益生菌對特應(yīng)性濕疹的控制作用

1、Probiotics in the management of atopic eczema益生菌對特應(yīng)性濕疹的控制作用作者：Isolauri1, T. Arvola2, Y. Stas1, E. Moilanen3, S.Salminen41圖爾庫大學(xué)兒科教研室，2坦佩雷大學(xué)醫(yī)院兒科部，3坦佩雷大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理教研室/坦佩雷大學(xué)醫(yī)院臨床化學(xué)科，4生物化學(xué)與食品化學(xué)教研室，圖爾庫大學(xué)，芬蘭文章出處：臨床與實驗變態(tài)反應(yīng)雜志，Vol.30, 16041610摘要背景： 近20年來，工業(yè)國家的過敏性疾病發(fā)病率顯著增加，因此迫切需要研制開發(fā)新的治療方法。目的：經(jīng)隨機雙盲安慰劑對照試驗證實，益生素在早期炎癥

2、反應(yīng)有潛在的控制作用。方法：27名平均年齡4.6個月的嬰兒（母乳喂養(yǎng)，未曾接觸過其他嬰兒或其他配方奶粉）確診患有特應(yīng)性濕疹。患兒停止母乳喂養(yǎng)后分組，分別服用含益生菌雙歧桿菌（Bb-12）或乳酸桿菌LGG （ATCC 53103）或不含益生菌的完全水解乳清配方奶粉。本實驗分別檢測了炎癥范圍和程度，嬰兒生長和營養(yǎng)情況，循環(huán)細胞因子/趨化因子濃度，血清中可溶性細胞表面粘附分子，甲基組胺和尿嗜酸粒細胞蛋白-X。結(jié)果：特應(yīng)性皮炎評分標準（SCORAD評分）可顯示特應(yīng)性濕疹的范圍和嚴重程度，母乳喂養(yǎng)期，SCORAD指數(shù)為16（7-15），中位數(shù)（四分位差）。同服用未添加益生菌配方奶的患兒相比，兩個月后，服

3、用添加益生菌配方奶的患兒有明顯好轉(zhuǎn)；x2=12.27. P=0.002. 添加雙歧桿菌Bb-12組的患兒SCORAD評分降至0（0-3.8），乳酸桿菌組的 SCORAD降至1（0.1-8.7），與未添加組評分形成對比13.4（4.5-18.2），中位數(shù)（四分位差）。同時檢測發(fā)現(xiàn)可溶性CD4的血清濃度和尿嗜酸性粒細胞蛋白X均降低。結(jié)論：本實驗首次證明特異益生菌種對過敏炎癥反應(yīng)的幫助。數(shù)據(jù)進一步說明益生菌可能抵抗炎癥反應(yīng)的腸道環(huán)境。當宿主體內(nèi)新產(chǎn)生的抗體敏感性不強時，這些益生菌株聯(lián)合作用，可幫助嬰兒度過斷奶期。因此益生菌為過敏治療和預(yù)防提供了食物治療的新方向。關(guān)鍵詞：過敏性炎癥反應(yīng)，特應(yīng)性，母乳喂

4、養(yǎng)，食物過敏，嬰兒，益生菌臨床與實驗變態(tài)反應(yīng)雜志，Vol.30,pp.16041610。投稿時間：2000年1月26日；修改時間2000年4月13日；定稿日期：2000年4月27日前言益生菌是對身體有益的食物活性成分1，健康人體消化道正常的微生物群落，其中最常見的菌群是乳酸桿菌和雙歧桿菌。目前益生菌還是腹瀉的最佳治療方法2，3，其消化道屏障作用在臨床有顯著效果：降低小腸滲透性4、調(diào)節(jié)小腸菌落平衡5，從而提高小腸IgA反應(yīng)6。本實驗所用的菌株雙歧桿菌Bb-12和乳酸桿菌LGG（ATCC53103）嬰兒均可安全服用2，3。近年來流行病學(xué)和實驗研究發(fā)現(xiàn)了炎癥與特應(yīng)性的逆相關(guān)性以及它們與T輔助細胞表型

5、存在交叉調(diào)節(jié)關(guān)系7，8?？刂蒲装Y反應(yīng)（一種對特應(yīng)性疾病的過度敏感）還能在菌群與過敏性宿主之間產(chǎn)生良性反應(yīng)9，10。微生物抗原可與腸道固有菌群產(chǎn)生反應(yīng)，正常菌群作用于粘膜表面對宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生深遠影響11：早期持續(xù)的微生物刺激所產(chǎn)生的影響遠超過偶發(fā)炎癥。體外實驗證實，特殊菌種對食物抗原引起的炎癥反應(yīng)有調(diào)節(jié)潛能，并能平衡促炎癥反應(yīng)、抗炎細胞因子的產(chǎn)生12-14。胃腸道微生物群，作為一種內(nèi)源防御機制，有助于探索影響炎癥反應(yīng)方法，尤其在斷奶后新生抗原首次產(chǎn)生時。因此，為了評價文獻中闡述的益生菌是否具有免疫調(diào)節(jié)的臨床作用，本實驗通過隨機雙盲安慰劑對照試驗評估了益生菌在特應(yīng)性濕疹患兒中的作用。特應(yīng)性濕疹是

6、常見的過敏首發(fā)癥狀。方法實驗對象我們從100名早期特應(yīng)性濕疹患兒中選出27名，確診使用Hanifin兒童特異性皮炎診斷標準15。其他選擇標準包括患兒在母乳喂養(yǎng)時發(fā)生特應(yīng)性濕疹，患兒未曾接觸過其他嬰兒，入選前未食用其他配方奶粉，對本配方奶耐受。試驗患兒中，平均1.6（1.3-2.0）月大時發(fā)生特應(yīng)性濕疹，（95% 置信區(qū)間CI）。15名患兒（56%）出現(xiàn)胃腸道癥狀包括嘔吐、溏便、腹瀉。多數(shù)患兒（82%）一級家庭成員有特應(yīng)性濕疹病史?；純浩骄挲g4.6個月大，完全母乳喂養(yǎng)，參加實驗后斷奶。參加實驗時，血清總IgE濃度（phadebas IgE Prist，法瑪西亞公司，瑞典）為7（IQR-20）k

7、U/L?；純航?jīng)放射變應(yīng)原吸附試驗（法瑪西亞公司）測定雞蛋、牛奶、小麥反應(yīng)陽性，分別為16%、11%、4%，皮膚點刺試驗測定雞蛋、牛奶、小麥反應(yīng)陽性，分別為15%、8%、15%。所有患兒家庭簽署書面知情同意書，同意參加實驗。本實驗得到Tampere大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會批準。實驗設(shè)計本實驗為隨機雙盲試驗，患兒平均分成三組：其中兩組斷奶，分別服用含益生菌（一組為雙歧桿菌Bb-12，一組為乳酸桿菌LGG）的徹底水解乳清嬰兒配方奶粉（Peptidi-Tutteli，Valio有限公司，芬蘭），一組斷奶，服用不含益生菌的徹底水解乳清嬰兒配方奶粉。根據(jù)相關(guān)文獻記載雙歧桿菌Bb-12（Christian H

8、ansen A/S，赫斯霍爾姆，丹麥）和乳酸桿菌LGG（Valio 有限公司，赫爾辛基，芬蘭）安全并能有效治療新生兒急性腹瀉，故本實驗選用這兩種益生菌。從以前臨床研究2，3和居民腹瀉研究，和腹瀉病人研究5，17可知益生菌的濃度范圍是310x（LGG）1109（Bb-12）集落形成單位(cfu)/g。一名微生物學(xué)家通過標準平板計數(shù)法獨立控制復(fù)方奶粉總各種微生物的含量。主要測量數(shù)據(jù)初級結(jié)果測量包括特應(yīng)性濕疹的范圍、程度和主觀癥狀（包括瘙癢、失眠）。刺激結(jié)果測量包括血清中可溶性細胞分子濃度、細胞因子/趨化因子濃度和尿液中甲基組胺濃度和嗜酸粒細胞蛋白-X（EPX）濃度。在所有測量單位中，粒巨嗜系集落刺

9、激因子（GM-CSF），可溶性細胞間粘附分子1（slCAM-1），腫瘤壞死因子-（TNF）以測量炎癥狀態(tài)；可溶性CD4（sCD4）、可溶性CD8（sCD8）、IL-2可溶性受體（IL-2sR）以反映T細胞炎癥反應(yīng)18-21和RANTES（正常T淋巴細胞表達和分泌的活性調(diào)節(jié)蛋白)；單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）以衡量肥大細胞的循環(huán)活性；血清中轉(zhuǎn)化生長因子-1（TGF-1）和IL1 受體拮抗劑（IL-1ra）以衡量循環(huán)中抗炎活性；尿液EPX以驗證嗜酸性炎癥的發(fā)生；尿液中組胺、甲基組胺代謝情況反應(yīng)早期抗原應(yīng)激反應(yīng)22，23。 特應(yīng)性濕疹評價特應(yīng)性濕疹的嚴重程度通過SCORAD評分來評價，該評分系

10、統(tǒng)是歐洲的特應(yīng)性皮炎評分標準24。分別在分組前，2個月、6個月后對濕疹評分。面積計算使用九分法，嚴重程度以紅斑、浮腫和/或丘疹、脫皮、苔蘚形成和干燥各級分數(shù)的總和計算，主觀臨床表現(xiàn)包括瘙癢、失眠，主要由家長估測評分。SCORAD評分由下述公式計算而得：面積/5+3.5嚴重程度+主觀評分。免疫評價分組前、實驗開始2個月后、6個月后分別采集靜脈血和尿液，并保存于-70等待檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附法，試劑盒含有sCD4、sCD8、IL-2sR、sICAM-1、IL-1ra、RANTES、MCP-1：購于R&D Systems公司，明尼阿波利斯，明尼蘇達州，美國；TNF-、GM-CSF、TGF-1：購于

11、Genzyme公司，劍橋，馬薩諸塞州，美國；稀釋尿樣中甲基組胺和EPX濃度用放射免疫測定法測定，反應(yīng)試劑產(chǎn)于Pharmacia&Upjohn Diagnostics公司，烏普薩拉，瑞士，尿樣測驗結(jié)果以甲基組胺/g或肌酐中EPX/mmol表示。生長和營養(yǎng)情況本實驗參照其它文獻25評價了營養(yǎng)攝入。家長分別在干涉的前后3天連續(xù)記錄營養(yǎng)攝入，固體和液體食品量經(jīng)家用儀器測量，用AIVO程序計算營養(yǎng)攝入量，參照芬蘭營養(yǎng)數(shù)據(jù)表和生產(chǎn)數(shù)據(jù)表26。定量測量嬰兒的母乳攝入量。體重和體長用電子秤和嬰兒身長量板分別在使用徹底水解配方奶粉前，試驗2個月，6個月時測量。其他營養(yǎng)參數(shù)如血清中白蛋白濃度、前白蛋白濃度、尿素濃

12、度和堿性磷酸酶后續(xù)進行了測量。數(shù)據(jù)分析測量數(shù)據(jù)取平均值為（95%的置信區(qū)間 CI）的中間值和四分位值（IQR），并用檢驗法比較實驗組的SCORAD評分，以避免重復(fù)配對實驗，同時用以比較各組之間免疫變量基線的改變。經(jīng)威氏符號秩次檢驗，數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計學(xué)意義。ANOVA用以比較配方奶粉攝入和各組間營養(yǎng)變量，x2試驗以比較三組嬰兒臨床癥狀的改善情況。斯皮爾曼等級相關(guān)以測定尿樣甲基組胺和EPX濃度與特應(yīng)性濕疹之間相關(guān)性，從而顯示特應(yīng)性濕疹的嚴重程度。（SCORAD評分）。結(jié)果益生菌對特應(yīng)性濕疹的作用母乳喂養(yǎng)期，SCORAD評分為16（7-25），中間數(shù)（IQR）。斷奶服用完全水解配方奶粉后，患兒評分降低，

13、顯示情況明顯緩解（創(chuàng)面、程度、主觀評定），但反應(yīng)程度各組不同（圖1）。2個月后SCORAD評分顯示，僅服用益生菌的組中出現(xiàn)病情好轉(zhuǎn)，LGG組9/9的患兒病情緩解，未添加益生菌組4/9患兒病情緩解：P=0.002。Bb-12組評分降至0（0-3.8），LGG組評分為1（0.1-8.7），未添加組評分13.4（4.5-18.2）。6個月后三組SCORAD評分接近，中位數(shù)（四分位值）為0（0-6.6）。圖1. SCORAD評分，中間值（四分位值）。特應(yīng)性濕疹創(chuàng)面、嚴重程度的評價和癥狀（瘙癢、失眠）隨機分組前及試驗2個月后的評估，（空白柱表示未添加益生菌組，密集斜線柱表示Bb-12添加組，斜線柱表示L

14、GG添加組）小圖：分組前和試驗2個月后尿樣嗜酸性粒蛋白X在不同組中的濃度益生菌對免疫參數(shù)的影響服用益生菌的患兒組試驗2個月后血清sCD4降低（表1）；H檢驗法顯示三組的顯著不同（P=0.005）?；純菏秤门浞侥谭酆?，三組血清sCD8和IL2sR均降低。血清TGF-1受益生菌調(diào)節(jié)（P=0.007，H檢驗法），但因益生菌群不同，調(diào)節(jié)作用不同：Bb-12添加組降低（P=0.04），LGG添加組升高（P=0.07）.而IL-1ra、TNF、GM-CSF、slCAM-1、RANTES和MCP-1的血清濃度不收益生菌影響。表1 三組患兒（完全水解配方奶粉EHF未添加益生菌組、Bb-12添加組、LGG添加組

15、）sCD4、sCD8、IL2sR和TGF-1在試驗前（前），2個月后（后）的血清濃度變化。EHF+EHF+EHFBb-12LGG前后前后前后sCD4511844655601140455404458g/mL（47355555）（34825235）（50926189）（10211635）(51516484)(35074601)sCD815101211118Ng/mL（1017）（912）（1117）（912）(813)(711)IL2sR430736053605325146183739g/mL（37894429）（29273981）（29274885）（30193387）(36055554）(35

16、275161)TGF-1757576465468ng/mL（6382）（6787）（7582）（3955）（5062）（5682）*P0.05 對比基線測量（各組間經(jīng)H檢驗法測定在統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異）試驗前母乳喂養(yǎng)時，尿樣EXP濃度與SCORAD評分密切相關(guān)（rho=0.53，P=0.01），甲基組胺尿樣濃度與之無相關(guān)性（rho=0.24，P=0.27）。益生菌添加組中，尿樣EPX明顯減少，Bb-12添加組P=0.01，LGG添加組（P=0.04）：圖1小圖生長與營養(yǎng)狀況參加實驗時，母乳喂養(yǎng)包含的營養(yǎng)：108（97-120）mL/kg，平均值為（95%的置信區(qū)間 CI）。2個月后，各組在配方奶

17、粉的營養(yǎng)方面相當，平均值為（95%的置信區(qū)間 CI）：未添加益生菌組75（63-88）mL/kg，Bb-12添加組73（63-88）mL/kg，LGG添加組76（70-82）mL/kg；P=0.96。每組患兒能量消耗分別占各自攝取總量的53（38-68）%，52（42-62）%和56（50-62）%，P=0.85。6個月后，消耗量下降至63（56-69）mL/kg, 例如：42(37-47) kcal/kg 177(156-199) kJ/kg，但固體食物攝入量同比增加：64(59-70)kcal/kg 270(245-294)kJ/kg，相當于總能量攝取的60(56-65)%。試驗后6個月后

18、隨訪時，平均益生菌攝入量為3-81010cfu/d。配方奶粉儲藏時基本無益生菌數(shù)量減少。隨訪期間所有患兒生長發(fā)育正常。平均值為95%置信區(qū)間的年齡別身高標準差在試驗前、2個月后、6個月后分別為-0.04（-0.410.33）、-0.11（-0.460.22）、0.0（-0.430.42）。試驗前，平均值為95%的置信區(qū)間所取的血清白蛋白、前白蛋白、堿性磷酸酶濃度均在正常范圍：41（4042）g/L，0.14（0.140.15）g/L，672（564780）U/L，并且后期隨訪中無變化。血清尿素濃度在母乳喂養(yǎng)期稍低，僅1.98（1.792.16）mmol/L，平均值為95%置信區(qū)間的取值：正常范

19、圍2.06.0mmol/L，益生菌添加劑組在2個月后隨訪中顯示該營養(yǎng)參數(shù)提高：Bb-12添加組4.1（3.44.7），LGG添加組3.3（2.73.7）。對比非益生菌添加組2.9（2.13.7）mmol/L，平均值為95%置信區(qū)間取值：P=0.02。6個月后三組濃度正常均近似與4.0（3.54.4）mmol/L。討論人類腸道菌落是復(fù)雜的代謝活性生態(tài)系，早年逐步生成27。腸道菌落的生成初期至關(guān)重要，任何抗體的免疫應(yīng)答都在該階段產(chǎn)生。因此，微生物群，主要是益生菌，可能在新生兒免疫系統(tǒng)的生成階段起作用，這一理念在近年來動物實驗中得到了證實，消化道相關(guān)的淋巴組織參與微生物集群現(xiàn)象28。胃腸道可產(chǎn)生Ig

20、A-分泌細胞，大大增強了小腸抗原尤其是微生物群落的刺激作用29。并且微生物集群現(xiàn)象強制性出現(xiàn)在口服免疫耐受人群而非食物致敏人群30，因此消化道菌群的組成差異將直接影響宿主的免疫自穩(wěn)性。益生菌的標準是：菌種于人類同源，在人體中宿生與膽汁酸共存，粘附于小腸粘膜1。Genera 本實驗所用菌屬乳酸桿菌和雙歧桿菌，研究表明與人類嘴唇、胃腸道和泌尿生殖道粘膜表層同源。益生菌已證實可增強宿主的小腸抵御機制1-6，因此可幫助控制治療早期過敏反應(yīng)，是預(yù)防特異性疾病惡化的關(guān)鍵。該疾病治療的重要性還在于嬰兒雖然易發(fā)生多種食物過敏25和哮喘31 ，但其免疫記憶尚不完善7，因此，在健康人體消化道特異微生物消耗的基礎(chǔ)上，本實驗提出特應(yīng)性疾病免疫應(yīng)答存在微生物抗原的反作用7，8，另外新近流行病學(xué)調(diào)查顯示早期炎癥反應(yīng)和后期特應(yīng)性疾病之間存在逆關(guān)聯(lián)32，33也支持本文觀點。 本實驗表明益生菌能減少嬰兒特應(yīng)性濕疹的創(chuàng)面，緩解癥狀。未添加益生菌的試驗對照組6個月后病情得以