實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目十五內(nèi)標(biāo)對(duì)比法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的含量

1、實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目十五內(nèi)標(biāo)對(duì)比法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 掌握內(nèi)標(biāo)對(duì)比法的測(cè)定步驟和結(jié)果計(jì)算方法。2掌握樣品、流動(dòng)相的處理方法，掌握液相色譜儀維護(hù)基本知識(shí)。二、實(shí)驗(yàn)原理內(nèi)標(biāo)對(duì)比法是內(nèi)標(biāo)法的一種，是高效液相色譜法中最常用的定量分析方法之一。分別配制含有等量?jī)?nèi)標(biāo)物的對(duì)照品溶液和試樣溶液，經(jīng)HPLC分析后，測(cè)得上述兩溶液中待測(cè)組分（i）和內(nèi)標(biāo)物（is）的峰面積，按下式計(jì)算試樣溶液中待測(cè) 組分的濃度Cj試樣=Cj對(duì)照x對(duì)乙酰氨基酚（撲熱息痛，PCM）為苯胺類解熱鎮(zhèn)痛藥，是治療發(fā)熱、鎮(zhèn)痛的首選藥物之一。對(duì)乙酰氨基酚稀堿溶液在波長(zhǎng)257 nm附近有最大吸收，可以用于定量測(cè)定。在其生產(chǎn)過(guò)程中，有可能引入對(duì)

2、氨基酚等中間體，這些雜質(zhì)在 上述波長(zhǎng)處也有紫外吸收，若采用紫外分光光度法測(cè)定含量，方法影響因素較多。為避免雜質(zhì)干擾，本實(shí)驗(yàn)采用 HPLC內(nèi)標(biāo)對(duì)比法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚含量。三、主要儀器和試劑1. 儀器高效液相色譜儀；Ci8色譜柱（4.6 mmx 150mm，5 pm）;電子天平；容量瓶； 移液管。2 試劑對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品：非那西丁對(duì)照品；對(duì)乙酰氨基酚原料藥；甲醇（色譜純）；重蒸餾水；針頭濾器（0.45pm，有機(jī)系）。四、操作步驟1 色譜條件色譜柱：C18色譜柱（4.6 mmx 150mm，5 pm）；流動(dòng)相：甲醇-水（60: 40）；流速：0.6 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：257 nm；柱溫：室溫

3、；進(jìn)樣量：20此。2. 內(nèi)標(biāo)溶液的配制精密稱取非那西丁對(duì)照品約0.2500g,用適量甲醇溶解后加入100 mL容量 瓶中，并稀釋至刻度，搖勻即得內(nèi)標(biāo)溶液。3 對(duì)照品溶液的配制精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品約0.0050g,用適量甲醇溶解后加入 100 mL容量瓶中，再精密加入內(nèi)標(biāo)溶液 10.00 mL,用甲醇稀釋至刻度，搖勻；精密量 取1.00 mL,置50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻即得。4. 試樣溶液的配制精密稱取對(duì)乙酰氨基酚樣品約 0.0050g,用適量甲醇溶解后加入100 mL容 量瓶中，再精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10.00mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻；精密量取1.00 mL,置50

4、mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻即得。5. 進(jìn)樣分析對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品溶液經(jīng)0.45濾膜濾過(guò)。用微量注射器吸取濾液，過(guò)進(jìn)樣20丄。記錄色譜圖，重復(fù)3次。以同樣方法分析試樣溶液。五、數(shù)據(jù)記錄與處理按下表記錄峰面積，按下式計(jì)算對(duì)乙酰氨基酚的百分含量。W（ % 戶.x ：- L- 一丄如 對(duì)照樣式中mi對(duì)照是對(duì)照溶液中組分i的量序號(hào)對(duì)照品溶液試樣溶液AiAisAi/AisAiA isAi/Ais123平均值六、注意事項(xiàng)1. 流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭?、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液經(jīng)過(guò)濾后使 用，過(guò)濾時(shí)注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換（一般不超過(guò)2天），防止滋生細(xì)菌變質(zhì)。2. 實(shí)驗(yàn)中可通過(guò)選擇適當(dāng)長(zhǎng)度的色譜柱， 調(diào)整流動(dòng)相中甲醇和水的比例或流 速，使對(duì)乙酰氨基酚與內(nèi)標(biāo)物的分離度達(dá)到定量分析的要求3內(nèi)標(biāo)對(duì)比法是內(nèi)標(biāo)校正曲線法的應(yīng)用。 若已知校正曲線通過(guò)原點(diǎn)， 并在一 定線性范圍內(nèi)， 則可用內(nèi)標(biāo)對(duì)比法測(cè)定。 該法只需配制一種與待測(cè)組分濃度接近 的對(duì)照品溶液， 并在對(duì)照品溶液與試液中加入等量?jī)?nèi)標(biāo) （可不必知道內(nèi)標(biāo)物的準(zhǔn) 確加入量），即可在相同條件下進(jìn)行測(cè)定。七、問(wèn)題與討論1比較