免疫SOP：絨毛膜促性腺激素＋B亞單位

1、44文件編號：LABOPMY020第 頁，共 頁 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 醫(yī)院檢驗科免疫室分析項目作業(yè)指導書 Cobas E 601/E 411乙絨毛膜促性腺激素+亞單位1. 分析原理采用雙抗體夾心法原理，整個過程18 分鐘完成。 第1 步：20 l（Elecsys2010,E170）或15 l（Elecsys1010）標本、生物素化的抗HCG 單克隆抗體和釕（Ru）標記的抗HCG 單克隆抗體混勻，形成夾心復物。 第2 步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應結(jié)合到微粒上。 第3 步：反應混和液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附

2、到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學發(fā)光，通過光電倍增管進行測定。檢測結(jié)果由機器自動從標準曲線上查出。此曲線由儀器通過2 點定標校正，由從試劑條形碼掃描入儀器的原版標準曲線而得。2：標本采集和準備：必須選擇以下的標本進行測定血清：使用標準取樣試管或含分離膠的試管采集血清：按標準常規(guī)方法采集。血漿：肝素、EDTA-K3 、枸櫞酸鈉或草酸鉀抗凝均可。標本在28 度可穩(wěn)定8 小時，-20 度可穩(wěn)定12 個月。凍融一次。標本如有沉淀需離心后再使用。不要加熱滅活標本。標本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。在測定前，保證試劑、定標液、質(zhì)控液到達室溫。考慮到可能揮發(fā)的因素，建議標本、定標液、質(zhì)控液

3、上機后在2小時內(nèi)進行測定。3：試劑、校準品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑： M：鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋），1 瓶，6.5ml 。鏈霉親和素包被的微粒濃度0.72mg/ml，生物素結(jié)合能力：470ng 生物素/mg 粒子。含防腐劑。R1：生物素化的抗HCG 單克隆抗體（灰蓋），1 瓶，10ml 。生物素化的抗HCG 單克隆抗體濃度6.3mg/l，磷酸緩沖液0.04mol/l，pH7.5 。含防腐劑。R2：Ru(bpy)3 2+ 標記的抗HCG 單克隆抗體（黑蓋），1 瓶，10ml 。Ru(bpy)3 2+ 標記的抗HCG 單克隆抗體濃度4.6mg/l，磷酸緩沖液0.04

4、mol/l，pH6.5 。含防腐劑。校準品： 每批HCG+試劑有一條形碼標簽，含有該批試劑定標所需的特殊信息。應用HCG+CalSet 定標液定標。 定標頻率： 每批試劑必須用新鮮試劑（試劑經(jīng)儀器注冊24 小時以內(nèi)）標定一次， 如再次標定即根據(jù)下列要求： Cobas E 601或E411： 一個月（同一批號試劑） 7 天（放置儀器上的同一試劑盒） 各種分析儀均適用的情況： 根據(jù)要求進行標定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時。質(zhì)控品： Elecsys 通用質(zhì)控品（PreciControl Universal）1 和2 以及其它合適的質(zhì)控品。各濃度區(qū)域的質(zhì)控至少每24 小時或每一次定標后測定一次。質(zhì)控間隔期應

5、適用于各實驗室的具體要求。檢測值應落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應采取校正措施。其他所需材料：貨號：11973193，100 人份的Elecsys HCG+試劑盒包含： M 鏈霉親和素包被的微粒 R1 生物素化的抗HCG 抗體 R2 三聯(lián)吡啶釕標記的抗HCG 抗體需要的材料（未提供）： Elecsys HCG +定標液（CalSet）貨號11973207 Elecsys 通用質(zhì)控品（PreciControl Universal）貨號11731416 Elecsys 通用稀釋液 貨號11732277Cobas E 601或E411 分析儀 Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell

6、）貨號11662988 Elecsys 測量池清洗液（CleanCell）貨號11662970 Elecsys 添加劑液（SysWash）貨號11930346 Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean）貨號119331594：儀器和校準使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)Cobas E 601/E 411全自動電化學發(fā)光免疫自動分析儀 儀器校準：每批HCG+試劑有一條形碼標簽，含有該批試劑定標所需的特殊信息。應用HCG+CalSet 定標液定標。 定標頻率： 每天批試劑必須用新鮮試劑（試劑經(jīng)儀器注冊24 小時以內(nèi)）標定一次， 如再次標定即根據(jù)下列要求： Cobas E 601或E411： 一個月

7、（同一批號試劑） 7 天（放置儀器上的同一試劑盒） 各種分析儀均適用的情況： 根據(jù)要求進行標定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時。 質(zhì)控： Elecsys 通用質(zhì)控品（PreciControl Universal）1 和2 以及其它合適的質(zhì)控品。各濃度區(qū)域的質(zhì)控至少每24 小時或每一次定標后測定一次。質(zhì)控間隔期應適用于各實驗室的具體要求。檢測值應落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應采取校正措施。5：操作步驟（Cobas E 601為例）5.1 校準操作步驟：在編緝各項目的參數(shù)時，已經(jīng)在ApplicationCalib菜單中定義好了定標類型和幾點定標。因此在對各項目進行定標時，只需在定標菜單Cal

8、ibration中進行即可。3.2進入CalibrationStatus菜單，用鼠標選擇需定標的項目，再根據(jù)需要點單點定標（BLANK鍵）或兩點定標（TWO POINT鍵）、跨距定標（SPAN鍵）、多點定標（FULL鍵），再選擇其它項目進行相應選擇，最后點SAVE，將定標物放入在CalibrationCalibrator中定義好的位置，點Start，再點Start，儀器開始定標。 在CalibrationStatus菜單中看定標結(jié)果，點Calibration Result鍵看定標結(jié)果，點Reaction Monitor鍵看每個定標物的反應曲線。5.2 樣本檢測程序： 單個樣本輸入，在主菜單下選

9、擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目，點SAVE鍵，樣本號自動累加。批量常規(guī)標本的輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入起始標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目，點REPEAT，輸入該批標本的最后一個標本號，點OK即可。進樣分析，將標本按在Workplace菜單中輸入的標本號順序在樣本架上排好，放入進樣盤內(nèi),按START鍵，輸入該批上機標本的起始標本號，再點START鍵，儀器自動開始推架檢測標本。6：質(zhì)量控制 Elecsys 通用質(zhì)

10、控品（PreciControl ）1 和2 或其它合適的質(zhì)控品。各濃度區(qū)域的質(zhì)控至少每24 小時或每一次定標后測定一次。質(zhì)控間隔期應適用于各實驗室的具體要求。檢測值應落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應采取校正措施。7：計算方法 對每一個標本，儀器會自動計算HCG+含量，單位是mIU/ml 或IU/L 8：參考范圍 1112位非懷孕健康婦女，其97.5%百分位數(shù)為3mIU/ml 236位更年期后婦女6 mIU/ml 3277為男性，其97.5%百分位數(shù)為2 mIU/ml。9：分析性能 0.100-200.0mIU/ml 結(jié)果若低于檢測限，儀器將報告結(jié)果200.0mIU/ml10：干擾

11、因素該方法不受黃疸（膽紅素24mg/dl）、溶血（血紅蛋白1.0g/dl）、脂血（脂質(zhì)1400mg/dl）和生物素5mg/天）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8 小時后才能采血。不受類風濕因子干擾（3400U/ml）。15 種常用藥物經(jīng)試驗對本測定無干擾。HCG+濃度高達300000mIU/ml 也不出現(xiàn)鉤狀效應。接受過小鼠單抗治療或體內(nèi)診斷的病人會出現(xiàn)假陽性反應。ElecsysHCG+檢測結(jié)果應結(jié)合病史、臨床其他檢查結(jié)果綜合起來進行診斷。11：稀釋：高于檢測范圍的標本可用通用稀釋液稀釋。建議1:100 稀釋。稀釋后的標本HCG+含量必須高于100mIU/ml 。如用手工稀釋，結(jié)果應乘上稀釋倍數(shù)。如果是機器自動稀釋，機器會自動計算結(jié)果。12：臨床意義 與FSH 、TSH 和LH一樣，HCG 也是糖蛋白，由二種亞單位（-和-）組成.這四種激素中，鏈是完全相同的，而鏈具特異性，負責特定激素功能。 懷孕時HCG由卵巢產(chǎn)生。HCG由許多的亞激素組成，他們具有相同的生理活性，分子量不同。人類絨毛膜促性腺激素的生理功能是維持妊娠黃體及影響類固醇產(chǎn)生。懷孕婦女中的HGC主要是完整的HCG。檢測HCG 濃度可在受孕一周后診斷懷孕，在妊娠前三個月測定HCG 特別重