高氧化還原電位酸性水的制備及在食用菌生產(chǎn)中殺菌試驗(yàn)初報(bào)

1、高氧化還原電位酸性水的制備及在食用菌生產(chǎn)中殺菌試驗(yàn)初報(bào)它用1lr高氧化還原電位酸性水的制備及在食用菌生產(chǎn)中殺菌試驗(yàn)初報(bào)張躍華何春雷冉超張嬌(1黑龍江省哈爾濱師范大學(xué)生命與環(huán)境資源學(xué)院生物學(xué)系,150036;2黑龍江省佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,佳木斯154007)摘要高氧化還原電位酸性水(EclW)是電解加有NaC1的蒸餾水時(shí),在陽極產(chǎn)生氧化還原電位(ORP)1.040V,pH2.0,有效氯含量<O.080g/L的水溶液.試驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)水中NaC1的含量為15.0g/L.電解10rain后,水溶液中ORP隨時(shí)間升高,陽極區(qū)溶液的pH值隨時(shí)間延長而降低.水溶液殺菌試驗(yàn)表明,在2O下,ORP為

2、1.000V的電解水溶液,對綠色木霉,匍枝根霉,黑曲霉,酵母作用40rain.殺滅率達(dá)100%.其殺菌效果隨pH值降低,ORP升高,溫度上升而增強(qiáng),因有機(jī)物存在而減弱,溫度升高,振搖及鐵等金屬離子存在時(shí)其分解速度加快.高濃度EOW溶液對金屬有腐蝕性,對皮膚有刺激性.可應(yīng)用于食用菌生產(chǎn)中空間及生產(chǎn)環(huán)境消毒.關(guān)健調(diào)高氧化還原電位酸性水殺菌匍枝根霉黑曲霉酵母穩(wěn)定性文章編號10008357(2006)02005202多年來,我國基層農(nóng)戶在食用菌生產(chǎn)過程中對病蟲害偏重于化學(xué)農(nóng)藥防治,某些有機(jī)合成農(nóng)藥如多菌靈,氯氰菊酯,甲基托布津,三氯殺螨醇,代森錳鋅等農(nóng)藥濫用普遍,成為我國菌類產(chǎn)品出口的致命弱點(diǎn).越來越

3、重視食品安全的國際消費(fèi)潮流.將會(huì)對我國的菌類出口形成新的阻礙,同時(shí).農(nóng)藥超標(biāo)也嚴(yán)重影響本國公眾的健康.因而對我國的食用菌病蟲害防治工作提出了新要求.食用菌在生產(chǎn)過程中,需要有效的手段及簡便易行的方法減少有害微生物造成的損失.在實(shí)踐中.多采取藥物熏燕,噴灑等方法.由于現(xiàn)有的消毒劑普遍存在如刺激性強(qiáng),殘留等弊端,致使使用具有局限性.尤其是人們對環(huán)境保護(hù)及藥物殘留等問題愈加關(guān)注.亟需對環(huán)境友好,無殘留,使用方便且價(jià)格低廉的殺菌消毒劑.高氧化還原電位酸性水又稱強(qiáng)氧化電位水(ElectrolyzedoxidizingWater.簡稱EOW),是將含質(zhì)量濃度15.0L的NaCI水溶液注入嵌有隔膜的電解槽中

4、,電解成具有氧化還原電位(oRP)1.040V,pH.2.0的消毒液,其主要成分為二氧化氯,新生態(tài)氧,過氧化氫和次氯酸鈉等,均為有效的殺菌,消毒的水溶液,過氧化氫分解可產(chǎn)生活性氧及高能級活性氧的衍生物等自由基.De_mple等實(shí)驗(yàn)證明,過氧化氫分解產(chǎn)生的自由基可直接引起微生物DNA的缺損和3一磷酸基的斷裂J.Weites等實(shí)驗(yàn)表明,過氧化氫可使梭狀芽孢桿菌外殼的電子密度下降,并伴隨有腫脹現(xiàn)象導(dǎo)致皮質(zhì)缺損或完全消失b】.EOW作為殺菌消毒液特點(diǎn)是具有殺菌效果好,無毒副作用,無有害物殘留.其有快速而較強(qiáng)的殺滅微生物作用j,并且價(jià)格低廉,其水溶液可用于噴灑食用菌生產(chǎn)環(huán)境,生產(chǎn)工具,空間及物品的消毒.

5、一521材料與方法1.1供試材料1.I.1供試茵種糙皮側(cè)耳Ph06,香菇Lc135,以上菌種均引自福建農(nóng)大菌草研究中心,由黑龍江省佳木斯大學(xué)理學(xué)院生物系保藏.綠色木霉,匍枝根霉,黑曲霉,酵母,以上四種常見污染菌均分離自佳木斯市郊區(qū)四豐鄉(xiāng)食用菌示范基地.1.1.2pHS一3C型精密酸度計(jì)pH復(fù)合電極和ORP復(fù)合電極.上海精密科學(xué)儀器有限公司產(chǎn),分別測定高氧化還原電位酸性水消毒液的pH值和氧化還原電位值.1.1.3直流電源用DY一3電泳儀電源代用,北京六一儀器廠產(chǎn),可預(yù)先設(shè)置輸出電流值及電解時(shí)間;碳電極,不銹鋼電極板自制.1.14過氧乙酸配制隔夜后稀釋成濃度為5%,甲醛消毒液濃度5%所使用藥品均為

6、化學(xué)純試劑.1.1.5試驗(yàn)用培養(yǎng)基平板抑制試驗(yàn)用PDA培養(yǎng)基l:馬鈴薯20.0g,葡萄糖20.0g,瓊脂20.0g.水1000mL,pH自然.營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基l:用于空間微生物數(shù)量檢驗(yàn).配方為:牛肉膏3.0g,蛋白胨10.0g,NaC15.0g,瓊脂20.0g,加蒸餾水至l000mL,pH調(diào)至7.4,121C滅菌30min,傾注培養(yǎng)基平皿,冷卻待用.1.2試驗(yàn)方法1.2.1EOW消毒液的制備量取NaCI15.0g溶于盛有1000m餾水的有機(jī)玻璃電解槽中,將規(guī)格為1.Ocm1.Ocm10.Ocm的碳電極接直流電源的正極,直流電源負(fù)極接規(guī)格為0.2cm1.Ocm10.Ocm不銹鋼電極,放置于20cm

7、x15cmX10era有機(jī)玻璃電解槽中,使兩者間電極距離保持15cm.電解槽用石棉隔膜隔離成相等的兩部分.通電期間時(shí)常用2支玻璃棒分別攪拌電極區(qū)溶液,以使碳電極析出氣體最少.整個(gè)裝置置于通風(fēng)良好的空間.電解過程中記錄通電的時(shí)間,溫度,pH值和氧化還原電位值.1.2.2消毒液對四種常見雜茵的作用試驗(yàn)EOW對四種常見雜菌的作用采用抑菌圈試驗(yàn)法.方法見參考文獻(xiàn),將四種常見的污染菌配制成菌懸液或孢子液,涂敷于PDA培養(yǎng)基表面.在表面涂有菌液的平板中央貼附一個(gè)直徑為8mm的大小的無菌濾紙,向?yàn)V紙中央分別滴加0.30mL的l:10的FJ3W稀釋液,5%的過氧乙酸及5%的甲醛三種消毒液.對照采用等量的無菌蒸

8、餾水.30恒溫培養(yǎng)48h后.測定抑菌圈的直徑.各組試驗(yàn)均設(shè)3次重復(fù).1.2.3EOW消毒液的空問殺菌試驗(yàn)空間滅菌實(shí)驗(yàn)在秋季9月份進(jìn)行.參照文獻(xiàn)的方法,取EOW消毒液1:10的稀釋液30mL,5%過氧乙酸30mL,及5%甲醛30mL,無菌蒸餾水30mL為對照,對接種室進(jìn)行空間滅菌實(shí)驗(yàn),每種實(shí)驗(yàn)間隔ld.將消毒劑及對照分別噴施于12rn2的封閉門窗的接種室,1h后,實(shí)驗(yàn)人員從緩沖室進(jìn)入接種室并在室內(nèi)隨機(jī)放置l0套規(guī)格為9cm的傾注已滅菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿,并隨手打開.10min后,依次蓋好,做好標(biāo)記,送入28恒溫箱培養(yǎng),48h后觀察,記錄菌落數(shù)量.每個(gè)單項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,童用1-rEDIBLEF

9、UNG_I2006(2)均F放接種窄的門窗,強(qiáng)制通風(fēng)換氣后,間隔24h再進(jìn)行下一1,實(shí)驗(yàn),以此減少相臨實(shí)驗(yàn)過程中的相互影響.每個(gè)單項(xiàng)實(shí)驗(yàn)均做宅白對照.1.2.4EOW消毒液原液的儲(chǔ)存穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取20只500fr山清潔的試劑瓶,取其中5瓶用E0w消毒液原液充滿空間,密封并儲(chǔ)存在45的恒溫箱中,5瓶充滿消毒液原液用4冰箱儲(chǔ)存作對照;5瓶用EClW消毒液原液灌裝1/2空間,密封并置于溫度為45,轉(zhuǎn)速為60r/n的恒溫振蕩器中,5瓶用EOW消毒液原液灌裝1/2空間于45的恒溫箱儲(chǔ)存;測定各個(gè)樣品pH值及氧化還原電位值.2結(jié)果與分析2.1EOW消毒液制備過程中各項(xiàng)理化指標(biāo)的變化隨著電解時(shí)間的延續(xù),電解槽

10、中的碳正電極區(qū)域溶液的pH值逐漸降低,初始變化速度明顯,后漸慢,至40min后,逐漸穩(wěn)定至2.87.同時(shí).溶液的氧化還原電位隨時(shí)間逐漸由0.00V升至1.27V.同時(shí)電極區(qū)析出氣體量開始顯著增加,預(yù)示電解進(jìn)程結(jié)束.由于所使用電泳儀電源具有恒定輸出電流的功能,因而電解電流的變化較小.2.2E()w消毒液對四種常見雜菌的抑制試驗(yàn)對四種常見的微生物雜菌的抑制實(shí)驗(yàn)表明,EOW消毒液的殺菌效果與過氧乙酸及甲醛不分伯仲,結(jié)果見表l.裹1三種消毒劑殺菌效果對比(n1m)2.3EOW消毒液的空間殺菌試驗(yàn)效果三種滅菌方法效果見表2.根據(jù)奧姆烈斯基公式,計(jì)算空氣中微生物濃度為:c=麗50000N式中,C:lm3空

11、間中可檢測到的微生物個(gè)數(shù);A:水平放置的平面培養(yǎng)基暴露在空間的面積,單位:crn;T:平面培養(yǎng)基暴露的時(shí)間.單位:min;N:經(jīng)暴露設(shè)定時(shí)間后平皿培養(yǎng)基經(jīng)培養(yǎng)后目視可見菌落數(shù).單位:個(gè);50000:經(jīng)驗(yàn)常數(shù).裹2三種滅菌方法效果對比注:表內(nèi)數(shù)據(jù)為根據(jù)奢式折算的lm3茵落數(shù)(cfu/m3).試驗(yàn)結(jié)果表明,用EOW消毒液進(jìn)行空間滅菌結(jié)果接近生物無菌室的許用標(biāo)準(zhǔn)(177352個(gè)/),與其他兩種常規(guī)方法相比.沒有較大差異.實(shí)驗(yàn)室和農(nóng)戶生產(chǎn)表明,該方法使用粗放,費(fèi)用低廉,可以超量使用,且可以在接種休息間歇噴霧滅菌,無明顯刺激性氣味,易于推廣.2.4EOW原液的儲(chǔ)存穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)在10d的試驗(yàn)期間內(nèi),不同的儲(chǔ)

12、存條件下各類樣品pH值及氧化還原電位值ORP值均發(fā)生不同程度的變化,變化幅度在10%以內(nèi).在4種不同存放條件下瓶裝酸性氧化電位水的ORP值和有效氯均有不同程度的下降,而pH值有不同程度的上升(表3).但定量殺菌效果及生產(chǎn)實(shí)踐表明,五種保存處理方法對滅菌試驗(yàn)效果均明顯減弱,尤其以高溫,振搖對Eaw消毒液的分解更為明顯.同時(shí),生產(chǎn)實(shí)踐亦表明.水質(zhì)對EOW有效成分的分解有明顯促進(jìn)作用.表3不同存放條件對酸性氧化電位水的影響3討論3.1E0w與微生物接觸后釋放高活性過氧化自由基,進(jìn)而破壞生物膜的通透性,使蛋白質(zhì)變性,酶失活,DNA和RNA結(jié)構(gòu)斷裂.EOW分解后的產(chǎn)物為NaCI和水,對環(huán)境無任何有害殘留

13、,是環(huán)境友好產(chǎn)品.亦可用于直接同食品密切相接觸的消毒等操作,如水果,蔬菜的保鮮,農(nóng)產(chǎn)品加工前的預(yù)處理.3.2由于EOW在儲(chǔ)存過程中會(huì)分解,生產(chǎn)實(shí)踐表明其相關(guān)的因素有儲(chǔ)存溫度,水質(zhì),儲(chǔ)存用容器的材質(zhì),EOW的pH值,運(yùn)輸過程中的震蕩及容器是否充盈均有一定的關(guān)系.此外,水質(zhì)中無機(jī)離子的存在對E0W的穩(wěn)定有密切的關(guān)系.在農(nóng)戶生產(chǎn)實(shí)踐中,由于對水質(zhì)難以控制,可以通過推廣高效廉價(jià)的小型設(shè)備現(xiàn)場制作,就地使用的對策來解決.也可以同其他氧化性消毒劑協(xié)同作用來使用解決.3.3生產(chǎn)實(shí)踐表明,有機(jī)物的存在會(huì)消耗大量的EOW中的有效成分,使用中盡量清除有機(jī)物,欲清洗的物品要用清水充分浸洗后,再用EOW消毒液處理.E

14、OW對金屬工具有一定的腐蝕性,因此在使用過程中盡量避免金屬設(shè)備,器械接觸EOw原液,或接觸后用清水沖洗并晾干.3-4EOW為氧化性消毒劑,不可與甲醛類還原性消毒劑混合使用,在許多場合諸如畜禽養(yǎng)殖場,食品加工,倉庫,冷庫均可現(xiàn)場制作配制,且對水質(zhì)無嚴(yán)格要求.雖然EOW對使用環(huán)境的溫度,酸堿度較為敏感,但實(shí)踐表明可通過提高濃度,延長作用時(shí)間等方法予以補(bǔ)償.且EOW成本同其他消毒劑相比價(jià)格較為低廉.參考文獻(xiàn)1張文福.過氧化氫消毒研究進(jìn)展J.中國消毒學(xué)雜志,1992,(9)3:1792俞曉峰,涂瀛,劉萍.過氧化氫對白色念珠菌的超微結(jié)構(gòu)及酸性磷酸酶的影響J.消毒與滅菌,1987,(4)4:1833劉曾寧

15、,王光建.消毒劑生產(chǎn)及應(yīng)用M.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2003一一53食用1lrEDIBLE1JNGI第一講姬松茸的栽培技術(shù)(續(xù)前)郭倩(上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所,201106)文章編號1000r8357(2006)020054024栽培技術(shù)4.1培養(yǎng)料配方以11Im2所需培養(yǎng)料為例,參考配方如下:干稻草j500kg,干牛糞l200,麩皮或菜籽餅100kg,尿索18kg,石膏粉5Okg,過磷酸鈣5Okg,石灰25.干稻草750kg,雜木屑500kg,干牛糞500kg,麩皮或菜籽餅100kg,尿索l8kg,石膏粉50kg,過磷酸鈣25kg.石灰30kg.干稻草1500kg,干牛糞l200kg,

16、尿素l2kg,石膏粉35kg,石灰15kg.下稻草l300kg,雜木屑1000kg,過磷酸鈣l6,硫酸銨l6kg,尿素l6kg,石膏粉5()kg,石灰30kg稻草l800kg,菜籽餅65kg,硫酸銨15kg,復(fù)合肥bOkg,石灰4Okg,石膏粉40kg.4.2常規(guī)發(fā)酵料栽培方法4.2.1預(yù)濕在堆料前23d,把草切成45crn長,用1%石厭將草料充分預(yù)濕透,堆成大堆;在堆料前l(fā)d,將菜籽餅,尿素等輔料混勻,單獨(dú)預(yù)濕,建成小堆,掌握小堆的水分不宜過多4.2.2建堆和翻堆建堆時(shí)堆料的寬度要求1.52m,高度1.5m,長度視栽培面積而定,兒lm2的栽培面積一般8m左右長,在料堆的中央可以設(shè)地壟為通氣管

17、,預(yù)防料堆中心發(fā)臭,產(chǎn)生厭氧發(fā)酵.建堆般采取一層草一層糞,堆成1.52m寬,1.5m高的長方形料堆,最上層小堆的糞肥,頂部堆成龜背形,建堆后,料堆能流出少量液體為宜;當(dāng)料溫升高至70以上并開始下降時(shí),就可以進(jìn)行第1次翻堆,翻堆時(shí)將過磷酸鈣和復(fù)合肥拌勻后,均勻撒入,前發(fā)酵約12d,水分宜先濕后千,上面及四周覆蓋薄膜增溫,翻堆3-4次,時(shí)間間隔為4d,4d,3d,2d,每次翻堆后表面噴高效氯氰菊酯等殺蟲劑防治害蟲42.3后發(fā)酵后發(fā)酵可以提高培養(yǎng)料的選擇性和質(zhì)量,減少病蟲害的侵染,是姬松茸高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的關(guān)鍵.進(jìn)行后發(fā)酵前2d,應(yīng)將栽培房(棚)徹底清理和消毒,殺蟲,而后將培養(yǎng)料搬人堆放在中層床架上,緊閉門

18、窗,利用煤爐或通蒸汽加溫,使料溫升至6O以上,保持6-8h,巴氏滅菌.而后使培養(yǎng)料溫eeeee韭eeeeee坐e-le-,ale4壬翠文,鄭文娟,張福強(qiáng).過氧化氰溶液消毒效果的評價(jià)J.中華流行病學(xué)雜志,1993,(1O)4:2055陳天壽.微生物培養(yǎng)基的制造與應(yīng)用M.jE京:中國農(nóng)業(yè)出版社.1995.1315.6胡國慶,林軍明,夏舅.艤氧水隱形眼鏡消毒液殺菌性能和毒性的實(shí)驗(yàn)觀察J.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2000(10)4:4437張躍華,劉本書.食用菌生產(chǎn)中臭氧滅菌效果初報(bào)J.食用菌學(xué)撤,1997,(3)1:56-6154一度降至50-52,保持6-7d,要求料呈褐棕色,腐熟均勻.富有彈性,有較多

19、放線菌和腐殖霉,有甜面包香味,無酸臭和異味,含水量65%,pH7.0-7.5.后發(fā)酵結(jié)束后,局部打開門窗使之緩慢降溫,方法與雙孢蘑菇相同.當(dāng)料溫降至45以下時(shí).可以打開門窗,迅速使料溫降至30(2以下,然后.進(jìn)行翻格,分床勻料和平整料面,料厚l5-20em左右.4.2.4播種及覆土播種:一般采用混播方法.用種量麥粒種1.52瓶/rn2,草糞種34瓶.播種時(shí)先將2/3菌種撒播后用手指抖動(dòng)料層,使之落入料內(nèi),另1/3菌種用于封面.電可在床畦上先鋪I/3厚培養(yǎng)料,撒播1/2菌種,然后再鋪上2/3培養(yǎng)料,撒上1/2菌種封面播后用手或木板壓平實(shí).播種后3d內(nèi),應(yīng)關(guān)緊門窗,促進(jìn)料面菌種吃料,隨后,每天適當(dāng)通風(fēng)0.5h,控制料溫在3O以下,防止菇房悶濕.一般發(fā)菌15d即可覆士.覆土:覆土材料用紅黃壤或稻田深層上曬干,打碎與礱糠以7:l混合,覆土材料制法和消毒殺蟲處理方法與雙孢蘑菇相似,可參照進(jìn)行.覆土前pH調(diào)至7.0,含水量為6【)%,覆土厚35cm.覆土后的管理以通風(fēng)為主,嚴(yán)格控制噴水量,若土面過干,出現(xiàn)干裂或發(fā)白,可適當(dāng)噴水,以中下層土粒濕潤為宜.4.25栽培管理播種后4Od左右發(fā)菌培養(yǎng),菌絲發(fā)育粗壯,少量抓上層土,