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1、實驗?zāi)康牧私夤壍纳盍?xí)慣,掌握果蠅飼養(yǎng)管理的方法,學(xué)習(xí)鑒定果蠅的雌雄性別和某些遺傳 性狀。二、實驗原理果蠅是遺傳學(xué)研究重要的實驗材料和模式生物,屬雙翅目果蠅科。因為其易于飼養(yǎng),染 色體數(shù)目少, 具有許多天然的或誘發(fā)的可遺傳突變性狀等優(yōu)點而受到全世界遺傳學(xué)家學(xué)家的 廣泛關(guān)注和使用,并且利用果蠅解決了一系列重大的遺傳學(xué)問題。我們的果蠅雜交實驗, 是重走經(jīng)典科學(xué)研究之路, 也能掌握一定的實驗方法和技能, 也有利于我們今后的學(xué)習(xí)和研 究。目前已發(fā)現(xiàn) 1000 多種果蠅,果蠅以酵母菌為主要食料,能發(fā)酵的水果或植物基質(zhì),都 可用作果蠅的飼料。果蠅具有以下特征:生活史短,每 12 天左右即可完成一個世代;
2、飼養(yǎng)容易,以玉米粉 等做飼料就可以生長繁殖;繁殖能力強,每只受精的雌蠅可以產(chǎn)卵500 個左右;突變型多,突變性狀多,多數(shù)是形態(tài)變異,容易觀察;染色體少、個體小,是一種很好的遺傳學(xué)實驗材 料,是一種模式生物。三、實驗材料及儀器實驗材料:各種形態(tài)的果蠅。實驗試劑:乙醚、酒精、丙酸、酵母粉、瓊脂、玉米粉、白糖。 實驗儀器:培養(yǎng)瓶、麻醉瓶、瓶塞、冰袋、體視顯微鏡一臺、解 剖針、濾紙、毛筆、白瓷板、酒精棉球、玻璃板、小燒杯。四、實驗方法1、搬移果蠅至新培養(yǎng)瓶或麻醉瓶取新培養(yǎng)瓶一瓶, 將棉塞略為松動, 放置于右手側(cè), 取欲轉(zhuǎn)移之果蠅培養(yǎng)瓶置于左手側(cè), 以左手握住瓶頸, 兩指輕扣棉塞頂部, 以右手輕拍瓶底使
3、果蠅掉落于培養(yǎng)基表面, 將培養(yǎng)瓶 置于左手側(cè), 拔起棉塞以左手兩指夾住棉塞外端, 再將置于右手側(cè)之新培養(yǎng)瓶棉塞拔起, 以 右手兩指夾住棉塞外端, 再以右手將新培養(yǎng)瓶倒扣于舊培養(yǎng)瓶上, 再以左手握住兩瓶口相接 處,翻轉(zhuǎn)使新培養(yǎng)瓶位于下方, 然后以右手掌心輕拍新培養(yǎng)瓶瓶底, 使果蠅掉落于新培養(yǎng)瓶 瓶底,然后迅速蓋上各瓶棉塞。2、麻醉方法取一麻醉瓶, 瓶口應(yīng)與培養(yǎng)瓶大小相仿, 使兩瓶口相對, 培養(yǎng)瓶在上, 用手拍擊培養(yǎng)瓶, 使果蠅落入麻醉瓶內(nèi), 迅速蓋上棉塞, 滴加 3 滴乙醚于小管口中的棉花上, 約一分鐘左右果 蠅倒臥于瓶底,即可將果蠅倒出進行操作。注意:過度麻醉將導(dǎo)致果蠅死亡。如果果蠅的翅膀與身
4、體呈45 度角翹起,表明麻醉過度,不能復(fù)蘇。3、觀察、計數(shù)取白瓷板平置于桌面, 將麻醉的果蠅倒于白瓷板上, 解剖鏡或低倍顯微鏡下進行性狀觀 察,并將雌雄果蠅分開放置。接種觀察過的果蠅( 2-3 對)到新配置的培養(yǎng)瓶中,為避免麻醉的果蠅直接掉落于培養(yǎng) 基表面而粘著于培養(yǎng)基表面致死, 先將培養(yǎng)瓶橫放, 將麻醉的果蠅用毛筆轉(zhuǎn)移到瓶壁, 待其 蘇醒后再將培養(yǎng)瓶正立。4、再麻醉觀察或計數(shù)過程中, 果蠅可能蘇醒,可準(zhǔn)備一玻璃培養(yǎng)皿, 內(nèi)以膠帶貼一小塊棉球, 滴 入適量乙醚,培養(yǎng)皿口朝下置于一旁備用, 如見果蠅翻身走動可將培養(yǎng)皿口朝下, 蓋于果蠅 上方待其麻醉后再移開。5、果蠅形態(tài)觀察果蠅具有豐富的外表形態(tài)
5、差異,包括眼色、眼形、翅形,剛毛形狀與數(shù)目等。進行果蠅 雜交實驗時必須區(qū)分性別,務(wù)必熟悉雌雄果蠅的差異。五、實驗結(jié)果體型較小,身長 34mm果蠅成蟲分頭、胸、腹三部分。頭部的前端鈍而平突,有一 對大的復(fù)眼,三個單眼和一對觸角,觸角芒呈羽毛狀。胸部有三對足,一對翅膀,一對平衡 棒。腹部背面為有色素帶的背板,腹面有腹板。外生殖器位于腹部末端。雌果蠅特征:個體較大,外生殖器色淺,腹部末端較尖,較寬厚呈卵圓形,腹部背面有 五條黑條紋,腹部腹面有 6個腹片,無性梳。雄果蠅特征:個體較小,外生殖器色深,腹部末端較鈍,腹部背面有三條黑條紋,最后 一條極寬,并延伸到腹面,腹部腹面有4個腹片,前腿跗節(jié)上有性梳。
6、果蠅胸足跗節(jié)共有5亞節(jié)。雄蠅第一對胸足跗節(jié)的第一亞節(jié)基部有一梳狀黑色鬃毛結(jié)構(gòu),即“性梳”,放大100倍左右可看清這一結(jié)構(gòu)。六、注意事項用于雜交的果蠅要輕度麻醉, 以免死亡。觀察過的果蠅不能回收到原瓶, 而要將它們置 于裝有乙醇的尸體瓶中;使用麻醉瓶前一定要確保瓶內(nèi)沒有其他果蠅,防止遺傳混雜。確保瓶塞不要超出瓶口,以防瓶塞被碰掉,果蠅飛出。七、思考題1、果蠅的生活史分為哪幾個階段?果蠅是完全變態(tài)昆蟲,生活周期可分為4個時期:卵、幼蟲、蛹和成蟲。最適培養(yǎng)溫度2025 C,溫度越高,生長越快,但高于30C不育甚至死亡。卵:白色,橢圓形,長約 0.5mm,前端背面伸出一觸絲,附著在食物上。幼蟲:一齡一
7、一二齡一一三齡,三齡體長4-5mm幼蟲頭尖尾鈍,頭上有一黑色鉤狀口器。蛹:化蛹前三齡幼蟲停止攝食,爬到相對干燥的瓶壁上,形成菱形的蛹,形狀由淡黃、 柔軟逐漸硬化為深褐色。成蟲:剛羽化的果蠅蟲體較肥大,體表呈半透明,顏色逐漸加深,硬化。2、如何準(zhǔn)確鑒定果蠅的雌性個體?要領(lǐng)?雌性體長2.5毫米,雄性較之還要小。 雄性有深色后肢,可以此來與雌性作區(qū)別。 雌雄 鑒別方法:雌果蠅體型大,末端尖。背面:環(huán)紋5節(jié),無黑斑。腹面:腹片 7節(jié)。第一對足跗節(jié)基部無性梳。雄果蠅體型小,末端鈍。背面:環(huán)紋7節(jié),延續(xù)到末端呈黑斑。腹面:腹片5節(jié)。第一對足跗節(jié)基部有黑色鬃毛狀性梳。3、為什么說果蠅是遺傳學(xué)研究的好材料?1)生活史短,每12天左右即可完成一個世代;2)飼養(yǎng)容易,以玉米粉等做飼料就可以生長繁殖;3) 繁殖能力強,每只受精的雌蠅可以產(chǎn)卵500個左右;4)突變型多,突變性狀多,多數(shù)是形態(tài)變異,容易觀察;5)染色體少、個體小,是一種很好的遺傳學(xué)實驗材料,是一種模式生物。4、將野生型和突變型的性狀填表。突變性狀基因符號染色體號性狀特征棒眼B1復(fù)眼呈狹窄垂直棒形,小眼數(shù)少卷曲翅Cy2翅膀向上卷曲,純合致死小翅m1翅膀小,長度不超過身體白眼w1復(fù)眼白色黑檀體e3身體呈烏木色,黑亮黑體b2體黑色,比黑檀體深黃體y1全身呈淺橙黃色
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