第四章血細胞化學染色的臨床應用

1、第 四 章血細胞化學染色的臨床應用本章考點1.常用血細胞化學染色的原理及意義2.血細胞化學染色的臨床應用（1）急性白血病類型的鑒別（2）貧血類型的鑒別重點：過氧化物酶染色、過碘酸-雪夫反應、堿性磷酸酶染色、非特異性酯酶染色和鐵染色原理及臨床意義。難點：1.各種化學染色的原理。2.化學染色在鑒別各類急性白血病中的作用。各類血細胞的化學成分，分布和含量不同，可利用化學染色的方法加以區(qū)分；在病理情況下，血細胞的化學成分可發(fā)生變化，可利用它們的變化識別不同的病態(tài)細胞。因此，骨髓細胞化學染色是臨床血液病診斷和研究中不可缺少的手段。一、常用血細胞化學染色的原理及意義1.過氧化酶染色（POX）（1）原理血細

2、胞內的過氧化酶分解H2O2 ，釋出初生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺氧化成藍色聯(lián)苯胺，后者進一步變成棕黑色化合物，沉著于胞質內。（2）結果判斷陽性結果為胞質內出現棕黑色顆粒。（一）無顆粒。（）顆粒細小、彌散分布。（+）顆粒較粗、局灶分布。（+）顆粒粗大、密集、分布較廣，占胞質的1/22/3。（+）顆粒粗大、成團塊，幾乎布滿胞質。（+）顆粒成團塊狀，充滿胞質，并覆蓋胞核。（3）正常血細胞的染色反應1）粒細胞系統(tǒng)：原始粒細胞大多呈陰性反應，有的可出現少量藍黑色顆粒。自早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均呈陽性反應，隨細胞的成熟，陽性反應的程度逐漸增強。中性分葉核粒細胞為強陽性反應，嗜酸性粒細胞陽性反應的程度最強，其陽

3、性顆粒比中性粒細胞粗大，有折光性，嗜堿性粒細胞呈陰性反應。2）單核細胞系統(tǒng)：原始單核細胞呈陰性反應，幼單核細胞和單核細胞呈弱陽性反應，陽性顆粒少而細小，彌散分布，有的也可呈陰性反應。3）其他細胞：淋巴細胞、巨核細胞、血小板、幼紅細胞、漿細胞和組織細胞均呈陰性反應。有的吞噬細胞可呈陽灶反應。 圖17 引自劉志潔、黃文源主編：實用臨床血液細胞學圖譜科學出版社 1996年1月第1版（4）臨床意義1）幫助鑒別急性白血病的類型：急性粒細胞白血病時，白血病性原始粒細胞可呈陽性反應，陽性顆粒一般較多，較粗大，常呈局限性分布；急性淋巴細胞白血病時，原始淋巴細胞和幼淋巴細胞均呈陰性反應；急性單核細胞白血病時，白

4、血病性原始單核細胞呈陰性反應，有時雖少數可呈弱陽性反應，但陽性顆粒少而細小，常彌散分布。小型原始粒細胞和原始淋巴細胞不易區(qū)別，如果小型原始細胞呈過氧化物酶陽性反應，可確定為小型原始粒細胞。急性早幼粒細胞白血病有時須與急性單核細胞白血病鑒別，如果白血病細胞呈過氧化物酶強陽性反應，應確定為急性早幼粒細胞白血病。急性單核細胞白血病有時須與組織細胞白血病或惡性組織細胞病鑒別，異常組織細胞的過氧化物酶呈陰性反應，而白血病性幼單核細胞和單核細胞呈弱陽性反應。 圖18 POX染色（過氧化物酶染色）主要用于急性白血病鑒別診斷，急粒為陽性，一般顆粒多粗大。急淋呈陰性反應。而急單多為陰性，有時也為陽性，但陽性顆粒

5、小，彌散分布。2）成熟中性粒細胞過氧化物酶活性的變化：活性增高：可見于再生障礙性貧血、感染（特別是化膿菌感染）、急性淋巴細胞白血病和慢性淋巴細胞白血病?；钚詼p低：可見于急性粒細胞白血病、慢性粒細胞白血病、急性單核細胞白血病、骨髓增生異常綜合征、放射病及退化性中性粒細胞。2.過碘酸-雪夫反應（糖原染色、PAS）（1）原理過碘酸是氧化劑，使含乙二醇的多糖類物質氧化，形成雙醛基。醛基與雪夫試劑中的無色品紅結合，形成紫紅色化合物，附著在含有多糖類的胞質中。紅色的深淺與細胞內能放應的乙二醇基的量成正比。（2）結果判斷陽性結果為胞質內出現紅色顆粒、塊狀或呈彌漫狀紅色。（）胞質無色，無顆粒。（+）胞質淡紅色

6、或有少量紅色顆粒，通常10個顆粒。 （+）胞質紅色或有10個以上紅色顆粒。（+）胞質呈暗紅色或有粗大紅色顆粒，可出現紅色塊狀。（+）胞質呈紫紅色或有粗大紅色塊狀。 圖19 引自劉志潔、黃文源主編：實用臨床血液細胞學圖譜科學出版社 1996年1月第1版（3）正常血細胞的染色反應1）粒細胞系統(tǒng)：原始粒細胞為陰性反應；自早幼粒細胞至中性分葉核粒細胞均呈陽性反應，并隨細胞的成熟，陽性反應的程度逐漸增強；嗜酸性粒細胞的顆粒本身不著色，而顆粒之間的胞漿呈紅色；嗜堿性粒細胞為陽性反應，陽性反應物質為大小不一的紫紅色顆粒。2）紅細胞系統(tǒng)：幼紅細胞和紅細胞均呈陰性反應。3）單核細胞系統(tǒng)：原始單核細胞為陰性反應，

7、幼單核細胞為（+）陽性反應，單核細胞為（+）（+）陽性反應。有時在胞質的邊緣處陽性反應顆粒較粗大。4）淋巴細胞：大多數淋巴細胞為陰性反應，少數淋巴細胞可呈（+）陽性反應，原始及幼稚淋巴陽性。 5）巨核細胞和血小板：巨核細胞為陽性反應，陽性反應物質為紅色顆粒狀，有時為紅色塊狀。血小板為陽性反應，陽性反應物質為細顆粒狀，有時為紅色小塊狀。6）其他細胞：漿細胞一般為陰性反應，少數可呈陽性反應，陽性反應物質為紅色細胞顆粒狀。巨噬細胞可呈陽性反應，陽性反應物質為紅色細顆粒狀。（4）臨床意義1）紅細胞系統(tǒng)：紅血病或紅白血病時幼紅細胞可呈陽性反應，有時陽性反應幼紅細胞的百分比增高，陽性反應的程度也很強，有時

8、紅細胞也呈陽性反應。缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血（又稱地中海貧血）以及骨髓增生異常綜合征時幼紅細胞可呈陽性反應，有時陽性反應幼紅細胞的百分比也較高。有時紅細胞也可呈陽性反應。 巨幼細胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血和白血病等疾病時，幼紅細胞為陰性反應，有時僅個別幼紅細胞呈陽性反應。2）白細胞系統(tǒng)：急性淋巴細胞白血病時白血病性原始淋巴細胞的陽性反應物質為紅色粗顆粒狀或紅色塊狀，底色不紅；急性粒細胞白血病時，白血病性原始粒細胞的陽性反應物質呈均勻分布的紅色細顆粒狀或呈均勻紅色；急性單核細胞白血病時，白血病性原始單核細胞的陽性反應物質呈紅色細顆粒狀，彌散分布，有時在胞漿的邊緣處顆粒較粗大。

9、圖20 PAS染色（糖原染色、過碘酸-雪夫反應）主要用于ALL與ANLL的鑒別。ALL原淋及幼淋呈顆粒狀或均勻紅色。急單可呈陽性，但為顆粒狀、彌散分布。MDS、紅白血病中幼紅可陽性（均勻紅色或塊狀）。圖21 PAS染色，急性粒細胞白血病一般陰性或少數原粒呈陽性，為細顆粒狀。 3）其他細胞：幫助鑒別不典型巨核細胞和霍奇金細胞或Reed- Sternberg細胞，前者呈強陽性反應，后者呈弱陽性或陰性反應。幫助鑒別戈謝細胞和尼曼-皮克細胞，前者呈強陽性反應，后者是弱陽性反應，且空泡中心為陰性反應。幫助鑒別白血病細胞和腺癌骨髓轉移的腺癌細胞，后者呈強陽性反應，陽性反應物質為紅色細顆粒狀或粗顆粒狀，有時

10、呈紅色塊狀。3.堿性磷酸酶染色（NAP）（1）原理（偶氮偶聯(lián)法）：血細胞內的堿性磷酸酶在pH 9.49.6的條件下將基質液中的-磷酸萘酚鈉水解，產生-萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性灰黑色沉淀，定位于酶活性所在之處。（2）結果判斷陽性結果為胞質內出現灰褐色至深黑色顆粒狀或片狀沉淀 （一）灰褐色沉淀，為0分。（+）胞質出現灰褐色沉淀，為1分。（+）胞質深褐色沉淀，為2分。（+）胞質中已基本充滿棕黑色顆粒狀沉淀，但密度較低，為3分。（+）胞質全被深黑色團塊沉淀所充滿，密度高，甚至遮蓋胞核，為4分。 反應程度個數積分-+1020402010100（個）020806040（200分）陽性率為90%，積分值為

11、200。（4）參考值：成熟中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）的積分值為751。由于各實驗室的實驗條件不同，正常值也有差異，應建立本實驗室的正常值。這里的正常值僅供參考。（5）臨床意義1）生理變化：年齡變化：新生兒NAP活性增高，以后下降。兒童期各年齡大致相似，成年期較兒童期活性減低，老年期更低。應激狀態(tài)下的變化：緊張、恐懼、激烈運動等NAP活性可增高。月經周期中的變化：經前期增高，行經后降低，經后期恢復。妊娠期的變化：妊娠23個月的NAP積分值輕度增高，以后逐月增高，分娩時達高峰，產后則恢復正常。 2）病理性變化：感染：細菌性感染時NAP積分值增高。在細菌性感染中球菌性感染較桿菌性感染為高；在球菌

12、性感染中，急性較慢性為高。病毒性感染時，NAP積分值一般無明顯變化。因此本染色法有時可幫助鑒別細菌性感染和病毒性感染；血液?。郝粤＜毎籽〉腘AP積分值明顯減低，常為“0”，緩解時NAP積分值上升到正常。類白血病反應時的NAP積分值明顯增高，中性桿狀核粒細胞的堿性磷酸酶活性增強，甚至中性晚幼粒細胞也呈陽性反應。因此本法常用來鑒別慢粒和類白血病反應及觀察慢粒療效的指標之一；急性粒細胞白血病時NAP積分值減低，急性淋巴細胞白血病時NAP積分值一般增高，因此本法可作為鑒別急粒和急淋的方法之一；急性單核細胞白血病時NAP積分值一般減低，有時可正常；粒細胞白血病合并細菌性感染時NAP積分值可增高，但

13、不如單純細菌性感染增高的明顯；再生障礙性貧血的NAP積分值增高，當病情好轉時，NAP積分值可下降，完全緩解時NAP活性可恢復到正常，因此本法對再障的診斷、療效觀察和估計病情均有一定意義；陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿的NAP積分值減低，因此本法可作為鑒別陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿和再生障礙性貧血的方法之一；真性紅細胞增多癥的NAP積分值升高，而繼發(fā)性紅細胞增多癥的NAP積分值無明顯變化。因此本法可用來鑒別真性紅細胞增多癥和繼發(fā)性紅細胞增多癥；骨髓增生異常綜合征的NAP積分值減低；其他3）其他應用腎上腺皮質激素、雌激素和ACTH后NAP積分值增高。酯酶染色酯酶存在于不同的白細胞中，根據不同的底物顯示酶的活性

14、，可將酯酶分成三種，包括萘酚-AS-D氯乙酸酯酶、-乙酸萘酚酯酶和-丁酸萘酚酯酶。萘酚-AS-D氯乙酸酯酶為粒系細胞所特有，又稱特異性酯酶染色。-乙酸萘酚酯酶可存在于多種細胞，故又稱非特異性酯酶染色。-丁酸萘酚酯酶主要存在于單核系細胞中，又稱單核細胞酯酶。三種酯酶染色對不同細胞的識別和急性白血病的診斷與見鑒別有一定意義。下面分別介紹。4.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-D-NCE）（1）原理血細胞內的氯乙酸AS-D萘酚酯酶將基質液中的氯乙酸AS-D萘酚水解，產生萘酚AS-D，進而與基質液中的堅牢藍GBC偶聯(lián)，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質內。屬于特異性酯酶染色。（2）結果判斷陽性結果為胞質內

15、出現紅色沉淀：（一）胞質無色。（+）胞質呈淡紅色。（+）鮮紅色沉淀布滿胞質。（+）深紅色沉淀充滿胞質。 （3）正常血細胞的染色反應1）粒細胞系統(tǒng)：原始粒細胞為陰性反應或陽性反應，自早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均為陽性反映，酶活性并不隨細胞的成熟而增強。嗜酸性粒細胞為陰性反應或弱陽性反應，嗜堿性粒細胞為陽性反應。2）其他血細胞、單核細胞為陰性反應，個別可呈弱陽性反應。淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞和血小板均呈陰性反應。（4）臨床意義：鑒別急性白血病的類型。急性粒細胞白血病時，白血病性原始粒細胞可出現陽性反應；急性單核細胞白血病及急性淋巴細胞白血病時，白血病細胞均呈陰性反應；急性粒-單核細胞白血病時，部

16、分白血病細胞可呈陽性反應（原粒和早幼粒）。有些白血病細胞呈陰性反應（原始單核和幼單核細胞）。5.-醋酸萘酚酯酶染色（ -NAE）（1）原理血細胞內的-醋酸萘酚酯酶（-NAE）將基質液中的-醋酸萘酚水解，產生-萘酚，萘酚再與堅牢藍B偶聯(lián)，形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀，定位于胞質內。屬于非特異性醋酸染色。（2）結果判斷：染色陽性結果為胞質中出現棕黑色顆粒沉淀。（3）正常血細胞的染色反應1）單核細胞系統(tǒng)原始單核細胞為陰性反應或弱陽性反應；幼單核細胞和單核細胞為陽性反應，這種反應可被氟化鈉抑制。2）粒細胞系統(tǒng)各期粒細胞為陰性反應，有時少數粒細胞可呈弱陽性反應，此反應不被氟化鈉抑制。3）巨核細胞和血小板

17、為陽性反應。4）其他血細胞幼紅細胞和淋巴細胞一般為陰性反應，有時少數細胞也可是弱陽性反應，此反應不被氟化鈉抑制；漿細胞為陰性反應。 （4）臨床意義1）幫助鑒別急性白血病的類型：單核細胞白血病時，白血病原始單核細胞可呈陽性反應，幼單核細胞和單核細胞大多呈陽性反應，此反應能被氟化鈉抑制，抑制率在50%以上；急性粒細胞白血病時，白血病原始粒細胞為陰性反應，有時個別白血病原始粒細胞可呈陽性反應，但此反應不被氟化鈉抑制；急性淋巴細胞白血病時，白血病原始淋巴細胞為陰性反應，有時原始淋巴細胞可出現陽性反應，主要見于T細胞型急淋；急性粒-單核細胞白血病時，部分原始白血病細胞呈陽性反應，并能被氟化鈉抑制，這些白

18、血病細胞可能是單核細胞系細胞，部分白血病細胞呈陰性反應，可能是粒細胞系細胞。2）紅血病和紅白血?。寒惓Ｓ准t細胞可呈陽性反應。3）巨幼細胞貧血：巨幼細胞也可呈陽性反應。6.醋酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-D-NAE）和氟化鈉抑制試驗（1）原理：血細胞內的醋酸AS-D萘酚酯酶與重氮鹽偶聯(lián)，形成不溶性藍色沉淀，定位于胞質內。氟化鈉抑制試驗是以相同方法制備2份基質液，其中一份加入適量氯化鈉，另一份不加氟化鈉作對照。將已固定的2張相同標本的涂片混入這2種不同基質液中，分別作醋酸AS-D萘酚酯酶染色。屬于非特異性酯酶染色。用油鏡觀察計數100或200個被檢細胞，分別計算出抑制前和抑制后的陽性率和陽性積分，

19、按下述公式計算出抑制率。抑制率（%）（抑制前陽性率或陽性積分-抑制后陽性率或陽性積分）/抑制前陽性率或陽性積分100所謂抑制是指氟化鈉試驗的抑制率大于50%。（2）結果判斷：染色陽性結果為胞質中出現棕黑色顆粒沉淀：（一）無顆粒沉淀，為0分。（）顆粒少量、稀疏，為0.5分。（+）胞質內1/2區(qū)域出現顆粒沉淀，為l分。（+）胞質內3/4區(qū)域出現顆粒沉淀，為2分。（+）胞質內布滿顆粒沉淀，為3分。（+）胞質內充滿濃密的顆粒沉淀，為4分。（3）正常血細胞的染色：1）粒細胞系統(tǒng)：原粒細胞為陰性反應或陽性反應，自早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均為陽性反應，一般為（+）（+），此反應不被氟化鈉抑制。 2）單核細

20、胞系統(tǒng)：原始單核細胞為陰性反應或陽性反應，幼單核細胞和單核細胞均為陽性反應，一般為（+）（+），此反應能被氟化鈉抑制。3）淋巴細胞：淋巴細胞呈弱陽性反應，此反應不被氟化鈉抑制。4）紅細胞系統(tǒng)：早期幼紅細胞可呈陽性反應，隨細胞的成熟陽性反應程度逐漸減弱，此反應不被氟化鈉抑制。5）巨核細胞和血小板：為陽性反應。（4）臨床意義：幫助鑒別急性白血病的類型。急性粒細胞白血病時，白血病原始粒細胞可呈陽性反應，此反應不被氟化鈉抑制。急性單核細胞白血病時，白血病原始單核細胞可呈陽性反應，幼單核細胞和單核細胞為陽性反應，此反應被氯化鈉抑制。急性粒-單核細胞白血病時，部分白血病細胞的陽性反應可被氟化鈉抑制，部分陽

21、性反應不被氟化鈉抑制。7.堿性-丁酸萘酚酯酶染色（ -NBE）（1）原理：血細胞內的-丁酸萘酚酯酶（-NBE）在pH堿性的條件下水解基質液中的-丁酸萘酚，釋放出-萘酚，后者與基質液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。-NBE主要存在于單核細胞中，其陽性產物能被氟化鈉抑制，而其他細胞系列的陽性產物不能被氟化鈉抑制。屬于單核細胞酯酶染色。（2）結果判斷：陽性結果為胞質中出現藍色顆粒。（3）正常血細胞的染色反應1）粒細胞系統(tǒng)：各期粒細胞均呈陰性。2）單核細胞系統(tǒng)：分化差的原單細胞呈陰性，分化好的原單細胞呈陽性，幼稚

22、及成熟的單核細胞呈陽性，陽性反應能被氟化鈉抑制。3）淋巴細胞系統(tǒng)：外周血的T淋巴細胞、非T非B淋巴細胞可呈陽性，B淋巴細胞呈陰性。4）其他細胞：巨核細胞、幼紅細胞、漿細胞呈陰性或弱陽性；組織細胞也可呈陽性，但不被氟化鈉抑制。（4）臨床評價：與-NAE染色的臨床意義相同，敏感性不如-NAE，而特異性較-NAE高，是急性白血病常用的細胞化學染色。1）輔助鑒別急性白血病細胞類型：急性單核細胞白血?。簡魏讼导毎蠖鄶党赎栃?，陽性反應能被氟化鈉抑制；急性粒細胞白血?。涸＜毎话愠赎幮裕患毙栽缬琢＜毎籽。涸缬琢＜毎３赎幮?；急性粒單細胞白血病：部分白血病細胞陽性，部分白血病細胞陰性；急性淋巴細胞白血

23、?。涸技坝字闪馨图毎话愠赎幮?。2）急性單核細胞白血病有時須與惡性組織細胞病相鑒別，異常組織細胞也可呈陽性，但陽性反應不能被氟化鈉抑制。 8.酸性磷酸酶染色（ACP）（1）原理：血細胞內的酸性磷酸酶在酸性條件下，將基質中的磷酸萘酚AS-BI水解，釋放萘酚AS-BI，萘酚AS-BI與六偶氮付品紅偶聯(lián)，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質內，如果血細胞的胞質呈紅色為陽性反應，無紅色為陰性反應?？咕剖崴嵝粤姿崦溉旧怯孟嗤椒ㄖ苽?份基質液，一份再加入適量L-酒石酸，另一份不加L-酒石酸。取兩張相同標本的涂片，分別用這2種不同基質液作酸性磷酸酶染色。如果血細胞內的酸性磷酸酶耐L-酒石酸抑制的都呈陽性反

24、應。如果不耐L-酒石酸抑制的，不加L-酒石酸的呈陽性反應，而加L-酒石酸的呈陰性反應。（2）結果判斷：陽性結果為胞質中出現鮮紅色顆粒沉淀：（一）胞質無色。 （+）胞質出現淡紅色顆粒。（+）胞質布滿鮮紅色顆粒。（+）胞質充滿深紅色顆粒。（3）正常血細胞的染色反應：粒細胞、單核細胞、淋巴細胞、巨核細胞、血小板、漿細胞、巨噬細胞呈陽性。（4）臨床意義1）幫助鑒別戈謝細胞和尼曼-匹克細胞，前者酸性磷酸酶染色為陽性反應，后者為陰性。2）幫助診斷多毛細胞白血病，多毛細胞白血病時多毛細胞的酸性磷酸酶染色為陽性反應，此酶耐L-酒石酸的抑制作用。淋巴肉瘤細胞和慢性淋巴細胞白血病的淋巴細胞，酸性磷酸酶染色也呈陽性反應，但此酸可被L-酒石酸抑制。3）幫助鑒別T淋巴細胞和B淋巴細胞，T淋巴細胞呈陽性反應，而B淋巴細胞為陰性反應。9.鐵染色（1）原理：細胞外含鐵血黃素和幼紅細胞內的鐵與酸性亞鐵氰化鉀發(fā)生普魯士藍反應，形成藍色的亞鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位。（2）正常血細胞的染色反應1）細胞外鐵：觀察骨髓小粒中的鐵，呈彌散藍色、顆粒狀、小珠狀或塊狀。根據骨髓小粒中鐵的存在方式及量將細胞外鐵分為（一）、（