無菌試驗(yàn)操作指南

1、無菌試驗(yàn)操作指南（僅供內(nèi)部參考）注意：無菌試驗(yàn)安排在試產(chǎn)良好及檔案記錄完善的基礎(chǔ)上進(jìn)行目錄1. 定義42. 無菌試驗(yàn)的準(zhǔn)備4(1).生產(chǎn)加工區(qū)與灌裝區(qū)的清洗4(2).超高溫(UHT)殺菌設(shè)備與灌裝機(jī)的清洗檢查43.無菌試驗(yàn)協(xié)議的擬定5(1).雙方職責(zé)5(2).費(fèi)用5(3).時(shí)間安排5(4).產(chǎn)品5(5).輔助用品說明54.無菌試驗(yàn)操作步驟6(1).評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)6(2).操作參數(shù)與原料質(zhì)量6(3).中間產(chǎn)品質(zhì)量要求6(4).取樣方法6(5).無菌試驗(yàn)次數(shù)及取樣量7(6).評(píng)估方法7(7).壞包樣品的定義7(8).無菌試驗(yàn)記錄7(9).工廠接收標(biāo)準(zhǔn)7(10).低于接收標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果的處理7附錄1.灌裝間要求

2、8附錄2.生產(chǎn)用水與鍋爐用水質(zhì)量要求9附錄3.灌裝機(jī)用雙氧水質(zhì)量要求10附錄4.不同的AQL與可信度下的取樣說明11附錄5.灌裝機(jī)記錄表12附錄6.無菌試驗(yàn)記錄表13附錄7.無菌試驗(yàn)合格證書14注意：以下無菌試驗(yàn)必須至少有一位利樂包裝 （中國(guó)）有限公司的代表參加進(jìn)行。1. 定義調(diào)試即在銷售公司的主持下，對(duì)設(shè)備進(jìn)行初步運(yùn)轉(zhuǎn)，以確保設(shè)備滿足基本的設(shè)計(jì)意圖并可投 入商業(yè)運(yùn)作。設(shè)備適用于被考核的設(shè)備，如單個(gè)機(jī)器，部分生產(chǎn)線或整條生產(chǎn)線。 說明：設(shè)備由用戶界定。性能指標(biāo)特殊的功用性參數(shù)，表明設(shè)備理想的運(yùn)轉(zhuǎn)水平；有時(shí)已包含于利樂包裝與客戶間的協(xié)議 及相關(guān)條款中。工廠符合銷售公司性能指標(biāo)所規(guī)定的一條或幾條生

3、產(chǎn)線，甚至包括廠房。銷售公司向買方提供設(shè)備（銷售或租賃）或服務(wù)的，相關(guān)的利樂包裝或利樂拉伐銷售公司。買方設(shè)備買方或租賃方，或同時(shí)按交易條款申請(qǐng)技術(shù)服務(wù)的一方。灌裝機(jī)能提供紙盒成型，液態(tài)產(chǎn)品灌注（無菌或非無菌狀態(tài)）以及進(jìn)一步將其密閉的設(shè)備。無菌試驗(yàn)一系列檢測(cè)程序與條款，用以確認(rèn)設(shè)備已達(dá)到商業(yè)無菌生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)。無菌試驗(yàn)安排在設(shè)備 調(diào)試完成及設(shè)備投入商業(yè)生產(chǎn)之前進(jìn)行。2. 無菌試驗(yàn)前的準(zhǔn)備（1）.生產(chǎn)加工區(qū)與灌裝區(qū)的清洗生產(chǎn)加工區(qū)及灌裝區(qū)：從地面到天花板作徹底清洗，并進(jìn)行空氣降落試驗(yàn)以檢驗(yàn)無菌灌裝間衛(wèi)生狀況（附錄1中列出了灌裝間的基本要求及空氣降落試驗(yàn)方法 ）。（2）.超高溫（UHT）殺菌設(shè)備與灌裝機(jī)的

4、清洗檢查在無菌試驗(yàn)之前,進(jìn)行兩次完整的 CIP。第一次 CIP主要是針對(duì)系統(tǒng)內(nèi)化學(xué)殘留物質(zhì)檢 查,具體方法是：在最后15分鐘的CIP清水沖洗階段,每隔2分鐘進(jìn)行一次電導(dǎo)率測(cè)試 （電導(dǎo)率測(cè)定儀量程為010s/cm_1. 5%）;最后取樣時(shí)間應(yīng)盡量靠近沖洗循環(huán)結(jié)束 階段。另外，在CIP后,還需檢查一些關(guān)鍵點(diǎn)處（如管道末端/彎管及保溫段）是否有沉淀 物。檢查結(jié)束后，進(jìn)行第二次CIP。3. 無菌試驗(yàn)協(xié)議無菌試驗(yàn)安排在試產(chǎn)完成后進(jìn)行。無菌試驗(yàn)用于考核整條生產(chǎn)線能否有效生產(chǎn)商業(yè)無菌產(chǎn)品。無菌試驗(yàn)由商家，加工設(shè)備/包裝機(jī)及其他生產(chǎn)設(shè)備供應(yīng)商共同參加進(jìn)行。在無菌試驗(yàn)之前，利樂包裝（中國(guó)）有限公司與客戶之間應(yīng)達(dá)

5、成統(tǒng)一協(xié)議并依照?qǐng)?zhí)行。（1）.雙方職責(zé)簽訂最終協(xié)議之前，應(yīng)就雙方職責(zé)達(dá)成協(xié)議；在評(píng)估過程中，雙方各委派一名代表處理相 關(guān)的事務(wù)。各方代表應(yīng)妥善處理所產(chǎn)生的分歧，若暫時(shí)未達(dá)成統(tǒng)一意見的，應(yīng)向雙方更高層人員匯報(bào)以協(xié)調(diào)解決。每次無菌試驗(yàn)結(jié)果以書面協(xié)議形式記載，并頒發(fā)合同設(shè)備 無菌試驗(yàn)”合格證書（見附錄7）,合格證書應(yīng)在評(píng)估結(jié)束后兩天內(nèi)，經(jīng)雙方代表簽字后頒發(fā)，證書一式四份，雙方各留 兩份。合格證書的簽發(fā)，表明客戶正式接收合同設(shè)備，并因此獨(dú)立承擔(dān)設(shè)備的保養(yǎng)、安 全、操作及維修工作。合格證書簽發(fā)之前，設(shè)備的操作使用權(quán)由利樂包裝（中國(guó)）有限公司所有。若客戶將設(shè)備 投入商業(yè)運(yùn)作，合同設(shè)備被視為自動(dòng)交接！設(shè)備中

6、所存在的，不影響基本操作功用的外觀缺陷及故障，將不影響合格證書簽發(fā)，但利 樂包裝（中國(guó)）有限公司應(yīng)加以備注說明，并立即予以補(bǔ)救；倘若，由于客戶的原因使機(jī)器達(dá)不到應(yīng)有的性能，利樂包裝 （中國(guó)）有限公司將向客戶提出改進(jìn)方案，在這種情況 下，客戶應(yīng)簽收合格證書。費(fèi)用無菌試驗(yàn)過程中，技術(shù)工程服務(wù)費(fèi)用由利樂包裝（中國(guó)）有限公司承擔(dān)；其余由客戶承擔(dān)， 包括（不僅限于）原材料、包材，生產(chǎn)輔助供應(yīng)如水、電、氣及壓縮空氣、實(shí)驗(yàn)設(shè)施、 人員配備等。.時(shí)間安排無菌試驗(yàn)時(shí)間應(yīng)在最終合同簽訂前，由雙方共同確定。利樂包裝（中國(guó)）有限公司將提前通知客戶無菌試驗(yàn)時(shí)間，時(shí)間一經(jīng)確定，雙方務(wù)必遵守。通常無菌試驗(yàn)安排在設(shè)備調(diào)試成

7、功后15天內(nèi)進(jìn)行;無菌試驗(yàn)所需的一切條件應(yīng)在評(píng)估前準(zhǔn)備就緒；無菌試驗(yàn)應(yīng)在20天內(nèi) 完成。如果無菌試驗(yàn)失敗，則相應(yīng)增加天數(shù)。.產(chǎn)品液態(tài)產(chǎn)品可以分成高酸產(chǎn)品(pH 4. 5)和低酸產(chǎn)品(pH_4. 5)兩類；為了保證產(chǎn)品商 業(yè)無菌，用于無菌試驗(yàn)的產(chǎn)品應(yīng)與商業(yè)銷售產(chǎn)品一致；如果同一生產(chǎn)線將生產(chǎn)高酸與低 酸兩類產(chǎn)品，無菌試驗(yàn)時(shí)優(yōu)先使用低酸產(chǎn)品。(5).輔助用品說明生產(chǎn)用水與鍋爐用水質(zhì)量要求見附錄2雙氧水質(zhì)量要求見附錄3。4. 無菌試驗(yàn)操作步驟無菌試驗(yàn)只適用于整條生產(chǎn)線檢查，不適用于生產(chǎn)線局部檢查；當(dāng)在無菌試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)上達(dá) 成統(tǒng)一協(xié)議后，不僅要注意設(shè)備操作及整體安裝的環(huán)境衛(wèi)生 ，而且要注意原料(配方組份)

8、與半成品的微生物質(zhì)量，因?yàn)檫@將影響所獲得的結(jié)果。無菌試驗(yàn)評(píng)估應(yīng)由利樂包裝(中國(guó))有限公司與客戶按以下內(nèi)容共同協(xié)商進(jìn)行(1).評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)無菌試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)通常用質(zhì)量接受水平 AQL表示,又稱為最大可接受壞包率。需要強(qiáng)調(diào)的是 壞包率不可能為O,AQL是食品生產(chǎn)商的一項(xiàng)總體質(zhì)量方針，應(yīng)當(dāng)由客戶自己確定。文中 所列條件基于AQL1:1000,文末附錄4列出了其它AQL值及相關(guān)要求。不論所制定的AQLfi是多少,應(yīng)注意：壞包率與可信度密切相關(guān)，壞包率只表示在某段時(shí)間內(nèi)，特定的現(xiàn)存條件下，所達(dá)到的結(jié)果，與該生產(chǎn)線在其它 時(shí)段、其它條件下所獲得的結(jié)果沒有可比性。(2) .操作參數(shù)與原料質(zhì)量對(duì)于生產(chǎn)操作參數(shù)(如滅菌溫

9、度)及原料質(zhì)量說明，無法給出統(tǒng)一要求，因?yàn)楦鞴驹O(shè)計(jì) 及安裝形式各不相同；但對(duì)于具體情況，應(yīng)達(dá)成統(tǒng)一協(xié)議。(3) .中間產(chǎn)品質(zhì)量要求從微生物角度看,不論生產(chǎn)何類產(chǎn)品,要使最終產(chǎn)品AQL達(dá)到1:1000,其進(jìn)入超高溫 滅 菌機(jī)(UHT)之前的半成品應(yīng)滿足以下要求。10010芽抱總數(shù)(cfu/ml) 耐熱芽抱計(jì)數(shù)(cfu/ml)(4).取樣方法無菌試驗(yàn)階段，采用隨機(jī)取樣；同時(shí)應(yīng)進(jìn)行目的性取樣以用于故障排除；在評(píng)估無菌試 驗(yàn)結(jié)果時(shí)，應(yīng)剔除目的性取樣。不同情況下的目的性取樣及其取樣數(shù)量(推薦使用):2+2取樣數(shù)量縱封貼條發(fā)生變化前后2+2取樣 生產(chǎn)開始 替換包材連接前后灌裝機(jī)停機(jī) 生產(chǎn)結(jié)束（5）.無菌

10、試驗(yàn)次數(shù)及取樣量在即將開始無菌試驗(yàn)之前，應(yīng)就無菌試驗(yàn)等級(jí)與客戶達(dá)成協(xié)議。一般推薦，每臺(tái)灌裝機(jī) 在投入商業(yè)生產(chǎn)前，進(jìn)行三次無菌試驗(yàn)；最先兩次無菌試驗(yàn)安排在連續(xù)前兩天完成，停車 一天后，第四天進(jìn)行第三次無菌試驗(yàn)。每次試車后，安排一次完整的CIP,第三次試車前 需增加一次CIP。若在殺菌機(jī)與灌裝機(jī)之間裝有無菌罐，如果 50%勺產(chǎn)品直接從滅菌機(jī)進(jìn)入灌裝機(jī)，而另 外50滬品滅菌后進(jìn)入無菌罐，儲(chǔ)存 5小時(shí)后供進(jìn)一步無菌試驗(yàn)使用，并且無菌罐的密 封性及相關(guān)功能達(dá)不到要求，則其生產(chǎn)產(chǎn)品的壞包率將遠(yuǎn)高于前者。每次無菌試驗(yàn)使用的產(chǎn)品類型、等級(jí)、灌注體積及裝配應(yīng)統(tǒng)一；生產(chǎn)應(yīng)安排在類似的時(shí)段及在同樣的生產(chǎn)條件下進(jìn)行。

11、當(dāng)AQL為1:1000，可信度為90%寸,取樣數(shù)量為2300包。注意：如果用于無菌試驗(yàn)的灌裝機(jī)與其它灌裝機(jī)安裝在同一生產(chǎn)線上，則所有灌裝機(jī)產(chǎn)品閥的蒸汽屏障應(yīng)處于工作狀態(tài)。（6）.評(píng)估方法所有的樣品應(yīng)隨機(jī)獲得，低酸產(chǎn)品在3035 C下保溫7天，而高酸產(chǎn)品在20-25 C 下保溫10天，此后進(jìn)行以下評(píng)估：檢查所有外包裝，如脹包或其它感官缺陷對(duì)所有樣品進(jìn)行pH測(cè)定（除高酸產(chǎn)品外，pH計(jì)精度應(yīng)達(dá)到0.01）*對(duì)所有樣品進(jìn)行感官檢驗(yàn)測(cè)定（包括色質(zhì)/氣味/分層/結(jié)塊等）（7）.壞包樣品的定義產(chǎn)生以下情形的樣品，可視為微生物不合格可疑樣品：保溫試驗(yàn)后，樣品的期望pH值下降0.2（或以上），樣品的風(fēng)味或口感發(fā)

12、生變化，以及產(chǎn)生脹包及外觀缺陷。為了確認(rèn) 可疑樣品是否為微生物不合格，需進(jìn)一步進(jìn)行微生物檢驗(yàn)（如劃線試驗(yàn)）與包裝密閉性測(cè) 定；對(duì)于劃線試驗(yàn)，菌落數(shù)小于等于3個(gè)的,可忽略不計(jì)。污染菌的鑒別應(yīng)當(dāng)場(chǎng)進(jìn)行。機(jī)械損傷樣品不計(jì)入壞包數(shù)量(8) .無菌試驗(yàn)記錄無菌試驗(yàn)記錄應(yīng)在生產(chǎn)條件下進(jìn)行，包括使用對(duì)數(shù)方格表及曲線圖進(jìn)行記錄；將所有的 機(jī)器設(shè)定記錄下來(灌裝機(jī)記錄表見附錄 5)。所有樣品應(yīng)按時(shí)間編號(hào)，認(rèn)真記錄保溫試 驗(yàn)結(jié)果,報(bào)告格式見附錄6。(9) .工廠接收標(biāo)準(zhǔn)無菌試驗(yàn)工廠接收標(biāo)準(zhǔn)由客戶確定,主要為AQL與可信度。若規(guī)定 AQL1:1000/可信度 90%三次保溫試驗(yàn)的總壞包數(shù)量為 3包。(附錄4表2中列

13、出了其它相關(guān)的 AQL值/可 信度及接收標(biāo)準(zhǔn))(10) .低于接收標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果的處理在保溫試驗(yàn)之前，應(yīng)就對(duì)低于接收標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)果處理程序 ，與客戶達(dá)成統(tǒng)一意見。當(dāng)三次 保溫試驗(yàn)總壞包量超過 3包時(shí),應(yīng)對(duì)整條生產(chǎn)線進(jìn)行研究分析，并重復(fù)三次保溫試驗(yàn)，直 到達(dá)標(biāo)為止。附錄1灌裝間要求標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：01頒布日期：1/9/98版號(hào)：01頁數(shù)：1物理指標(biāo)空氣流速 正壓值 溫度 濕度換氣頻率0.2-0.3 m/s2-4 mm H2O15-30 C30-70 %10-15次/小時(shí)注意:灌裝間應(yīng)保持溫濕度恒定。衛(wèi)生條件空氣降落試驗(yàn)菌落計(jì)數(shù)不超過 30個(gè)?？諝饨德湓囼?yàn)方法：將營(yíng)養(yǎng)瓊脂倒入直徑9cm并經(jīng)過滅菌處理的培養(yǎng)皿中，放入

14、灌裝間, 打開培養(yǎng)皿暴露15分鐘；而后,放入35 - 2 C恒溫箱內(nèi)保溫兩天,取出計(jì)數(shù)。如果菌落計(jì)數(shù)結(jié)果大于30個(gè),表明灌裝間需要徹底清洗，并需要進(jìn)行特殊處理如改進(jìn)空 氣過濾系統(tǒng)，用紫外燈或乳酸消毒灌裝間。附錄2生產(chǎn)用水與鍋爐用水質(zhì)量要求標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：02頒布日期:1/9/98版號(hào)：01頁數(shù)：1理化指標(biāo)沉淀物,mg/L混濁度 氣味 口味 色度干物質(zhì),mg/L高錳酸鉀消耗，mg/L鈣鎂含量,mg/L 硬度（碳酸鈣計(jì),mg/L） 鐵，mg/L 錳,mg/L 銅,mg/L 鋁，mg/L 鋅,mg/L重碳酸鹽,mg/L氯化物,mg/L氰化物，mg/L 有毒物質(zhì)pH無無無無:1:51110oo O0000：0

15、.05 00.10801無7 - 8.5微生物指標(biāo)總菌數(shù),cfu/ml 大腸桿菌,cfu/100ml 凝膠細(xì)菌，cfu /ml10000無菌試驗(yàn)指南草案附錄3灌裝機(jī)用雙氧水（H2Q）質(zhì)量要求標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：03頒布日期：1/9/98版號(hào)：01頁數(shù)：1化學(xué)名質(zhì)量要求無菌級(jí)或食品級(jí)濃度35 % - 40% (重量比)外觀清晰無色的液體磷酸鹽 100 ppm磷 35 ppm氯(Cl) 1 ml/l砷(As) 1 mg/l鉛(Pb) 1 mg/l鐵(Fe) 0.1 mg/l銅(Cu) 1 mg/l重金屬如鉛 10 mg/l105 C時(shí)不揮發(fā)物 500 mg/lpH2 - 4附錄4不同的AQL與可信度下的取樣說

16、明標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：04頒布日期：1/9/98版號(hào)：01頁數(shù)：1表1.可信度,取樣量與AQL之間的關(guān)系(每次試驗(yàn)有1個(gè)壞包)可信度(%)二 一 一-_一 _一 一一999080706050aQL取樣量(1:1000)4600230017001400950740(1:2000)940048003400280019001480(1:3000)1410072005100420028502220(1:4000)1880096006800560038002960(1:5000)23500120008500700047503700(1:6000)282001440010200840057004440(1:7000)

17、329001680011900980066505180(1:8000)3760019200136001120076005920(1:9000)4230021600153001260085506660(1:10000)4600023000170001400095007400表2.不同可信度下，評(píng)估合格的生產(chǎn)線壞包數(shù)量可信度(%)999080每次試驗(yàn)取樣量(1:1000)4600680010000230040005400170031004400每次試驗(yàn)取樣量(1:5000)23500340005000012000200002700085001650022000每次試驗(yàn)取樣量(1:10000)460

18、0068000100000230004000054000170003100044000三次試驗(yàn)壞包總量369369369表3.半成品微生物指標(biāo)AQL1:10001:20001:30001:40001:50001:60001:70001:80001:90001:10000X指標(biāo)項(xiàng)目、TSC100503025201614121110TRSC10532211111TSC:芽抱總數(shù)，cfu/ml TRSC:耐熱芽抱計(jì)數(shù)，cfu/ml附錄5超高溫滅菌機(jī)記錄表標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：05頒布日期：25/9/2000版號(hào)：01頁數(shù)：2日期：產(chǎn)品名：容積：試車開始/結(jié)束時(shí)間：_時(shí)間項(xiàng)目實(shí)測(cè)值1.產(chǎn)品溫度（乜）平衡罐脫氣前均質(zhì)

19、前均質(zhì)后預(yù)熱保持（如90 C）滅菌保持（如137乜）灌裝2.介質(zhì)（水）溫度（乜）熱水蒸汽噴射前蒸汽噴射后加熱后溫度預(yù)熱段冷卻后3.壓力(bar)脫氣前壓力真空度均質(zhì)前滅菌保持段（137 t）灌裝壓力蒸汽噴射后蒸汽調(diào)節(jié)閥前均質(zhì)壓力4.其他熱水流量(L/H)產(chǎn)品流量(L/H)產(chǎn)品回流量(L/H)均質(zhì)機(jī)轉(zhuǎn)速(Hz)5. CIP執(zhí)行情況CIP 流量(L/H)堿液濃度()酸液濃度()停機(jī)記錄停機(jī)代碼停機(jī)時(shí)間開機(jī)時(shí)間停機(jī)原因附錄6灌裝機(jī)記錄表標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：06頒布日期：1/9/98版號(hào)：01頁數(shù)：1日期：產(chǎn)品名：容積：試車開始/結(jié)束時(shí)間：進(jìn)入車間包材量：合格包材量：項(xiàng)目實(shí)測(cè)值雙氧水濃度雙氧水液位雙氧水加熱水液位

20、蒸汽溫度預(yù)殺菌溫度雙氧水溫度氣刀”溫度殺菌空氣溫度夾爪冷卻水流量縱封溫度貼條附貼溫度縱封情況貼條附貼情況橫封情況易拉貼密封電導(dǎo)率檢驗(yàn)*染色檢驗(yàn)*體積（重量）包裝外形CIP執(zhí)行情況注：“ * ”為選項(xiàng)停機(jī)記錄停機(jī)代碼停機(jī)時(shí)間開機(jī)時(shí)間停機(jī)原因剔除產(chǎn)品數(shù)量附錄7無菌試驗(yàn)記錄表標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：07頒布日期：1/9/98版號(hào)：01頁數(shù)：1第一次無菌試驗(yàn)樣品數(shù)量包裝外觀產(chǎn)品色質(zhì)與氣味產(chǎn)品結(jié)構(gòu)pH第二次無菌試驗(yàn)樣品數(shù)量包裝外觀產(chǎn)品色質(zhì)與氣味產(chǎn)品結(jié)構(gòu)pH第二次無菌試驗(yàn)樣品數(shù)量包裝外觀產(chǎn)品色質(zhì)與氣味產(chǎn)品結(jié)構(gòu)pH附錄8ACCERTANCE CERTIFICATEFOR LINE PERFORMANCE EVULATIONProject and / or con tract:Purchaser:Seller:Secti ons of Pla nt ( if applicable)Description of the Performance Evaluation:Test /In specti on Period:Start Date:Completion date:Purchaser and Seller agree