免疫SOP：CMV IgG作業(yè)指導(dǎo)書

1、55文件編號：LABOPMY020第 頁，共 頁 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 醫(yī)院檢驗科免疫室分析項目作業(yè)指導(dǎo)書 E 170/e 601/e 411巨細(xì)胞病毒IgG (CMV IgG)1. 分析原理采用雙抗體夾心法，整個過程18分鐘完成。1) 第1步：20 L標(biāo)本、生物素標(biāo)記CMV重組抗原和釕（Ru）標(biāo)記的CMV重組抗原混勻，形成夾心復(fù)合物。2) 第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。3) 第3步：反應(yīng)混和液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍

2、增管進(jìn)行測定。儀器通過2點定標(biāo)曲線以及試劑條碼提供的母定標(biāo)曲線計算出結(jié)果。2. 標(biāo)本要求血清：按標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)方法采集。血漿：肝素（鋰、納）、EDTA-K3、枸櫞酸鈉抗凝均可。如用枸櫞酸鈉抗凝，結(jié)果應(yīng)+10%。標(biāo)本在18 oC 23oC可穩(wěn)定1周，在2 oC 8oC可穩(wěn)定8周，-20oC可穩(wěn)定6個月。只能凍融5次。含沉淀的標(biāo)本使用前需離心。不要加熱滅活標(biāo)本。標(biāo)本和質(zhì)控液禁用疊氮鈉防腐。標(biāo)本、定標(biāo)液和質(zhì)控品在測定前的溫度應(yīng)與室溫平衡；放入儀器后應(yīng)在2小時內(nèi)測定以避免蒸發(fā)的影響。3. 試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑： M：鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋），1瓶，6.5ml。

3、粒子濃度0.72mg/ml，生物素結(jié)合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐劑。R1：生物素標(biāo)記CMV重組抗原（灰蓋），1瓶，9ml。濃度大于0.4mg/l，磷酸緩沖液 0.1mmol/l，pH7.0。含防腐劑。R2：釕（Ru）標(biāo)記的CMV重組抗原（黑蓋），1瓶，9ml。濃度大于0.4mg/l，磷酸緩沖液0.1mmol/l，pH7.0。含防腐劑。校準(zhǔn)品：（試劑盒附帶）Cal 1 陰性定標(biāo)液（白蓋），2瓶，1.0ml/瓶,人血清基質(zhì)Cal 2 陽性定標(biāo)液（黑蓋），2瓶，1.0ml/瓶,人血清基質(zhì)質(zhì)控品： Elecsys PreciControl CMV IgG 貨號04784600190 其

4、他所需材料：常規(guī)實驗設(shè)備Elecsys E 170/E 411Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean）,貨號11930346122 Elecsys E 170分析儀所需材料:Elecsys 系統(tǒng)緩沖液 （ProCell M）,貨號04880340190Elecsys 檢測池洗液（CleanCell M）,貨號04880293190Elecsys PC/CC杯,貨號03023141001Elecsys 清洗液（ProbeWash M），貨號03005712190Elecsys 反應(yīng)杯/加針頭/廢物袋（CUP/TIP），貨號12102137001Elecsys 系統(tǒng)清洗適配器（SysClea

5、n Adapter M），貨號03027651001 Elecsys E 411分析儀所需材料:Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell），貨號11662988122 Elecsys 測量池清洗液（CleanCell），貨號11662970122 Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysWash），貨號11930346122 Elecsys 適配器 （Adapter for SysClean），貨號11933159001 Elecsys 反應(yīng)杯（CUP），貨號11706802001 Elecsys 加樣頭（TIP），貨號117067990014. 儀器和校準(zhǔn)使用儀器：羅氏公司生產(chǎn)Elecsys 2

6、010/E 170/e601/e 411全自動電化學(xué)發(fā)光免疫自動分析儀儀器校準(zhǔn)：每批試劑必須用新鮮試劑和校準(zhǔn)一次。另外，以下情況需要再次定標(biāo)： 校準(zhǔn)過期:批校準(zhǔn)穩(wěn)定28天，盒校準(zhǔn)7天。根據(jù)要求進(jìn)行標(biāo)定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時；更換某些試劑時，根據(jù)規(guī)定進(jìn)行多次標(biāo)定。5. 操作步驟參見儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。6. 質(zhì)量控制用質(zhì)控品1和質(zhì)控品2，至少每24小時或每一次定標(biāo)后測定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實驗室的具體要求。檢測值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7. 計算方法 對每一個標(biāo)本，儀器會自動計算含量。單位是U/mL8. 結(jié)果解釋陰性 0.5 U/mL灰區(qū)0.5 - 1.0

7、 U/mL陽性 1.0 U/mL9. 分析性能檢測范圍：0.25-500 U/mL精密度：以下列出了此試劑盒在Elecsys儀器上的表現(xiàn)。每個實驗室結(jié)果會不同。重復(fù)性測定采用的是美國臨床化學(xué)實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會修訂稿EP5-A標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行評估，使用了Elecsys試劑及人血清池、質(zhì)控進(jìn)行測定：連續(xù)測定10天，每天測定6次（n60次）；E170的批內(nèi)重復(fù)性共測定了21次。結(jié)果如下：10. 干擾因素該方法不受黃疸（膽紅素66mg/dl）、溶血（血紅蛋白0.5 g/dl）、脂血（脂質(zhì)2000mg/dl）生物素5mg/天）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8小時后才能采血。不受類風(fēng)濕因子（1500U/

8、ml）和透析的干擾。異常病人應(yīng)結(jié)合病史、臨床其他檢查結(jié)果綜合起來進(jìn)行診斷。11. 臨床意義12參考文獻(xiàn)1) Revello MG, Gerna G. Diagnosis and Management of Human Cytomegalovirus Infection in the Mother, Fetus, and Newborn Infant. Clin Microbiol Rev 2002;15(4):680-715.2) Munro SC, Hall B, Whybin LR, et al. Diagnosis of and Screening for Cytomegalovirus

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