cutoff值-參考區(qū)間[教學應(yīng)用]

1、區(qū)別：參考區(qū)間和cutoff值cutoff即臨界值，是判斷檢測結(jié)果的標準。檢測標本吸光度（OD值）cutoff即判為陽性，cutoff判為陰性?，F(xiàn)在一般用s/co，1為陽性，1為陰性。cutoff的設(shè)置因試劑廠家不同，方法不同而設(shè)置不同，試劑說明書都會有cutoff的設(shè)置。廠家cutoff的設(shè)置是經(jīng)過檢測大量的標本（包括正常人、病人），通過統(tǒng)計學分析來設(shè)置的。由于國產(chǎn)試劑的質(zhì)量尚需提高，某些實驗的陰性對照經(jīng)常成為定值（因為陰性對照0.05按0.05計算，cutoff0.05某個常數(shù)或陰性對照某個常數(shù)，如HBsAg的cutoff2.10.05），造成cutoff亦為定值。參考區(qū)間： 解釋檢驗結(jié)果

2、是正常還是異常的依據(jù)區(qū)別血清和血漿血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用血清的主要成分：血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學成分組成,這些化學成分包括白蛋白、1、2、-

3、球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進展，但仍存在一些問題。主要是：第一:血清的成份可能有幾百種之多，目前對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認識，這給研究工作帶來許多困難；第二:血清都是批量生產(chǎn)，各批量之間差異很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保證每批血清的相似性極為困難，從而使實驗的標準化和連續(xù)性受到限制；第三:不能排除血清中含有易變物質(zhì)，這被認為是“瓶中惡化”的原

4、因之一。主要作用提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質(zhì)。提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞，如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的

5、，現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被廣泛用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護細胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝解毒中起重要作用，如SeO3,硒等鑒別方法血清血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿最大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各

6、凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾，血液中許多化學成分的分析，都以血清為樣品。血漿相當于結(jié)締組織的細胞間質(zhì)。是血液的重要組成分，呈淡黃色液體（因含有膽紅素）。血漿的化學成分中，水分占9092，溶質(zhì)以血漿蛋白為主血漿是血液的液體成分，血細胞懸濁于其中。人體含有2750-3300毫升血漿，約占血液總體積的55%。血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無機鹽離子、激素以及二氧化碳。血漿的主要

7、功能是運載血細胞，同時也是運輸分泌產(chǎn)物的主要媒介。血液成分（加入抗凝劑）將新鮮血液離心，使血細胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。血漿是由抗凝的血液中分離出來的液體，其中含有纖維蛋白原，若向血漿中加入Ca2+ ，血漿會發(fā)生再凝固，因此血漿中不含游離的Ca2+。血清是由凝固的血中分離出來的液體，其中已無纖維蛋白原，但含有游離的 Ca2+，若向其中再加入 Ca2+，血清也不會再凝固。此外，血漿與血清的另一個區(qū)別是：血清中少了很多的凝血因子，以及多了很多的凝血產(chǎn)物。常見問題保存方法血清應(yīng)保存在-5至-2。然而，若存放于4時，請勿超過一個月。若您一次無法用

8、完一瓶，建議將無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損？將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8C冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。避免產(chǎn)生沉淀物1、解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2至4至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20至37，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。2、解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生3、請勿將血清置于37太久。若在37放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要

9、，可以無須做此步驟。5、若必須做血清的熱滅活，請遵守56，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。何謂熱滅活?一般是以56，30分鐘來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活化，而補體所參與的反應(yīng)有:溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。有必要做熱滅活嗎?實驗顯示

10、，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是 小黑點，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37C環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。購買的時候注意詢問廠家是否是已滅活血清。保存注意事項血清的保存應(yīng)該注意以下幾點：(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20 - 70 低溫冰箱中.4冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結(jié)冰時體積會增加約10

11、%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.(2)熱滅活是指56, 30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補體參與反應(yīng)有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化.(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20 至 -70 低溫冰箱中的血清放入4冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕

12、輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20進入37解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀.(4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清.(5)血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下小黑點:經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象小黑點,常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑

13、血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清.(6)切勿將血清在37放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質(zhì)量.血清 獸藥血清主要成份：蒙古黃芪提取液、抗病毒藥、ALR、混感血清。性狀：本品為黃棕色澄明液體。功能：本品能誘導機體產(chǎn)生干擾素，調(diào)節(jié)機體免疫功能，促進抗體形成，刺激巨噬細胞吞噬作用，增強機體對病原微生物的吞噬作用，具有抗炎、抗病毒、抗毒素和提高機體免疫功能等作用。血栓與止血的檢測主要用于血小板量與質(zhì)異常、凝血障礙、血栓前狀態(tài)和血栓性疾病的臨床診斷、鑒別診斷、病情觀察、療效評價和預后判斷，也用于抗栓治療的監(jiān)測。血栓與止血檢查方法繁多，可先選擇簡單易行的篩選

14、試驗，再逐步做確診試驗使用全血和血漿檢查，在采集標本時要加入抗凝劑，檢查的項目不同，所加的抗凝劑也不同，常用的抗凝劑有：1、草酸鹽 常用的有草酸鉀、草酸鈉和草酸銨,它們?nèi)芙夂蠼怆x的草酸根與標本中的鈣離（Ca2+）形成不解離的草酸鈣，失去Ca2+的凝血功能而起抗凝作用。常用于臨床化學和血液學檢查。高濃度鉀離子（K+）或鈉離子（Na+）易使血細胞脫水皺縮，而草酸銨則可使血細胞膨脹；故測定血細胞比容時用草酸銨和草酸鉀或草酸鈉兩者混合的抗凝劑。若用草酸鉀或草酸鈉作抗凝劑，與肝素為抗凝劑測定的血細胞比容比較，可降低813，此時的血漿量也相應(yīng)增加，用它測定血漿中化學成分，結(jié)果可低5左右。標本中加入高濃度的

15、草酸鹽抗凝劑，可發(fā)生溶血和改變血液pH，干擾測定血漿中的鉀、鈉和氯，還能抑制有些酶的活性。其優(yōu)點是溶解度好、價廉，2mg草酸鹽能抗凝lml血液。2、肝素 是生理性抗凝劑，抗凝機制較為復雜，主要是抑制凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟福种颇笇w維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白和穩(wěn)定血小板的作用。所用制劑多為肝素的鈉或鉀鹽，除有些因肝素能干擾的凝血機制檢查項目外，絕大多數(shù)的檢查都可用肝素作為抗凝劑。20U肝素可抗凝lml血液。3、乙二胺四乙酸(EDTA)鹽 常用的是它的鈉或鉀鹽，抗凝作用是與Ca2絡(luò)合而使 Ca2失去凝血作用。適用范圍與草酸鹽基本相同。1-2mgEDTA鹽可杭凝1ml血液。4、枸櫞酸鹽 主要為枸櫞酸

16、鈉；抗凝機制與草酸鹽相似。在血中的溶解度低，抗凝力不如前幾種抗凝劑。多用于臨床血液學檢查。5mg枸櫞酸鹽可抗凝1ml血液。5、氟化鈉 與Ca2+結(jié)合而起抗凝作用，因其抑制細胞分解葡萄糖，故用于葡萄糖測定。抽血及抗凝原理1.快速血清管：橘紅色頭蓋，采血管內(nèi)有促凝劑，可激活纖維蛋白酶，使可溶性纖維蛋白變?yōu)椴豢扇艿睦w維蛋白多聚體，進而形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊?？焖傺骞芸稍?分鐘之內(nèi)使采集的血液凝固。適用于急診血清生化試驗。2.惰性分離膠促凝管：金黃頭蓋，采血管內(nèi)添加有惰性分離膠和促凝劑。標本離心后，惰性分離膠能夠?qū)⒀褐械囊后w成分（血清或者血漿）和固體成分徹底分開并完全積聚在試管中央而形成屏障，標本

17、在48小時內(nèi)保持穩(wěn)定，促凝劑可快速激活凝血機制，加速凝血過程。適用于急診血清生化試驗。3.肝素抗凝管 ：綠色頭蓋，內(nèi)添加有肝素，肝素直接有抗凝血酶的作用，可延長標本凝血時間。適用于紅細胞脆性試驗，血氣分析，紅細胞壓積試驗，血沉及普通生化試驗，不適于血凝試驗。過量的肝素會引起白細胞的聚集，不能用于白細胞計數(shù)，因其可使血片染色后背景呈淡藍色，故也不適于白細胞分類。4.血漿分離管:淺綠色頭蓋，在惰性分離膠管內(nèi)加入肝素鋰抗凝劑，可達到快速分離血漿的目的，是電解質(zhì)檢測的最佳選擇，也可用于常規(guī)血漿生化測定和ICU等急診，血漿生化檢測。血漿標本可直接上機并在冷藏狀態(tài)下保持48小時穩(wěn)定。5.EDTA抗凝管：紫

18、色頭蓋，乙二胺四乙酸及其鹽是一種氨基多羥基酸，可以有效地螯合血液標本中的鈣離子，螯合鈣或?qū)⑩}從反應(yīng)位點移去將阻滯和中止內(nèi)源性或者外源性凝血過程，從而防止血液標本凝固。適用于一般血液學檢驗，不適用于凝血試驗及血小板功能檢查，也不是用于鈣離子，鉀離子，鈉離子，鐵離子，堿性磷酸酶，肌酸激酶和亮氨酸氨基肽酶的測定及PCR測定。6.枸櫞酸鈉凝血試驗管：淺藍頭蓋，枸櫞酸鈉主要通過與血樣中鈣離子螯合而起抗凝作用。適用于凝血試驗。國家臨床試驗室標準化委員會推薦的抗凝劑濃度是3.2或3.8（相當于0.109或0.129mol/l）.抗凝劑與血液的比例是1：97.枸櫞酸鈉血沉試驗管：黑色頭蓋，血沉試驗要求的枸櫞酸鈉濃度是3.2（相當于0.109mol/）抗凝劑與血液的比例是1：48.草酸鉀 /氟化鈉：灰色頭蓋，氟化鈉是一種弱效抗凝劑。一般常同草酸鈣或碘酸鈉合并使用，其比例為氟化鈉一份，草酸鈉3份。此混合物4mg可使1ml血液在23天內(nèi)不凝固和抑制糖分解，它是血糖測定