近五年丹參生藥鑒定和質(zhì)量評價研究進(jìn)展定稿

1、近五年丹參生藥鑒定和質(zhì)量評價研究進(jìn)展豐睿 周鳳琴* 郭慶梅（山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250355）摘要：查閱近五年的相關(guān)文獻(xiàn)，對其進(jìn)行分類、整理并歸納。對丹參的生藥鑒定和質(zhì)量評價研究概況進(jìn)行了綜述。關(guān)鍵詞：丹參；生藥鑒定；質(zhì)量評價；研究進(jìn)展A review on identification and quality evaluation of Saviae miltiorrhiza radix et rhizoma in recent five yearsFENG Rui ,Zhou Feng-qin*, GUO Qing-mei(College of Pharmacy,Shandong

2、 University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355)Abstract：This article presents a review on identification and quality evaluation of Salvia miltiorrhiza Bge.The identification includes feature,microscopic,infrared identification and bioassay.Determination of marker compounds and extracts as

3、 well as fingerprints study were often used in quality evaluation. in recent five years.by literature classification organize and summarize.Key words：Salviae miltiorrhiza radix et rhizoma；identification；quality evaluation；review 唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖，是歷版中國藥典丹參的唯一來源。丹參是目前心腦血管疾病的首選藥材，

4、藥材需求量和藥材真?zhèn)蝺?yōu)劣均受到人們的極大關(guān)注。但在部分地方藥材標(biāo)準(zhǔn)以及民間用藥中，同屬多種植物引入文獻(xiàn)亦被混作丹參藥用2。由于丹參產(chǎn)地廣、家種丹參與野生丹參均藥用、丹參種質(zhì)資源不明確，丹參屬植物種類多，變異大。種種原因?qū)κ惺鄣⑺幉牡钠焚|(zhì)鑒定和質(zhì)量控制均帶來一定的影響。不同產(chǎn)地、不同生境、不同來源丹參藥材的成基金項目：山東省高等學(xué)?？萍加媱濏椖浚椖烤幪枺篔09LF03）；山東省優(yōu)秀中青年科學(xué)家科研獎勵基金項目（2006BS03047）作者簡介：豐睿（1986- ），女，漢族，山東濟(jì)南人，碩士研究生；TelEmail：；主要從事中藥質(zhì)

5、量與資源研究。*通訊作者：周鳳琴（1951-），女，漢族，山東臨沂人，教授，博士生導(dǎo)師，長期致力于中藥鑒定學(xué)、中藥商品學(xué)和中藥資源學(xué)的教學(xué)與科研工作。TelEmail：.分組成以及比例具有較大差異，必然會直接影響臨床用藥療效及安全。為了準(zhǔn)確鑒別丹參藥材以及合理評價丹參藥材質(zhì)量，作者將近五年來丹參生藥鑒定以及質(zhì)量評價的文獻(xiàn)進(jìn)行了綜述。1 生藥研究進(jìn)展現(xiàn)狀1.1 藥材性狀付桂芳等32研究了丹參栽培品、野生品及其不同產(chǎn)地丹參藥材的性狀特征。其中野生品根莖短粗，根有數(shù)條，長圓柱形，表面棕紅色或暗棕紅色，粗糙，老根紫棕色，常呈鱗片狀剝落

6、，斷面疏松，有裂隙或略平整而致密，皮部棕紅色，木部灰黃色或紫褐色。栽培品根粗壯，多分枝，表面磚紅色或紅棕色，具縱皺紋，外皮緊貼不易剝落。質(zhì)堅實，斷面黃白色。其中四川產(chǎn)栽培品根粗壯肥實，少分枝，斷面黃褐色，略呈角質(zhì)樣。1.2 藥材顯微野生與栽培丹參橫切面有顯著差異32-43：野生丹參根的周皮細(xì)胞層數(shù)多、色重；皮層寬，部分產(chǎn)地的樣品有石細(xì)胞；維管束412個，韌皮部與木質(zhì)部比值大，木質(zhì)部由直徑較大與直徑小的導(dǎo)管束相間排列而成。栽培丹參周皮細(xì)胞層數(shù)少，色淡；一般無石細(xì)胞；維管束812個，韌皮部與木質(zhì)部比值小，導(dǎo)管周圍有眾多木纖維，導(dǎo)管束非大小相間排列；其中四川產(chǎn)栽培丹參維管束多達(dá)1924束，導(dǎo)管稀疏徑

7、向排列，木纖維少。王萌等54通過橫切面比較，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地丹參顯微結(jié)構(gòu)上存在許多共性，但在落皮層的有無、木栓層厚度及木栓化程度、木質(zhì)部導(dǎo)管多少、孔徑大小及排列方式上存在不同程度的差異。與丹參比較，同屬近緣種植物根橫切面54：甘西鼠尾草加拉丁學(xué)名，下同(S.przewalskii)（有落皮層，木栓層相對較厚，次生皮層、韌皮部中偶見紅色物質(zhì)，韌皮部相對較寬，導(dǎo)管成束；峨眉鼠尾草(S.omeiana)形成層不明顯，導(dǎo)管數(shù)量較少；血盆草(S.cavaleriei var.somplicifolia)有落皮層，皮層窄，僅約占切面的1/9，中央初生木質(zhì)部主要為纖維束；三葉鼠尾草(S.trijuga)木栓形成

8、層明顯，木射線不明顯；短唇鼠尾草(S.brevilabra)有落皮層，韌皮部相對較寬；云南鼠尾草(S.yunnanensis)皮層較寬。1.3 紅外鑒別吳婧65采用紅外三級宏觀指紋分析方法，對6個產(chǎn)地的丹參進(jìn)行了鑒別。二維相關(guān)紅外譜圖表明，山東、山西、河南和四川丹參譜圖相似度較高，浙江、云南丹參二維相關(guān)紅外譜圖最強(qiáng)峰出峰位置及15001800 cm-1范圍的峰數(shù)和相對峰強(qiáng)度都具有個體差異，表明所含芳香族化合物種類及含量區(qū)別于其它產(chǎn)地。經(jīng)過對丹參對照藥材、丹參酮IIA、丹酚酸B的譜圖解析，可找到丹參有效化學(xué)成分的特征吸收峰，可作為鑒別丹參藥材的依據(jù)。丹參二階導(dǎo)數(shù)譜特征吸收為1746、1730、1

9、691、1670 cm-1（酮和酸C=O伸縮振動），1610、1580、1543、1509、1489、1453 cm-1（芳香族化合物骨架振動）。王凌等76采集了來自4個產(chǎn)地（陜西、四川、河南、山東）的40批丹參藥材的紅外光譜信息，分析后發(fā)現(xiàn)其二階導(dǎo)數(shù)譜中某些與丹酚酸B對應(yīng)的特征峰(組)出現(xiàn)與否可以用作不同產(chǎn)地丹參藥材的初步判定依據(jù)。原譜1262 cm1峰的吸收峰峰高基本不受其他成分的影響，能反映丹酚酸B含量且與HPLC含量測定結(jié)果呈正相關(guān)，可以用于丹酚酸B的快速半定量，。為中成藥生產(chǎn)和投料丹參藥材的快速評價提供一種新的備選方法。1.4 生物鑒別鄧科君等87以生物信息學(xué)方法對GenBank的d

10、bEST數(shù)據(jù)庫中公開的10288條丹參EST（表達(dá)序列標(biāo)簽）進(jìn)行整理，從中搜索到159個SSR（簡單重復(fù)序列）位點(diǎn)。針對這些序列，設(shè)計開發(fā)了83對EST-SSR引物，對13個不同居群丹參樣品及10種鼠尾草屬物種進(jìn)行了擴(kuò)增效率、多態(tài)性及通用性檢測。發(fā)現(xiàn)其中72對引物在供試材料中可進(jìn)行特異性擴(kuò)增，共產(chǎn)生279個位點(diǎn)，平均每對引物產(chǎn)生3.88個位點(diǎn)，且所有引物均顯示多態(tài)性擴(kuò)增?？捎行U(kuò)增引物在鼠尾草屬10個異源物種中的可轉(zhuǎn)移率為60%100%，平均85%。依據(jù)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行遺傳相似性分析，結(jié)果表明EST-SSR分析可揭示供試樣品不同水平的遺傳多樣性，并將丹參與同屬其他植物明確區(qū)分。王維婷等98采用SR

11、AP分子標(biāo)記技術(shù)對48個不同來源的丹參種質(zhì)進(jìn)行了遺傳多態(tài)性分析，利用篩選后的15對SRAP引物組合從材料中檢測到了120個等位位點(diǎn)，聚類分析結(jié)果顯示，全部樣品可分為兩大類群，每一類群包含三個亞群。表明不同丹參種群間遺傳距離與空間距離之間的關(guān)系較為復(fù)雜，不同地區(qū)間丹參種質(zhì)的遺傳分化不均衡。隨著丹參種質(zhì)馴化程度的增加，種質(zhì)間的遺傳距離有所增加。徐紅等910采用PAPD和ISSR標(biāo)記對4個產(chǎn)地的野生丹參、6個產(chǎn)地的栽培丹參共計50個樣本進(jìn)行分析，用篩選的6個RAPD引物與2個ISSR引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,共擴(kuò)增出102條重復(fù)性高、清晰的條帶，其中多態(tài)性條帶97條。該結(jié)果表明不同產(chǎn)地的丹參供試材料的遺傳

12、背景不同，存在豐富的遺傳多樣性，且多態(tài)條帶比率與基因多樣性指數(shù)表現(xiàn)出的變化趨勢一致；用RAPD與ISSR進(jìn)行PCR擴(kuò)增，可以清晰、有效地分辨出不同居群樣本的基因型，其中ISSR引物UBC835與UBC856可以將不同產(chǎn)地的丹參區(qū)分鑒別。2 藥材純凈度研究進(jìn)展潘英妮等110按照2005年版中國藥典方法測定了30批丹參藥材的水分、總灰分和酸不溶性灰分，其中2批藥材的含水量超標(biāo)。采用相同的方法，王仲煥1112對16批丹參和白花丹參藥材進(jìn)行了水分、總灰分、酸不溶性灰分測定。結(jié)果，全部樣品的水分含量符合國家標(biāo)準(zhǔn)，但不同產(chǎn)地和不同生長年限藥材中水分含量差異顯著；有 1 個樣品的總灰分和4個樣品的酸不溶灰分

13、含量超出國家標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果也提示在丹參藥材加工過程中需要規(guī)范化管理，改進(jìn)丹參采收加工方法，以提高藥材純凈度，保證藥材質(zhì)量。3 藥材質(zhì)量研究進(jìn)展概況3.1 浸出物含量研究進(jìn)展概況邵林等1213采用2005年版中國藥典附錄方法測定了山東不同產(chǎn)地、不同加工方法及不同生長年限丹參藥材的水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量。結(jié)果，按水溶性浸出物含量考察，所有丹參樣品均符合國家標(biāo)準(zhǔn)，含量為43.1961.13%；而按照醇溶性浸出物含量考察，僅有31%的藥材達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，含量為13.2430.64%；最低者與最高者相差17.4%。潘英妮等110也對30批丹參藥材進(jìn)行了測定，其中所有樣品均未達(dá)到“水溶性浸出物含量不得少于3

14、5%”的國家限量標(biāo)準(zhǔn)，而醇溶性浸出物含量僅有7批樣品達(dá)標(biāo)，作者認(rèn)為，應(yīng)通過增加實驗藥材樣品數(shù)目，以制定合適的浸出物限度值。3.2 化學(xué)成分測定研究進(jìn)展概況3.2.1 單一指標(biāo)性成分的含量研究代云桃等1314采用薄層掃描法測定了不同產(chǎn)地丹參藥材中丹參酮A的含量結(jié)果：陜西山東山西四川。趙磊磊等154采用TLC和HPLC法分別測定了10個不同產(chǎn)地的丹參藥材中丹參酮A的含量。結(jié)果均顯示，不同產(chǎn)地丹參的成分不一，含量也有一定差異。其中丹參酮A的含量山東省河南省陜西省，山東省內(nèi)樣品則呈自西向東含量逐漸增大趨勢。這可能與山東省的暖溫帶季風(fēng)氣候適合丹參生長有關(guān)。冉蓉等165采用HPLC法比較了不同種源、不同產(chǎn)

15、地、不同采收期丹參中丹參酮A的含量。結(jié)果顯示以丹參酮A含量為指標(biāo)，白花丹參質(zhì)量優(yōu)于丹參；道地產(chǎn)區(qū)蒙陰為丹參的最佳產(chǎn)地；丹參的最適宜種植區(qū)域應(yīng)選擇山區(qū)及丘陵地，而平原地區(qū)不適宜種植丹參；9月中旬為丹參的最佳采收期。王仲煥121采用HPLC法對道地及非道地產(chǎn)區(qū)丹參的丹酚酸B含量進(jìn)行了比較，結(jié)果道地產(chǎn)區(qū)藥材含量顯著高于非道地產(chǎn)區(qū)。平邑、蒙陰、萊蕪、濟(jì)南、曲阜產(chǎn)丹參丹酚酸B的含量在8.0111.21%，均遠(yuǎn)高于中國藥典中3.0%的標(biāo)準(zhǔn)。說明若以丹酚酸B為標(biāo)準(zhǔn)，山東產(chǎn)丹參屬于優(yōu)質(zhì)藥材。從丹酚酸B的動態(tài)積累情況看，8月中旬達(dá)到最高，11月出現(xiàn)另一較高值。3.2.2 化學(xué)成分群的含量研究潘英妮等110以甲醇

16、-水為流動相，對不同產(chǎn)地的30批丹參樣品中丹參酮A、丹參酮、隱丹參酮含量同時進(jìn)行分析，結(jié)果，以丹參酮A含量計，僅有10批藥材符合藥典規(guī)定，經(jīng)“發(fā)汗”處理的川丹參含量低于直接干燥的丹參；水溶性成分群包括丹酚酸B、丹參素、迷迭香酸及原兒茶醛等的含量，以丹酚酸B計，有24個樣品達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)。武為寶等176采用UPLC法同時測得定丹參中二氫丹參酮、降鼠尾草氧化物、隱丹參酮、丹參酮、丹參酮A 等5種脂溶性成分含量含量結(jié)果？分別為0.273、0.675、0.177、0.328、1.138g/g，被測成分在線性范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系；平均回收率良好，該法具有良好分離效果及重復(fù)性且快速、簡便，可作為丹參的

17、質(zhì)量控制方法。趙希賢187測定了30批不同產(chǎn)地及不同品種是不同植物品種嗎？的丹參樣品的野生或栽培品丹參藥材及飲片丹參素、丹酚酸B、原兒茶醛、咖啡酸含量，結(jié)果丹參素、原兒茶醛、咖啡酸的含量在不同產(chǎn)地間存在顯著性差異，而丹酚酸B含量在不同產(chǎn)地間無顯著性差異；4 種成分的含量在栽培品和野生品間存在顯著性差異，其中栽培品丹參中丹酚酸B的含量較高，而野生品丹參中丹參素、原兒茶醛、咖啡酸的含量較高。王莉等198采用高分離度快速液相色譜(RRLC)法，以3,4-二羥基苯乙酸為內(nèi)標(biāo)，0.1%甲酸-水為流動相梯度洗脫，同時測定了丹參中9種酚酸類成分，該法可以使樣品在9min 內(nèi)達(dá)到良好分離，與常規(guī) HPLC 相

18、比節(jié)省了近 6 倍的時間，且精密度重現(xiàn)性良好，適用于丹參藥材的質(zhì)量控制。侯雙1920對11個無性系材料55份丹參樣品中的5個主要有效成分（丹參素、原兒茶醛、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮A）同時進(jìn)行含量測定，結(jié)果顯示全部批次的樣品丹酚酸B的含量均遠(yuǎn)高于國家標(biāo)準(zhǔn)，而丹參酮A的含量多少？為0.181.88mg/g，幾乎均未達(dá)到藥典規(guī)定的0.2%的水平均較低。在排除了土壤、氣候等環(huán)境因素的影響，外部生長環(huán)境和生長年限一致的情況下，各無性系材料中水溶性和脂溶性成分的含量仍然有較大差別；此外，作者還按照丹參根的不同部位、粗細(xì)以及根色分別對樣品進(jìn)行分等，并進(jìn)行有效成分含量測定。結(jié)果皮部丹參酮和丹參酮A的含量顯

19、著高于木部，而丹參素和丹酚酸B的含量皮部高于木部，差異不顯著；脂溶性成分以直徑0.2cm以下的丹參含量最高，蘆頭含量最低，水溶性成分直徑越大含量越高；不同根色的丹參水溶性和脂溶性成分差異都較大，粉末顏色越趨近棕紅色，且顏色越深，其脂溶性成分含量就越高，而且水溶性成分含量也較高，粉末顏色為灰白色的丹參質(zhì)量最差。3.3 指紋圖譜研究進(jìn)展王立萍等210采用高效液相色譜法建立了山東道地藥材丹參脂溶性成分的指紋圖譜，并同時測定了丹參酮A、丹參酮、隱丹參酮3種有效成分的含量。所得圖譜中主要峰群的整體圖貌基本一致，體現(xiàn)了山東道地藥材內(nèi)在質(zhì)量的穩(wěn)定性。含量測定結(jié)果顯示藥材中所含的隱參酮含量差異較大，且丹參酮A

20、含量相近的藥材，所含隱丹參酮及丹參酮的量相差較大。因此，中國藥典僅以丹參酮A含量作為脂溶性成分質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)，具有有一定的局限性。李瑞芳等2122采用HPLC法對22個批次的山東產(chǎn)丹參進(jìn)行了脂溶性成分指紋圖譜研究，并對結(jié)果進(jìn)行了聚類分析。結(jié)果共有18批樣品的指紋圖譜相似度大于0.9，22批樣品共聚為兩大類。哪兩大類？說明山東不同產(chǎn)地的丹參藥材脂溶性成分沒有明顯區(qū)別，藥材整體具有較大程度的相似性。閻海榮2223以甲醇-0.002mol/L四丁基溴化銨溶液（V/V）=6:1為流動相，在270nm下建立了丹參的指紋圖譜，共確定了6個共有峰。各產(chǎn)地丹參藥材的HPLC指紋圖譜共有峰的相對保留時間差別較小，但

21、是共有峰相對峰面積值差別顯著，說明各產(chǎn)地的丹參藥材至少含有六種相同化學(xué)的成分。但生長的地理環(huán)境和氣候條件的不同導(dǎo)致其主要化學(xué)成分含量差別較大。李長峰2324對丹參藥材脂溶性和水溶性兩大類成分同時進(jìn)行指紋圖譜研究，共標(biāo)定14個共有峰，并將丹參和白花丹參的指紋圖譜進(jìn)行了比較：二者指紋圖譜中的主要特征峰相對保留時間基本一致，峰面積比值大小差異不大，二者的圖譜的相似度非常高。劉少華等2425利用UPLC法建立丹參藥材水溶性成分指紋圖譜并對12批陜西產(chǎn)丹參藥材進(jìn)行測定。共標(biāo)定12個共有特征共有峰，且各樣品指紋圖譜相似度均在0.95以上。3.4 微量元素的測定 何春娥等2526借助ICP-MS/ICP-A

22、ES技術(shù)分析比較了4個產(chǎn)地丹參種質(zhì)同地種植根什么意思？中微量元素的含量。結(jié)果顯示，丹參根中含有豐富的微量元素，尤其是鈣、鎂、鐵、鋅、錳、鍶、鋇、硼、銣、銅、釩、鉻等。雖然有些元素屬于重金屬元素,如鉛、鎘、砷、汞、銅等，但各元素含量均低于檢測限。3種紫花丹參之間，除了陜西商洛紫花丹參根中銣和鉬的含量較低、鎳的含量較高外,其他19種微量元素含量都較為接近。3.5 其他董昕等2627應(yīng)用電噴霧-離子阱質(zhì)譜分別對8個丹參對照品進(jìn)行了多級質(zhì)譜裂解分析，并總結(jié)了水溶性丹酚酸類和脂溶性丹參酮類成分的裂解規(guī)律。對丹參藥材進(jìn)行了液相-質(zhì)譜聯(lián)用分析及多級質(zhì)譜分析，鑒別和歸屬了丹參藥材中的30個成分。證明應(yīng)用離子阱

23、質(zhì)譜的多級裂解信息對中藥材中的復(fù)雜成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析和鑒別，可以為中藥材的質(zhì)量控制乃至中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供豐富的信息。吳宏偉等2728采用1，1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)法對10個產(chǎn)地丹參藥材抗氧化能力進(jìn)行評價，并采用紫外光譜法對其總丹酚酸含量進(jìn)行了測定。結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地的丹參具有不同的抗氧化能力，其能力的強(qiáng)弱與總丹酚酸的含量成正比。提示采用藥效學(xué)方法評價藥材質(zhì)量具有一定的準(zhǔn)確性和可行性。4 小結(jié)4.1 生藥鑒定 對丹參的生藥鑒定主要是采用性狀、顯微、紅外光譜等手段，研究對象側(cè)重于不同產(chǎn)地野生品、栽培品丹參以及與近緣種植物根的比較；蛋白電泳以及DNA分子標(biāo)記等技術(shù)已逐漸應(yīng)用到

24、丹參種質(zhì)遺傳多樣性的鑒定中。但對丹參飲片的鑒定、性狀與質(zhì)量相關(guān)性的研究尚少。4.2 質(zhì)量評價 對于丹參的質(zhì)量評價，主要采用高效液相色譜法，以不同產(chǎn)地、不同生境丹參為研究對象，集中于單一化學(xué)成分或化學(xué)成分群的含量測定以及指紋圖譜研究等方面，為評價丹參藥材的質(zhì)量發(fā)揮了作用。研究表明，醇溶性浸出物和脂溶性化學(xué)成分含量偏低是目前多批次丹參藥材不能達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)的障礙。因此，應(yīng)當(dāng)研究醇溶性浸出物與脂溶性化學(xué)成分在丹參中的動態(tài)積累，重新評價兩大類物質(zhì)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。參考文獻(xiàn)1中國藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部M.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，70712黎躍成.藥材標(biāo)準(zhǔn)品種大全S.成都:四川科學(xué)技術(shù)

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