況是否發(fā)生需要關(guān)掉泵,將柱子的流路方向反過來,然后泵流速開到0.1ml/min,20分鐘達(dá)到工作溫度后再設(shè)至工作時的流速.柱子的再生步驟:Sugar-pak1柱子的再生方法根據(jù)相關(guān)的樣品純度有不同的變化,越是天然物,(尤其是含有那些重金屬和過渡金屬元素或是有機(jī)酸的樣品)越需要經(jīng)常地對柱子進(jìn)行再生,因?yàn)樗鼈儠c柱子發(fā)生置換.可以通過注射蔗糖來測試柱子的置換,如果蔗糖的峰有拖尾,那么柱子需要