2012動物營養(yǎng)實驗技術(shù)

1、 “動物營養(yǎng)實驗技術(shù)” 材料 2012動物營養(yǎng)實驗技術(shù)（碩士）講稿 教學大綱一、課程性質(zhì)和任務本門課程的實踐性很強，全部教學內(nèi)容要求在實驗室完成。學完本課程后，要能夠根據(jù)特定實驗項目進行實驗用品計劃和建立新實驗室；能夠根據(jù)所掌握的技能對飼料原料、配合飼料產(chǎn)品及其半成品進行營養(yǎng)成分分析和品質(zhì)鑒定；結(jié)合動物實驗對飼料原料、配合飼料等進行生物學評定；掌握一些精密儀器的工作原理和使用方法等。二、主要教學內(nèi)容1.動物營養(yǎng)實驗基礎藥品的規(guī)格、合理使用和管理；容量器的使用和校正；實驗室常用洗滌劑的配制；指示劑的配制；標準溶液的配制和標定。2.飼料樣品的采集與制備樣品的采集與制樣方法（采集樣品的目的要求，采集

2、方法原則，制備樣品方法等）；風干樣品的制備；主要內(nèi)容為制樣過程和方法；半干樣品的制備（附：初水分測定）；樣品的登記與保管。3.飼料營養(yǎng)成分分析飼料干物質(zhì)（水分）的測定；飼料粗灰分測定；飼料粗蛋白質(zhì)測定；飼料粗脂肪測定；飼料粗纖維測定；飼料無氮浸出物計算；飼料鈣測定；飼料總磷測定；飼料水溶性氯化物測定。4.消化、代謝試驗（串講或幻燈片演示）豬的消化實驗；雞代謝實驗；動物營養(yǎng)實驗方法簡介。5.精密儀器和貴重儀器的使用安捷倫6890N氣相色譜儀的熟悉與化學工作站的簡單操作、測熱儀的使用、紫外分光光度計等的演示。三、教學基本要求1.掌握動物營養(yǎng)與飼料分析必備的一般實驗室操作技能，概略養(yǎng)分分析法和某些純

3、養(yǎng)分測定法；了解飼養(yǎng)分析實驗室的要求及各實驗所需儀器，藥品的規(guī)格、數(shù)量等，能夠進行實驗用品計劃和建立新實驗室。2.消化代謝實驗。3.能根據(jù)文獻所提供的方法做出未做過的實驗；能編寫實驗指導書；能指導本、?？茖W生進行動物營養(yǎng)學和飼養(yǎng)學實驗.4.創(chuàng)新性設計實驗，對現(xiàn)有實驗方法有所改進。四、參考學時分配序號課程主要內(nèi)容學時分配第一講動物營養(yǎng)實驗基礎4第二講飼料樣品的采集與制備2第三講飼料營養(yǎng)成分分析26第四講消化、代謝試驗2第五講精密儀器和貴重儀器的使用2合 計36五、主要參考書目及文獻1飼料分析與飼料質(zhì)量檢測技術(shù)，楊勝主編，中國農(nóng)業(yè)大學出版社，1993。2實用飼料分析手冊，寧開桂編，中國農(nóng)業(yè)科技出版

4、社，1993。3畜禽營養(yǎng)與飼料學技能教程，宋金昌等編，中國農(nóng)業(yè)科技出版社，1999。4飼料生物學評定技術(shù)，中國飼料工業(yè)協(xié)會、中國農(nóng)業(yè)科學院飼料研究所編，中國農(nóng)業(yè)科技出版社，1996。5飼料質(zhì)量分析檢驗，夏玉宇、朱丹編，化學工業(yè)出版社，1994。6.7. http:/www.chinafeedd8. http:/www.feedt9. http:/www.china碩士研究生實驗的基本要求1、掌握的一般實驗室操作技能，概略養(yǎng)分分析法和某些純養(yǎng)分測定法；2、掌握消化代謝實驗；3、能根據(jù)文獻所提供的方法做出未做過的實驗；4、能編寫實驗指導書；5、能指導本、?？茖W生進行動物營養(yǎng)學和飼養(yǎng)學實驗；6、了解

5、飼養(yǎng)分析實驗室的要求及各實驗所需儀器，藥品的規(guī)格、數(shù)量等，能夠進行實驗用品計劃和建立新實驗室。實驗室規(guī)則和安全條例1、實驗前認真預習實驗指導，清楚實驗原理、方法及注意事項后，再進行操作；2、實驗中認真負責，嚴格按照操作規(guī)程進行；3、使用儀器，特別是精密儀器，必須先了解儀器性能，再進行使用；4、取用濃酸、濃堿和有毒藥品時，切記用吸量管吸取，以免吸入口中，同時要防止將濃酸、濃堿等腐蝕性藥品流到用具上，沾在皮膚上或灑在衣物上；如果不慎將大量酸流到桌上，可加適量的碳酸鈉溶液，直到不產(chǎn)生氣泡為止；如果大量的堿溶液流到桌上，可用適量的稀醋酸中和，然后用水沖洗桌子，再用抹布擦干凈；如果酸沾在皮膚上，要用較多

6、的水沖洗，再用35的碳酸氫鈉溶液洗滌；如果堿沾在皮膚上，也要用大量的水沖洗，再用硼酸溶液洗滌；如果眼睛里濺進了酸溶液，要立即用清水沖洗，再用2的碳酸氫鈉溶液洗；如果堿濺進了眼睛里，則用飽和硼酸水洗后再用水洗；若濃硫酸沾在皮膚上，不能用水洗，否則損傷嚴重。5、取用易燃藥品如乙醚、丙酮、石油醚、酒精等時，應遠離明火，以防著火；6、藥品用完后，應放回原處，不能任意改變原來的位置，節(jié)約使用藥品和水電；7、愛護實驗室儀器和設備，如有破損，應說明后補領(lǐng)；8、實驗完畢后應將儀器洗凈放在指定的地點，將實驗臺等清理干凈；9、保證實驗室清潔安靜，室內(nèi)不得吸煙和吃東西，殘渣和廢紙不能扔入自來水池內(nèi)，酸、堿等有腐蝕性

7、的廢液不得倒入銅制水管的磁盆內(nèi)，以防腐蝕；10、每次實驗結(jié)束后，檢查實驗室儀器、藥品、水、電、暖、門、窗等，保證絕對安全；11、中午、晚上加班時，要求至少兩個人在，不能只留下一個人；12、實驗過程中注意事項：記錄要用鋼筆（藍黑墨水或碳素筆），不能涂改，若寫錯，應在其上劃“-”，并在旁邊另寫出正確的值（或字），小數(shù)點后四位或兩位；樣品名稱要寫清楚，樣品、試劑、溶液隨時貼標簽、編號；計算時重量法取最低值；注意計算誤差；平行測定數(shù)目一般3個；平行測定的結(jié)果如何取舍，相對偏差的要求，一般是5。教學內(nèi)容第一章 動物營養(yǎng)實驗基礎一、藥品的規(guī)格、合理使用和管理1、規(guī)格（見表1；詳細的見附表3）表1 藥品的規(guī)

8、格等級1級2級3級4級符號G.RA.RC.PL.R純度級別優(yōu)級純分析純化學純實驗室用標簽顏色綠色紅色藍色藍色純度最高次之更次之最差用途精密分析基準物質(zhì)、分析一般定性、化學分析一般化學實驗另外還有光譜純試劑、生物試劑、指示劑、層析用試劑等，有各自的要求。2、合理使用一個實驗室內(nèi)同一種化學藥品應具備各種規(guī)格，以便按需使用，純度低的不能代替純度高的，否則影響實驗精度；如果可以使用純度低的，不用純度高的，節(jié)約實驗成本。另外，實驗室還需準備一些工業(yè)試劑，如配制洗液，干燥用硫酸，酒精燈用酒精等。3、保管1）化學藥品均應裝于蠟封口的玻璃瓶或塑料瓶中保存，遇光分解的物質(zhì)，應保存于棕色瓶中，放于暗室內(nèi)；2）固體

9、、液體、揮發(fā)性、易燃易爆試劑應分別放置，毒品應有專人專柜保管；3）化學藥品在藥品柜中要按一定的順序排列，以便取用、查找方便，最好按照英文字母順序排列；4）放置化學藥品的庫房應干燥、陰涼、無陽光直射。放置有揮發(fā)性試劑的庫房應特別注意通風良好，應有滅火設備。二、烘箱等加熱儀器的使用方法注意升溫的控制方法，應先將溫度定在需要溫度的80%左右，最初升溫會超溫，等溫度下降到暫定溫度并控溫，然后將溫控調(diào)到需要溫度，最好是分多次控溫后調(diào)到需要溫度。三、容量器的使用和校正（重復做兩次）目的：掌握容量器的使用和校正方法。主要有滴定管、移液管和容量瓶原理：稱量容量器中所容納水的重量，結(jié)合水的密度（表2）計算出容量

10、器的實際容積。表2 水的密度表溫度（）密度（g/L）溫度（）密度（g/L）溫度（）密度（g/L）10998.3917997.6524996.3811998.3218997.5125996.1712998.2319997.3426995.9313998.1420997.1827995.6914998.0421997.0028995.4415997.9322996.8029995.1816997.8023996.60幾個概念標準溫度：量器的容積與溫度有關(guān)，規(guī)定一個共同的溫度293K。標稱容量（293K）：量器上標出的標線和數(shù)字。量器的容量允差（293K）：允許存在的最大差值。校正要求：容、量器有一

11、定的允許偏差，如果偏差在允許偏差范圍內(nèi)，則不必校正。見表3和表4。表3 滴定管、移液管（量器）的允許偏差范圍表容積（mL）滴定管（mL）移液管（mL）50.010.01100.020.02250.030.04500.050.051000.100.08表4 容量瓶的允許偏差范圍表容積（mL）255010025050010002000允許偏差（mL）0.030.050.300.501、滴定管的使用和校正1）使用：準備、洗滌（內(nèi)壁不掛水珠）、涂油(滴定管活塞涂油的量要合適，活塞不能漏水，但也不能涂多。若出現(xiàn)凡士林堵塞管口，輕則用針通，重則用洗耳球吸放熱洗滌液的方法疏通，再洗至

12、純水后使用)、檢查是否漏水(練習純水自然流出，待液面降到10mL以上約5mm處，等30S后10S內(nèi)調(diào)整至10mL的操作)、讀數(shù)(準確)；（特別注意洗滌酸式滴定管時一定要從其下面放出洗液或水）活塞涂油時要注意：（1）活塞、活塞槽用軟紙擦干；（2）滴定管（包括活塞槽部分）平放在桌上；（3）凡士林量合適：在活塞的兩頭涂以少量，或在孔的兩邊沿圓周涂一薄層（不涂孔）；（4）活塞插入活塞槽后向同一方向轉(zhuǎn)動，直到全部透明，操作時滴定管平放在桌上；（5）涂凡士林合適后，套上橡皮筋或橡皮圈，防止活塞落地打碎?；钊僮鞣椒ǎ海?）左手的無名指、小指放在活塞下尖嘴管的左邊；（2）中指和食指拿活塞柄的兩端，大拇指邦忙

13、；（3）手腕稍向上抬（1）、（3）的操作使活塞小頭不與手掌接觸，避免頂松活塞而漏水；（4）轉(zhuǎn)動活塞時稍向里扣，避免活塞松動而漏水，但不能扣得過分，否則轉(zhuǎn)動困難?？刂萍右核俣龋嚎刂剖洲D(zhuǎn)動的程度和速度可控制加液速度準確讀數(shù)：（1）滴定管垂直：用右手大拇指、食指拿滴定管上部無刻度處，讓其自然下垂；（2）視線與彎面以最低點成水平；（3）讀至0.01mL(實際讀到0.05就可以的)。50mL滴定管的讀數(shù)可準確至( 0.1ml )（估讀到0.01ml）,滴定時,為使測量的相對誤差小于0.1%,滴定消耗體積須大于( 10ml )2）校正：在50mL滴定管中，裝滿蒸餾水并調(diào)節(jié)至刻度0處，放出一段水于已知重量的

14、鋁盒中，記錄讀數(shù)，稱重。再放出一段水于同一鋁盒中，再稱重，如此逐段放出和稱重，直到刻度50處為止。由各段水重除以實驗溫度時水的密度，就可以求出滴定管每一段的真實容積。以滴定管讀數(shù)為橫坐標，總校正值為縱坐標，將所得結(jié)果繪成曲線，便于查閱。見表5。 表5 記錄示例表滴定管讀數(shù)讀數(shù)容量（mL）瓶與水重（g）水重（g）真正容量（mL）校正值（mL）總校正值（mL）10.1010.1039.2810.0810.12+0.02+0.0220.079.9749.199.919.95-0.020.0030.1410.0759.2610.0710.10+0.03+0.0340.1710.0369.249.981

15、0.01-0.02+0.0150.009.8379.079.839.86+0.03+0.04校正曲線繪制（略）*注意：（1）分段校正滴定管時，滴定管每次放出的純水體積不一定是整數(shù)，但盡量接近于整數(shù)10.00mL，20.00mL；（2）讀數(shù)準確；（3）不能超過50.00mL*校正時，外壁不能有水。校正前擦凈外壁的水，校正中若手、外壁有水應擦凈。內(nèi)壁有水，對測定沒有影響。*旋開活塞任水自然流出，要待液面降到10mL以上約5mm處，關(guān)閉活塞等30S后，在10S內(nèi)調(diào)整至10mL（這是規(guī)定的滴定管等待時間，使殘留在內(nèi)壁上的水相等）。*若放水超過50mL，重新裝水至40mL，校正4050mL段*處理滴定管

16、下端的懸滴:（1）初讀前的懸滴去掉；（2）校正時，加10mL水的錐形瓶稱量后發(fā)現(xiàn)滴定管下端有懸滴，則靠在錐形瓶內(nèi)壁，繼續(xù)進行下一段的校正；（3）滴定管下端有懸滴，白瓷板上有少量水，則靠去懸滴，擦去白瓷板上的水，滴定管重新讀數(shù)記錄后，進行下一段的校正；（4）白瓷板上水多，這說明活塞漏水嚴重，滴定管須重新涂油，檢漏后再進行校正。2、移液管的使用和校正1）移液操作規(guī)范：特別注意液面的調(diào)節(jié)，（1）微松食指使液面緩緩下降，才能控制液面隨需而停；（2）眼晴視線與液面水平，液面最低點與刻線相切。溶液自然流出后，等待15S。2）校正：用移液管吸取蒸餾水至刻度處，放于已知重量的鋁盒中，稱重，計算真實容積，偏差如

17、果不在允許范圍內(nèi)，則需校正。例如：如果真實容積小于規(guī)定容積，說明刻度線偏下。貼方格紙于刻度上方，再裝水到一定位置（方格的格數(shù)），然后放出水，再稱重，計算容積，求出每一格所代表的水的容積，在規(guī)定容積的方格處標上記號。如果真實容積大于規(guī)定容積，說明刻度線偏上，相似的方法。3、容量瓶的校正直接稱量法：將要校正的容量瓶清洗、烘干，稱重；將室溫（室溫1小時以上）的蒸餾水注入容量瓶，定容，稱重；測定水溫，查該水溫下的密度，計算體積是否與容量瓶一致；若不一致，根據(jù)體積和密度在已知重量的容量瓶中秤水的質(zhì)量；在校正體積的液面（下）貼一圈紙條涂蠟，用針在紙條上劃圈，涂上氫氟酸，幾分鐘后洗去氫氟酸，除去紙條和石蠟，

18、就有新刻度；重復的做法，取平均值，算出體積，標允差。間接稱量法：取一只容量大于被檢量器的空容器，放在天平上進行空秤量平衡；準備檢定用的純水或蒸餾水，檢查水溫與室溫之差，應小于2 ；將檢定用的水注入被檢量器中，到達標定線后倒進空容器中進行稱量，得到純水的質(zhì)量值m0；用溫度計測量水溫t，參照規(guī)程附錄求其質(zhì)量值m 按公式式計算被檢量器在20時的實際容量。四、實驗室常用洗滌劑的配制1.鉻酸洗液15g研細的工業(yè)用重鉻酸鉀或重鉻酸鈉用水濕潤后，溶于500mL工業(yè)用濃硫酸中。保存在加塞的密封玻璃瓶中，可除去玻璃儀器的油污和有機物，可以反復使用（當顏色變綠時，說明被還原成三價鉻離子的硫酸根絡合物，表示已經(jīng)失效

19、，必須重新配制）。使用時要防止該洗滌液與有機溶劑接觸。2.堿醇洗液120g粗氫氧化鈉或氫氧化鉀溶于120mL水中，用酒精（燃燒用）沖到1000mL，混勻備用?？沙ビ椭愇酃浮Ｋ?、指示劑的配制（一般是有機溶劑配置，常用95%的酒精）1、0.1甲基紅乙醇指示劑0.1g甲基紅+100mL95乙醇。稱取0.2000g甲基紅；在瑪瑙研缽中研細，倒入一定量的酒精，研磨后，將上清液過濾到200mL容量瓶中，反復幾次，直到研缽中的甲基紅全部沖入容量瓶。注意：過濾是防止雜質(zhì)和沒有研細的顆粒進入，影響濃度，然后用酒精沖洗濾紙3次，最后定容。2、0.5溴甲酚綠乙醇指示劑0.5g溴甲酚綠+100mL95乙醇。配法同

20、“1”。3、0.05%甲基橙指示劑0.05g甲基橙溶于100mL蒸餾水中。配法同“1”。4、0.5%酚酞乙醇指示劑0.5g酚酞溶于100mL95乙醇。配法同“1”。五、標準溶液的配制1、配制1）直接法：溶質(zhì)為基準物質(zhì)在分析天平上準確稱取一定量的已經(jīng)干燥的基準物質(zhì)，溶于水，轉(zhuǎn)入已經(jīng)校正的容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻即可。*作為基準物質(zhì)的條件：純度在99.99以上；組成與化學式完全相符；穩(wěn)定性好，不易吸水，不易被空氣氧化等；物質(zhì)的量大，可以減少稱量誤差。*常用的基準物質(zhì)有（詳細的見附表1）：鄰苯二甲酸氫鉀、草酸鈉、硝酸銀。2）標定法很多物質(zhì)不符合基準物質(zhì)的條件，如濃鹽酸中的氯化氫很容易揮發(fā)；固體

21、氫氧化鈉很容易吸收空氣中的水分和二氧化碳；高錳酸鉀不易提純等。這些物質(zhì)不能直接配制標準溶液，可以使用標定法來配制，具體方法為:先用這些物質(zhì)配制成近似所需濃度的溶液，再用基準物質(zhì)標定其準確濃度。即準確稱取一定量的基準物質(zhì)，溶于水后用待標定的溶液滴定，至反應完全，根據(jù)所消耗的待標定溶液的體積和基準物質(zhì)的質(zhì)量，計算出待標定溶液的準確濃度。標定要同時作23個平行，取平均值。2、常用標準溶液 標準溶液要保留4位有效數(shù)字，要參與計算或保持嚴格的反應環(huán)境，因此配制濃度一定要準確，下面1）、2）是直接配制標定的，參與計算的就這樣配；有些標準溶液的濃度要求很嚴格，前面的方法幾乎達不到，因此要配制標定濃度大的標準

22、溶液，然后再稀釋到特定濃度，如3）、4）。1）0.02 mol/L鹽酸溶液：濃鹽酸的含量36%，比重1.18，分子量36.5，根據(jù)容量瓶的體積計算取樣配制粗溶液。再用碳酸鈉或碳酸氫鈉基準物質(zhì)標定，或者用堿標準溶液標定。2）0.05mol/L高錳酸鉀溶液：稱取高錳酸鉀約1.6g，溶于1000mL蒸餾水中，煮沸10分鐘，冷卻，靜置過夜，用玻璃絲過濾（最初的數(shù)滴廢棄），保存于棕色瓶中。標定時將分析純草酸鈉約10g，130烘1h后，放在硫酸干燥器中冷卻，準確稱取3份草酸鈉，每份重0.1g，放在兩個250mL的三角瓶中，各加入50mL蒸餾水，再加1：3的硫酸溶液10mL，加熱到7585，用配制的高錳酸鉀

23、溶液（酒精燈保溫）滴定至出現(xiàn)淡紅色，半分鐘不褪色為好，滴定完后，溶液溫度應該仍在60以上。同時做試劑空白實驗。注意：KMnO4溶液可用還原劑作基準物來標定。H2C2O4 .2H2O、Na2C2O4等都可用作基準物。其中草酸鈉不含結(jié)晶水，容易提純，是最常用的基準物質(zhì)。濃度的確定：配制0.05M的溶液，稱取1.6g（1摩爾是158.03g，反應中Mn由正7價轉(zhuǎn)變?yōu)檎?價，轉(zhuǎn)移5個電子，配制時計算高錳酸鉀的量=158.03*0.05/5=1.58g1.6g）溶于1000ml 水中，然后標定。標定的條件：溫度：在室溫下此反應的速度緩慢，因此應將溶液加熱至75-85；但溫度不宜過高，否則在酸性溶液中會使

24、部分H2C2O4發(fā)生分解。酸度：溶液保持足夠的酸度。一般在開始滴定時，溶液的酸度約為0.5-1mo1/L。滴定速度：滴定開始時，加入的第一滴KMnO4溶液褪色很慢，所以開始滴定時滴定速度要慢些，在KMnO4紅色沒有褪去以前，不要加入第二滴。等幾滴KMnO4溶液已起作用后，滴定速度就可以稍快些，但不能讓KMnO4溶液像流水似地流下去，否則加入的KMnO4溶液來不及與C2O42-反應，即在熱的酸性溶液中發(fā)生分解。應用示例：鈣的測定 Ca2+ + C2O42- = CaC2O4 (堿性) +酸 C2O42-2MnO4- + 5C2O42- + 16H+ 2Mn2+ + 10CO2 + 8H2O3）0

25、.1275mol/L（1.25%的酸）硫酸溶液（測定樣品中粗纖維）：理論值是7mL濃硫酸稀釋至1000（濃硫酸加入水中，切忌相反）；也可以先配成濃的硫酸溶液再稀釋成所需濃度，然后再標定。用已經(jīng)標定好的氫氧化鈉溶液標定，指示劑為甲基紅，當溶液由黃色變成橙紅色即為終點。但實際很難配制到要求的濃度，只能先配制濃度高的硫酸標準溶液（如2或3M）,標定后再稀釋要求濃度的稀標準溶液。3）0.313mol/L（1.25%的堿）氫氧化鈉溶液（測定樣品中粗纖維）：首先粗配濃度高的氫氧化鈉溶液（如3M）。然后根據(jù)溶液的大致濃度確定稱量（滴定是20-30 mL）鄰苯二甲酸氫鉀（先在100105烘1小時，干燥器中冷卻

26、30分鐘），加入蒸餾水100mL，用酚酞作指示劑，用氫氧化鈉溶液滴定，當無色變?yōu)榈t色即為終點，計算其標準濃度。再稀釋成需要濃度。3、標準溶液配制、標定及使用注意事項* 酸標準溶液和堿標準溶液的配制和標定必須在無酸氣和無氨氣的環(huán)境中進行；* 盛酸標準溶液的玻璃瓶用嚴密玻璃塞塞好，盛堿標準溶液的玻璃瓶用橡皮塞塞好，高錳酸鉀標準溶液需裝于棕色玻璃瓶中，保存于不見光的柜中；* 標準溶液必須放置于陰涼而空氣清潔的實驗室；* 標準溶液取用前，必須使勁將瓶中的溶液搖勻。使瓶頸上的水汽與溶液混勻；* 標準溶液倒出后，切勿倒回原瓶；* 盛標準溶液的玻璃瓶上必須貼上標簽，寫明標準溶液的名稱、濃度、標定日期以及標

27、定者姓名；* 標定過程中加入的指示劑量，不能超過必需之量，以保證有一鮮明變色；* 標準溶液的有效日期：即標定過的標準溶液過一定時間后需重新標定。幾種標準溶液的有效日期如下： 各種酸溶液（各種濃度）：3個月 氫氧化鈉溶液（各種濃度）：2個月 高錳酸鉀溶液（0.05mol/L）：1個月硝酸銀溶液（0.10mol/L）：3個月* 標定時，基準物質(zhì)的取量應依據(jù)最后的滴定量所決定。一般最后的滴定量在20mL30mL之間為宜，則基準物質(zhì)的取量（g）25*C待標定溶液*MB（基準物質(zhì)的毫物質(zhì)的量）標定酸堿的基準物質(zhì)見附表1。第二章 飼料樣品的采集與制備一、樣品的采集1、目的樣品的采集與制備是評定飼料營養(yǎng)價值

28、關(guān)鍵的第一步驟，采樣比分析更為重要。采樣的目的就是使樣品具有代表性。2、要求1)具有足夠的代表性 樣品的代表性直接影響分析結(jié)果的正確性，由生產(chǎn)現(xiàn)場和試驗場等大量的分析對象中采集的部分樣品，其組成成分必須能代表整個分析對象的平均組分，如果樣品不能代表整批分析物料，那么無論分析多少個樣品的數(shù)據(jù)，其意義都不大。2)分類采樣 評定飼料營養(yǎng)價值需采集的樣品較多，有來自飼料原料，配合飼料，畜禽糞尿，畜產(chǎn)品，微生物等方面。因分析的目的不同又可分為不同樣品，分析對象的均勻性質(zhì)不同，也應分類采樣。3)保證樣品的穩(wěn)定性 分析前樣品的前處理操作，應保持樣品的穩(wěn)定性。嚴防樣品變質(zhì)，水分含量的變化及強烈光照等影響。避免

29、樣品受蟲蛀，霉菌或細菌的污染，新鮮飼料的自身呼吸等影響。因此，采樣后應立即稱重，置于密閉的容器里或塑料袋中，并盡快測定干物質(zhì)和水分含量。4)均勻性 樣品要保證性質(zhì)均勻一致，以防部分損失，如，采集干草類飼料，應避免葉子的脫落。5)新鮮性 測定維生素、氨基酸的樣品應用新鮮樣，即鮮草是剛刈割采樣的；青貯飼料用剛出窖的；谷實糠麩類用未經(jīng)加工處理的樣品。6)時間性 在進行常規(guī)成分分析時，一般應在兩周之內(nèi)分析完畢。否則，樣品會因吸水或失水，霉變等影響分析結(jié)果。7)采樣記錄 采樣后要及時記錄樣品名稱、采樣地點、規(guī)格型號、批號、產(chǎn)地、采樣部位、采樣人、采樣日期、生產(chǎn)廠家名稱及詳細通訊地址等內(nèi)容。8)采樣人員

30、采樣人員責任性要強，業(yè)務熟練，能按照國家標準進行采樣，采樣人員要嚴格按操作程序進行采樣。9)采樣工具 采樣工具包括手動或自動，要正確地設計和安裝，制作工具的原料要耐磨損而且應是不易損壞的材料。3.樣品的分類1)按采樣、分析和檢驗過程分類 按照采樣、分析和檢驗過程通常將樣品分為以下三類：原始樣品：在生產(chǎn)現(xiàn)場如田間、牧地、倉庫、車間、青貯窖、試驗場等大量的分析對象中采集的樣本。數(shù)量一般不少于平均樣品的8 倍。平均樣品：從原始樣品中平均地分出一部分樣品，供實驗室全面地分析品質(zhì)之用的樣品。其數(shù)量一般不少于1.0 kg 。試驗樣品：從平均樣品中地分出一小部分樣品，供實驗室分析一項或某幾項品質(zhì)之用的樣品，

31、簡稱試樣亦稱分析樣品，其數(shù)量根據(jù)檢驗項目和分析方法而定。2)按樣品的不同用途分類 按照樣品的不同用途，在實踐中把各類樣品分類如下：核對樣品：是指把同一個樣品分為若干份樣品后，再分別送往各個實驗室分析測定，根據(jù)化驗結(jié)果的方差來核對某一測定方法的準確性?；旌蠘悠罚喊褋碜酝粋€批貨物（如一船、一車皮等）的多個樣品混合以后，用來定這批貨物的平均組成成分 。單一樣品：采自一小批貨物料的物品，用于分析該批物料的成分變異或混合均勻度等。平行樣品：將同一個樣品也分為二，分別送往兩個不同的實驗室進行分析測定。常用來比較兩個實驗室之間分析結(jié)果的差異。官方樣品：指有政府采取的樣品。常用于制定規(guī)格。商業(yè)樣品：是指由賣

32、方發(fā)貨時，一同送往買方的樣品。仲裁樣品：指由公正方采樣員采取的樣品，然后送往仲裁實驗室分析化驗，以有助于買賣雙方在商業(yè)貿(mào)易工作中達成協(xié)議。參考樣品：指具有特定性質(zhì)的樣本，在購買原料時可作參考比較，或用于鑒定成品與之有關(guān)的顏色、結(jié)構(gòu)、及其他表現(xiàn)特征上的區(qū)別。備用樣品：指在發(fā)貨后留下的樣品，供急需時備用。標準樣品：是由權(quán)威實驗室仔細分析化驗后的樣品。如再有其他實驗室急需分析化驗，可用標準樣品來校正或確定某一測定方法或某種樣品的準確性。化驗樣品：亦稱“工作樣品”，指送往化驗室或檢驗站分析的樣品。4.采樣的方法1)基本方法采樣的基本方法有兩種：幾何法和四分法。幾何法：是指把整個一堆物品看成一種有規(guī)則的

33、幾何形狀（立方體、圓柱體、圓錐體），取樣時首先把這個主體分為若干體積相等的問部分，從總樣部分中取出體積相等的樣品，這部分樣品稱為支樣，再把支樣混合，即得原始樣品。四分法：（1）散裝顆粒或粉狀飼料或原料的采樣倉裝按面積分區(qū)，按高度分層，每區(qū)不超過50平方米，分為5點。料層0.75米，取三層，上（1015）、中、下（20）料層0.75米，取二層，上、下園倉按高度分層，每層按倉直徑分內(nèi)（中心）、中（半徑的一半處）、外（距倉邊30）三圈。直徑8米，每層分別設1、4、8共13點采樣。（2）袋裝中小顆粒料如玉米、大麥抽樣的袋婁不少于總袋數(shù)的5%，粉狀飼料抽樣的袋數(shù)不少于3%，也可以根據(jù)計算得出。表2.1-

34、1 袋裝飼料采集方案飼料包裝單位取樣包裝單位（袋）10個以下每袋取樣1010010袋100以上10袋為基礎，每增加100個，多取3個包裝單位編織袋 內(nèi)襯塑料袋或紡織袋采用拆線法 粉料 顆粒料2)餅粕類大塊：1噸至少取5塊；小塊：10塊捶碎混合四分法500g。3)青、粗飼料（1）青貯將表面50的青貯料除去，通過四分法縮至5001000g。井型窖溝式窖（2）干草和秸稈至少5個部位采樣點，每點取200g左右，由于葉子易脫落，應盡量避免，將原始樣放在紙或塑料上剪成12cm長，充分混合取分析樣品300g，粉碎過篩，切不可隨意丟棄某部分。（3）牧草天然牧草：劃區(qū)分點采樣，每區(qū)取5點以上，每點1m2范圍，離

35、地面34割草，除去不可食部分，將原始樣品剪碎，混合取樣5001500g。草地及田間采樣示意圖栽培牧草：每點采1至數(shù)株、切碎后取樣分析。4)塊根、塊莖瓜果類各部位隨機抽取樣品15kg，按大、中、小分別稱重求出比例，按比例取5公斤水洗（不損傷外皮）拭去表面水每個塊根進行縱切為，直至適量的分析樣品（500g左右）。5)糟渣類采取多點分層取樣與顆?；蚍蹱铒暳舷嗤ǚ秩龑樱繉尤?10點），每點100g，水分含量高的樣品如豆腐渣、粉渣等要特別注意汁液的流失。將各點隨機抽取的樣品充分混合后，隨機取分析樣品約1500g，并將其制成風干樣。6)液體或半固體飼料（1）桶裝采樣表2.1-2 采樣方案樣品數(shù)量采樣數(shù)

36、量7桶以下不少于5桶10桶以下不少于7桶1050桶不少于10桶51100桶不少于15桶100桶以上不少于15%的總桶數(shù)采樣每桶應取3點，取樣前應混均。（2）散裝的采樣分三層，上層距液面4050，下層距池底4050處，三層采樣數(shù)的比例為1:3:1（臥式液池），車槽為1:8:1，采樣數(shù)量規(guī)定如下 ：表2.1-3 采樣方案樣品數(shù)量采樣數(shù)量500噸以下1.5kg50001000噸2.0kg1000噸4.0kg將原始樣品混合，分取1kg作為平均樣品備用。7)動物性飼料用采樣器分點采樣，或按照樣品的堆放形狀選幾何點采樣。五.樣品的制備樣品的制備是對采集到的樣品分取、粉碎、混合、裝瓶等過程。制樣的目的是保證

37、樣品的均勻性，二、樣品的制備制樣的目的：樣品的制備是對采集到的樣品分取、粉碎、混勻、裝瓶等過程。樣品制備的目的是保證樣品的均勻性。使得分析樣品時取任何部分都能代表被測組分的全部性質(zhì)，確保分析結(jié)果的準確性。樣品制備時注意不應造成待測成分的損失或污染，不應帶來干擾物質(zhì)。制樣的儀器設備：粉碎機、碾槽、研缽、篩子等。 風干樣品的制備：主要內(nèi)容為制樣過程和方法。風干法（沒有烘箱或樣品太大時）：采樣后先稱重，然后陰干（薄層，防止發(fā)霉），直至重量不變時稱重。 半干樣品的制備（初水分測定）*烘干不回潮法：在洗凈、烘干并已知重量的磁盤中稱200g300g的鮮樣，放入100130的烘箱中烘15分鐘滅酶（防止酶分解

38、），然后迅速將磁盤轉(zhuǎn)移到6070烘箱中烘812小時，在室溫下冷卻30分鐘，稱重，再烘2小時，稱重，直至恒重（0.5g）。*烘干回潮法：在洗凈、烘干并已知重量的磁盤中稱200g300g的鮮樣，放入100130的烘箱中烘15分鐘滅酶（防止酶分解），然后迅速將磁盤轉(zhuǎn)移到6070烘箱中烘812小時后，放于室內(nèi)24小時，充分回潮后，再稱重，再放入6070烘箱中烘2小時，充分回潮后，再稱重，直至恒重（0.5g）。 樣品的粉碎粒度：常規(guī)飼料營養(yǎng)成分分析要求過40目篩（0.45mm），但粗纖維除外，粗纖維GB/T6434-94要求過18目篩（1mm）。三、樣品的登記與保管樣品的來源、采集時間等等。第三章 飼料

39、營養(yǎng)成分分析一、飼料干物質(zhì)（水分）的測定原理：樣品在105烘干，烘掉吸附水，其原因是非游離的水分在100以下不能烘干。半干（風干）樣品干物質(zhì)吸附水100105但是象水果和糖類等含糖多的樣品不宜在105烘，因糖在高溫時容易分解，尤其是果糖。所以測定含糖多的樣品時都采用減壓低溫烘箱干燥法，用烘干法測定的水分中還包括有少量芳香油、醇及有機酸等物質(zhì)。步驟：盛樣器的處理：（鋁盒）洗凈，在105烘箱中烘1h，干燥冷卻30，稱重。稱樣：在已經(jīng)恒重的盛樣器（鋁盒）中準確稱取2g左右（準確至第四位小數(shù)點后）樣品，放入105烘箱中烘56h，干燥冷卻30，稱重，再恒重（稱后馬上放入105烘箱中再烘1h，干燥器中冷卻

40、30后稱重，兩次稱重的誤差在0.002g即為恒重，要是超出要求誤差，重復，直到恒重）。注意：不同樣品所需的時間和條件不同。如糧食可以在130烘1h，結(jié)果與105烘4h一樣；而鮮果和糖必須在50100mm汞柱的減壓烘箱內(nèi)干燥。測定粘稠品，如蜂蜜、油脂等的水分時，可以采用1：1鹽酸浸后洗凈的大粒砂子摻入樣品中，并用玻璃棒在烘干的時候時常攪拌，才能得到好的結(jié)果。用減壓低溫測定水分的時間比空氣烘箱烘的時間長，一般第一次都在10h以上。平行樣品的測定值相差不得超過0.2，否則應重做。二、飼料樣品中粗灰分測定原理：待測樣品在550600高溫條件下有機物灼燒掉，剩下的為無機物，主要是氧化物和鹽類還有砂石等雜

41、質(zhì)，稱粗灰分，如下圖。半干（風干）樣品粗灰分有機物550600步驟：坩堝的處理：將坩堝洗凈，在105的烘箱中烘干，然后在550600高溫爐中灼燒30分鐘，待高溫爐的溫度降到200后將坩堝取出，置于干燥器中冷卻30分鐘，稱重，直至恒重（0.001g）；樣品的處理過程：稱樣2g左右（準確至1/10000或0.0001 g）于已知重量的坩堝內(nèi)；炭化；在550600的高溫爐中灰化56小時；降溫；干燥器中冷卻30分鐘；稱量；恒重（恒重時，兩次的稱重誤差在0.001g）。注意：在坩堝上編寫號碼時用0.5的氯化鐵墨水溶液（0.5g FeCl36H2O溶于100ml藍色墨水中），編號經(jīng)灼燒后由藍變紅，成永久號

42、?；一瘯r間46小時，主要由坩堝中灰分的顏色決定，而不是固定的。應該全部為白色為好，如果是灰白色，則說明有碳質(zhì)，還須繼續(xù)灼燒；如果是紅色，說明含有鐵，如果是藍色，說明含有錳，不須再灼燒；灼燒溫度不得超過600，否則磷酸鹽會熔化，凝結(jié)為固形物，其中所含的碳粒不易氧化。溫度過高，鉀、氯等元素也能揮發(fā)，使所得的結(jié)果產(chǎn)生誤差。粗灰分含量在5以上時，允許相對偏差為1；在5以下時，允許相對偏差為5。三、飼料粗蛋白質(zhì)測定原理：飼料中的有機物在催化劑的作用下，用濃硫酸消化使其中的氮轉(zhuǎn)化為氨氣，并被濃硫酸接收轉(zhuǎn)化的硫酸銨。然后消化液在濃堿中反應放出氨氣被硼酸溶液接收，并轉(zhuǎn)化為四硼酸按，然后以甲基紅和溴甲酚綠為指示

43、劑，用鹽酸標準溶液滴定，根據(jù)鹽酸溶液的用量求出氮含量，再轉(zhuǎn)化為粗蛋白的量。步驟：消化：稱取0.50.8g（準確至0.0001g）樣品裝入消煮管中，然后加入按比例混合好的無水硫酸鈉和硫酸銅的混合物2.6g左右（無水硫酸鈉2.5g+硫酸銅0.13 g，約一牛角勺），玻璃珠兩粒，再加入濃硫酸10ml，將消煮管放在消煮爐上進行消化。開始時將溫度調(diào)到100左右，待泡沫停止產(chǎn)生以后，再將溫度調(diào)到300以上，直至消煮管中的液體澄清（消化時應經(jīng)常轉(zhuǎn)動消煮管）。消化完畢后，將消煮管冷卻，加入蒸餾水，轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，用蒸餾水沖洗消煮管數(shù)次，轉(zhuǎn)移到同一容量瓶中，定容，同時應做空白。蒸餾：在三角瓶中，加入1

44、0ml 1的硼酸溶液，再加入甲基紅和溴甲酚綠指示劑各一滴，將三角瓶置于冷凝管下，管口浸入硼酸溶液中。然后在反應室中加入40或50的氫氧化鈉溶液，蒸餾3分鐘，冷凝管口離開液面再繼續(xù)蒸餾1分鐘，蒸餾結(jié)束取下三角瓶時用蒸餾水沖洗冷凝管口外壁。滴定：用約0.02mol/L的鹽酸溶液滴定，記錄鹽酸的用量。樣品的取量，根據(jù)樣品中粗蛋白質(zhì)的含量（平均含量，查表可知）確定，見表6。 表6 飼料中蛋白測定時定容量、蒸餾量與鹽酸標準溶液用量的估計風干樣品中CP(%)樣品取量（g）消化液沖淡量（ml）蒸餾消化液取量（ml）滴定鹽酸預期量（ml）1100.5250200.44.410200.2250202.24.42

45、0400.2250102.24.440700.2500102.24.470900.2500102.94.0注：上表中的數(shù)據(jù)均按樣品取量0.5g,消化液稀釋量100ml，消化液取量10 ml，請倒換滴定是鹽酸的用量？催化劑及其作用：無水硫酸鈉（或無水硫酸鉀）的作用是提高濃硫酸的沸點，使消化效力提高，純硫酸的沸點是317；加入無水硫酸鈉（或無水硫酸鉀）后，沸點可增加到325341。硫酸銅為催化劑，并可在蒸餾時做堿性反應的指示劑。無水硫酸鈉（2.5g）和硫酸銅（0.13g），磨細，按比例混合； 濃硫酸；硼酸溶液（1）；氫氧化鈉溶液（40或50）；標準鹽酸溶液（0.02mol/L，1.67ml濃鹽酸加

46、蒸餾水至1000ml）。目前，更多的資料催化劑的添加量無水硫酸鈉由2.5g變?yōu)?g，硫酸銅由0.13 g增至0.4g，總量6.4g溶解到10ml硫酸中很容易燒干炸裂；但最早的資料用量更少，無水硫酸鈉0.3g，10%硫酸銅溶液2ml。硼酸溶液的體積要求不嚴格，也可以免用移液管量??；蒸餾所加堿量應比消化時所用的濃硫酸量多4倍，一般出現(xiàn)棕色為止，Cu2+在過量堿中的顏色；標準鹽酸溶液滴定時三角瓶中溶液變色應是藍色變?yōu)橥呋疑?；蒸餾時3分鐘后冷凝管口離開液面，目的是管口里面的液體在1分鐘內(nèi)流入三角瓶中，冷凝管口外壁再用蒸餾水沖洗；濃硫酸的量（1g糖、蛋白質(zhì)、脂肪各消耗濃硫酸7.3g、8.1g、17.8g

47、）；消化時若消煮管壁上有黑渣，待冷卻后用少量蒸餾水沖洗再繼續(xù)加熱，如果仍不能完全消化，則待冷卻后，再加入少量濃硫酸，繼續(xù)加熱，直至消煮管中溶液澄清，消化才完畢；蒸餾裝置中，加入氫氧化鈉溶液后，如果反應室中溶液的顏色沒有變成棕色，可能的原因是：消化時加入的濃硫酸量過大；加入的催化劑硫酸銅不夠，或硫酸銅和無水硫酸鈉的比例不合適，應補滴硫酸銅溶液數(shù)滴；粗蛋白質(zhì)含量在25以上時，允許相對偏差為1；粗蛋白質(zhì)含量在1025時，允許相對偏差為2；粗蛋白質(zhì)含量在10以下時，允許相對偏差為3。指示劑：溴甲酚綠+甲基紅酒紅色(酸色)綠色(堿色)pH=5.1時，甲基紅、橙色、溴甲酚綠兩者混合互補呈淺灰色，溴甲酚綠4

48、.0綠5.6藍甲基紅4.4橙6.2黃混合指示劑 酒紅5.1淺灰綠四、飼料粗脂肪測定原理：乙醚等有機溶劑可以溶解脂肪。飼料樣品中的脂肪、有機酸、磷脂、脂溶性維生素、葉綠素等脂溶性物質(zhì)經(jīng)浸提溶于乙醚后再分離，測得粗脂肪。方法：索氏浸提法（脂肪瓶增重法和脂肪包減重法）步驟：浸提管和脂肪瓶均洗凈，烘干，脂肪瓶恒重，浸提裝置準備好。將脫水樣品包脂肪包，長度不超過虹吸管的高度，放入浸提管中，加入適量乙醚浸泡數(shù)小時；然后再加乙醚（超過虹吸管高度，使之能回流到脂肪瓶中），在6075的水浴條件下浸提（開冷凝水，回流810/小時左右），直到浸提干凈（當浸提管中的乙醚流入脂肪瓶時，用干凈表面皿接最后一滴乙醚，等乙醚揮發(fā)完沒有痕跡）；取出樣品包，讓乙醚空回流一次，然后回收乙醚；最后取下脂肪瓶，外壁用蒸餾水沖洗并用濾紙擦拭干凈，烘至恒重（0.002g，先4h，然后1h）。注意：測定脂肪的樣品必須充分磨碎和烘干，因為顆粒大時，溶劑不易穿透；水分不烘干時，影響乙醚的沸點；1小時回流68次，總回流次數(shù)不能少于36次；乙醚的沸點是35，易燃燒，在提取時注意防止著火；包脂肪包時應將手洗凈；如果用含水的乙醚，則可能將樣品中的糖和無機物抽提出，造成誤差；處理無水乙醚的方法是，采用工業(yè)用無水硫酸鈉或無水石膏5