高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法

1、高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法1、器材牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿（6套一包），手提式咼壓蒸汽菌鍋等2、操作步驟1 首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱 架相平為宜。2 放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流 通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸， 以免冷凝水淋濕包 口的紙而透入棉塞。3加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱 的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。4.用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。 待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸

2、上升。 當鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用1. 05kg/cm2, 121. 3C，20分鐘滅菌。5滅菌所需時間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降， 當壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。 如果壓力未降到0時，打開排氣閥，就會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng) 基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污 染。6.將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37 T溫箱培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢查若無雜菌生長， 即可待用。稀釋倒平板法先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋（如1 ： 10 、1 ： 100 1 :1000、1

3、: 10000），然后分別取不同稀釋液少許，與已溶化并冷卻至45 C左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入火過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含 菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時間即可出出菌落。如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂 培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨后挑取該單個菌落，或重復以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。倒平板的兩種方法持皿法將若干無菌培養(yǎng)皿疊放在左側(cè)，便于拿取。點燃煤氣燈，將火焰調(diào)到適中（空氣不要太大，以免氣流過急）。倒平板時，先用左手握住三角瓶的底部，傾斜三角瓶，用右手旋松棉塞，然后用右手的小指和手掌邊緣夾住棉塞并將它拔出（切勿將棉塞放在桌面上

4、），隨之將瓶口周緣在火焰上過一下（不可灼燒，以防爆裂，以殺死可指沾在瓶口外的雜菌。然后 將三角瓶從左手傳至右手中（用右手的拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部），在這操作過程中瓶口應(yīng)保持在離火焰23處，瓶口始終向著火焰。左手拿起一套培養(yǎng)皿，用中指、無名指和小指托住培養(yǎng)皿底部，用食指和大拇指夾住皿蓋并開啟一縫，恰好 能讓三角瓶伸入，隨后倒出培養(yǎng)基。一般約倒入12ml的培養(yǎng)基即可鋪滿整個皿底。蓋上皿蓋，置水平位置等凝。然后再將三角瓶移至左手，瓶口再次過火并塞緊棉塞。平板培養(yǎng)基的冷凝方法有兩種，一種是將平板一個個攤開在桌面上冷凝，另一方 法是將幾個平板疊在一起冷凝。前者冷凝速度較快，在室溫較高時采用；而后者冷凝 速度較慢，可在室溫較低時采用，其優(yōu)點是形成冷凝水少，尤其適用于平板劃線等的 需。疊皿法此法步驟與持皿法基本相同。不同點是左手不必持培養(yǎng)皿，而是將培養(yǎng)皿疊放在 煤氣燈的左側(cè)并靠近火焰，用右手拿住三角瓶的底部，左手的掌背對著瓶口，用小指 與無名指夾住瓶塞，將其拔出，隨即使瓶口過火，同時用左手開啟最上面的皿蓋，倒 入培養(yǎng)基，蓋上皿蓋即移至水平位置待凝。再依次倒下面的平板。在操作過程中，瓶 口應(yīng)向著火