本科畢業(yè)論文-分析化學(xué)-微流控芯片

1、本科畢業(yè)論文論文題目：微流控芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)過氧化氫的研究 學(xué)生姓名： 方娟 學(xué) 號(hào)： 200801020119 專 業(yè)： 應(yīng)用化學(xué) 指導(dǎo)教師： 李清嶺 學(xué) 院： 化學(xué)化工與材料科學(xué)學(xué)院 2012 年 5 月24 日畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）內(nèi)容介紹論文（設(shè)計(jì)）題 目微流控芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)過氧化氫的研究 選題時(shí)間2012.1.3完成時(shí)間2012.5.24論文（設(shè)計(jì)）字?jǐn)?shù)6150關(guān) 鍵 詞微流控芯片；芯片電泳；激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)；fs熒光探針；過氧化氫論文（設(shè)計(jì)）題目的來源、理論和實(shí)踐意義：論文題目的來源：自選。所運(yùn)用的理論：熒光探針識(shí)別；芯片電泳；電滲；激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)實(shí)踐意義：過氧化氫(

2、h2o2)是一種重要的活性氧自由基。研究表明：適當(dāng)水平的h2o2對(duì)生物正常的生理過程是重要的, h2o2的過量產(chǎn)生及積累將會(huì)導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生。因此,發(fā)展高靈敏、高選擇性檢測(cè)h2o2的方法對(duì)于探究h2o2水平與生物生理、病理的關(guān)聯(lián)，乃至疾病早期診治和新藥設(shè)計(jì)開發(fā)均具有重要的科學(xué)意義和潛在應(yīng)用價(jià)值。論文（設(shè)計(jì)）的主要內(nèi)容及創(chuàng)新點(diǎn)：由于h2o2催化磺酸酯水解，使得本身無熒光的二（對(duì)甲苯磺?；┒葻晒馑?(fs)去酯化反應(yīng)能夠生成具有強(qiáng)熒光的二氯熒光素?；谶@一反應(yīng)，采用新型熒光探針fs作熒光標(biāo)記試劑，以芯片電泳結(jié)合激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)為分析平臺(tái)，優(yōu)化了電泳分離的各種條件，建立了一種快速測(cè)定h2o2的

3、新方法。與已有方法相比，該實(shí)驗(yàn)方法具有試劑/試樣用量少、分析速度快、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，可為生物體系內(nèi)過氧化氫的測(cè)定奠定基礎(chǔ)。附：論文（設(shè)計(jì)）本人簽名： 2011 年 5 月 24 日目 錄中文摘要 1英文摘要 1一、引言 2二、實(shí)驗(yàn) 2（一）儀器及試劑 3（二）實(shí)驗(yàn)方法 4三、結(jié)果與討論 4（一）電泳分離條件的優(yōu)化 5 緩沖溶液、ph及其濃度的選擇 5 分離電壓的影響 5 甘露醇的影響 5 夾流進(jìn)樣參數(shù)的優(yōu)化 5（二）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的分析測(cè)定 6 芯片電泳流型的測(cè)定 6 線性范圍，重現(xiàn)性，檢測(cè)限的測(cè)定 7四、結(jié)論 7五、文獻(xiàn)檢索方法 7參考文獻(xiàn) 9微流控芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)過氧化氫的研究方 娟摘

4、要： 建立了一種微流控芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光法檢測(cè)過氧化氫的分析方法。該方法采用本實(shí)驗(yàn)室合成的熒光探針二（對(duì)甲苯磺酰基）二氯熒光素（fs）作為過氧化氫的標(biāo)記試劑，衍生反應(yīng)在37c下, 0.10 m hepes (ph 7.4) 緩沖溶液中進(jìn)行30 min時(shí)，衍生產(chǎn)物的相對(duì)熒光強(qiáng)度達(dá)到最大。優(yōu)化電泳條件下，以 ph 7.4，含20%甘露醇的40mm hepes緩沖溶液為芯片電泳緩沖體系，在玻璃基質(zhì)芯片上，55 s內(nèi)實(shí)現(xiàn)了進(jìn)樣、電泳分離和過氧化氫的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)。遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（rsd，n=6）分別為1.8%和3.7%。過氧化氫的濃度在0.50-50 m 范圍內(nèi)呈良好的線性，檢出限

5、(s/n = 3)為0.20 m (19.1 amol)。關(guān)鍵詞：微流控芯片；芯片電泳；激光誘導(dǎo)熒光；二二氯熒光素探針；過氧化氫determination of hydrogen peroxide by microchip electrophoresis with laser-induced fluorescencefangjuanabstract: a new method using microchip electrophoresis and laser-induced fluorescence detection was developed for the determination o

6、f hydrogen peroxide. bis(p-methylbenzenesulfonyl) dichlorofluorescein (fs), a new fluorogenic reagent synthesized by our laboratory was employed as a labeling reagent, the derivatization reaction was performed in 0.10 m hepes buffer (ph 7.4) for 30 min at 37c. the detection of hydrogen peroxide was

7、accomplished in 55 s, using a 40mm hepes buffer, 20% mannitol, ph 7.4, on a glass microchip. the rsds of migration time and peak area were 1.8% and 3.7%, respectively. method validation showed the linear response ranging from 0.50 to 50 m with a limit of detection (s/n = 3) of 0.20 m (19.1 amol).key

8、words: microfluidic chip; microchip electrophoresis; laser-induced fluorescence; fs; h2o21. 引言活性氧自由基（ros）, 如超氧陰離子自由基（o2- .）、過氧化氫（h2o2）、羥基自由基（ho）、脂自由基(roo)等，是生命活動(dòng)過程中具有代表性的重要自由基, 體內(nèi)活性氧自由基水平直接與生物的生理、病理相關(guān)1。研究表明： h2o2作為ros“家族”中一種重要的自由基，它在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中充當(dāng)?shù)诙攀沟纳斫巧?,3。在與過渡金屬離子結(jié)合后，h2o2會(huì)轉(zhuǎn)化成活性更高、毒性更大的羥基自由基，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化反應(yīng)

9、、dna損傷及其他的生物疾病。此外，h2o2的過量產(chǎn)生與積累還與各種疾病的發(fā)生有著密切的關(guān)系，如心臟血管失調(diào)、阿爾茨海默病及相關(guān)的神經(jīng)衰退疾病等2。目前, 已經(jīng)建立的過氧化氫測(cè)定方法,主要電子自旋共振法3、化學(xué)發(fā)光法4、電化學(xué)法5以及熒光法6。新穎熒光探針及其裝載方法的發(fā)展,共聚焦顯微術(shù)、掃描隧道顯微鏡等分析手段的進(jìn)步,使得熒光法靈敏度高、特異性好的特點(diǎn)在細(xì)胞過氧化氫檢測(cè)中表現(xiàn)出了一定的優(yōu)勢(shì)7。然而，由于過氧化氫自身的高活性、短壽命、低濃度，使得一些傳統(tǒng)的觀察與分析方法存在取樣體積大、質(zhì)量檢測(cè)限高、分析信號(hào)的獲得時(shí)間長(zhǎng)、分辨力低等不足。因此, 發(fā)展高靈敏、高選擇性檢測(cè)h2o2的方法，對(duì)于探究它

10、的生理和病理作用、乃至疾病早期診斷具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。自1990年瑞士科學(xué)家manz和widmer等首次提出微全分析系統(tǒng)(miniaturized total analysis systems, -tas)的概念。經(jīng)過20多年的發(fā)展，-tas已經(jīng)越來越顯示出其重要性。-tas發(fā)展的目標(biāo)是將生物化學(xué)、分析化學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域生化樣品的處理、進(jìn)樣、混合、反應(yīng)、分離、檢測(cè)等操作轉(zhuǎn)移到一個(gè)“微型化、集成化和便攜化”的微分析裝置上完成。像微流控芯片(micofluidic chips)、芯片實(shí)驗(yàn)室(1ab-on-chip, loc) 和生物芯片(biochips)都屬-tas的范疇。其中，微流控芯

11、片分析是以微機(jī)械加工、微流體驅(qū)動(dòng)/控制、檢測(cè)等技術(shù)為依托，以微通道網(wǎng)絡(luò)為結(jié)構(gòu)特征，以分析化學(xué)為基礎(chǔ)，以生命科學(xué)為目前主要應(yīng)用對(duì)象的重點(diǎn)發(fā)展領(lǐng)域12。它的終極目標(biāo)是把生物和化學(xué)等實(shí)驗(yàn)室的功能，包括采樣、樣品預(yù)處理、反應(yīng)、分離、檢測(cè)等集成在微芯片完成。微流控芯片電泳(mce)是微流控芯片分析的一個(gè)重要分支，具有許多優(yōu)點(diǎn)。例如，mce能夠使樣品與試劑消耗降低到納升級(jí)至皮升級(jí)，而且使分析速度成十倍、百倍地提高；同時(shí)多種功能單元集成于一個(gè)芯片向?qū)崿F(xiàn)維持一個(gè)閉合系統(tǒng)邁進(jìn)了一大步，從而可以實(shí)現(xiàn)完全的自動(dòng)化，減少污染、降低干擾和人為誤差。mce已成為近年來生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域微分離分析研究的熱點(diǎn) 8-10。

12、芯片電泳與高靈敏檢測(cè)器聯(lián)用，是實(shí)現(xiàn)活性分子定性定量檢測(cè)的有效手段11。迄今為止，用于芯片電泳的檢測(cè)器主要有激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器（lifd）、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(cld)、安培電化學(xué)檢測(cè)器(apecd) 和質(zhì)譜檢測(cè)器（msd）。相對(duì)而言，lifd作為目前微流控芯片適配檢測(cè)器中最靈敏的檢測(cè)技術(shù), 具有很高的選擇性和響應(yīng)的穩(wěn)定性, 它僅對(duì)產(chǎn)生熒光或被選擇性熒光標(biāo)記的分子產(chǎn)生響應(yīng), 能有效消除基質(zhì)成分的干擾。至此，本文以芯片電泳結(jié)合激光誘導(dǎo)熒光法檢測(cè)系統(tǒng)為分析平臺(tái)，以新型熒光探針fs標(biāo)記h2o2，通過對(duì)衍生化、進(jìn)樣、電泳分離等條件的系列優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，建立了一種能簡(jiǎn)單快速測(cè)定h2o2的分析新方法。2. 實(shí)驗(yàn)部分2

13、.1 儀器及試劑 2.1.1 儀器如圖fig.1所示，芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)系統(tǒng)為山東師范大學(xué)化學(xué)化工與材料科學(xué)學(xué)院自制。微流控芯片為玻璃基質(zhì)“十字”芯片，芯片的通道橫截面近似為長(zhǎng)方形，深度和寬度分別為70 m和25 m，檢測(cè)點(diǎn)距離芯片十字交叉口處為25 mm。四個(gè)儲(chǔ)液池的直徑為3.0 mm，深為1.5 mm。倒置熒光顯微鏡（德國(guó)徠卡）。figure 1.（a）微流控芯片結(jié)構(gòu)示意圖. s，樣品池；sw，樣品廢液池； b，緩沖液池；bw，緩沖廢液池; （b）芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)系統(tǒng). peps為通用可編程八電極輸出智能電源，lifd為芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器。 2.1.2 藥品及試劑fs

14、儲(chǔ)備液(5.0 m)，溶于dmso中，4 c 避光保存；過氧化氫酶儲(chǔ)備液(10 u/ml)，溶于0.10 m 磷酸鹽緩沖（ph 7.0)，4 保存；過氧化氫（h2o2）(1.0 mm)，用二次水稀釋市售30% h2o2，即用即配。硼砂、磷酸鹽及hepes緩沖溶液，分別用二次水溶解適量的na2b4o7, hepes, 及na2hpo4,用hcl或naoh調(diào)到所需ph。所用藥品及試劑均為分析純或色譜純。實(shí)驗(yàn)用水均為經(jīng)過milli-q 儀器(millipore, bedford, ma, usa)純化的二次水(18.2 cm)。fs是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部合成。hepes 購(gòu)于sigma公司(st. louis

15、, mo, usa)。所有溶液使用前，均要經(jīng)過0.22 m尼龍濾膜過濾。 2.1.3 h2o2的衍生化及樣品溶液制備在1.0 ml eppendorf 管中依次加入0.10 ml fs（2.5 mm, dmso溶液），0.20 ml hepes（0.10 m，ph = 7.4）緩沖溶液和0.10 ml h2o2（0.5 mm），二次水稀釋至刻度，混勻，37水浴反應(yīng)30分鐘，制的h2o2樣品的儲(chǔ)備液。用二次水將儲(chǔ)備液稀釋成一系列不同濃度的h2o2待測(cè)樣品 (濃度分別為0.50, 5.0, 10, 15, 20及50m)。2.2 實(shí)驗(yàn)方法芯片電泳前，依次用1.0 m naoh、二次水沖洗芯片通道1

16、0 min和5 min，再用運(yùn)行緩沖液清洗、浸泡10 min。將芯片置于激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器的工作平臺(tái)上, 任意選擇peps的4個(gè)電極插入對(duì)應(yīng)貯液池。緩沖液池b、緩沖廢液池bw、樣品廢液池sw中分別加入10 l 運(yùn)行緩沖溶液，樣品池s中加入10 l 樣品溶液。調(diào)節(jié)三維移動(dòng)平臺(tái),使激光束聚焦于芯片分離通道下游距離十字交叉口25 mm處。芯片電泳中，采用“夾流進(jìn)樣”模式。進(jìn)樣時(shí)，樣品廢液池接地，樣品池s施加300 v的電壓，緩沖池b及緩沖廢液池bw分別施加160 v和200 v的電壓，進(jìn)樣時(shí)間 為30 s 。 分離時(shí)，緩沖池b施加1800 v的電壓，樣品池s、樣品廢液池sw均施加1300 v的電壓，

17、緩沖廢液池bw接地。由peps控制每個(gè)液池的電壓自動(dòng)完成“夾流進(jìn)樣和電泳分離”操作，激光誘導(dǎo)熒光則對(duì)h2o2分離組分實(shí)時(shí)檢測(cè)。最后，同一濃度的h2o2樣品平行電泳分析三次。3. 結(jié)果與討論3.1 電泳條件的優(yōu)化 3.1.1 緩沖溶液種類、ph及其濃度的選擇 緩沖溶液的種類緩沖溶液直接影響離子的遷移和分離8，實(shí)驗(yàn)考察了磷酸鹽、硼砂及hepes三種同樣濃度和ph的緩沖溶液對(duì)電泳分離的影響。其中任意緩沖溶液作運(yùn)行緩沖溶液時(shí)，都能得到一個(gè)明顯的電泳峰。在相同濃度和ph值下hepes緩沖溶液產(chǎn)生的電滲流最小、基線最平穩(wěn)。所以本實(shí)驗(yàn)選擇了hepes 緩沖液作為運(yùn)行緩沖體系。 緩沖溶液的ph緩沖溶液的ph是

18、影響電泳分離和檢測(cè)的重要因素。緩沖溶液ph值一方面影響管壁性質(zhì)，另一方面又影響樣品的解離能力，進(jìn)而影響分子間的相互作用。緩沖溶液ph 值的調(diào)節(jié)與控制是優(yōu)化分離的重要對(duì)策9。ph能影響樣品的解離能力，樣品在極性強(qiáng)的介質(zhì)中離解度增大，電泳速度也隨之增大，從而影響分離選擇性和分離靈敏度30。由于在ph 7.4的hepes緩沖溶液中衍生時(shí)體系達(dá)到最佳熒光信號(hào)，所以本實(shí)驗(yàn)考察了緩沖溶液ph在7.2-8.0范圍內(nèi)對(duì)電泳遷移時(shí)間的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ph越大，樣品遷移時(shí)間越長(zhǎng)。在ph 7.4時(shí)，電泳峰的峰形最好，基線最平穩(wěn)。因此我們選擇7.4作為運(yùn)行緩沖溶液的酸度。 緩沖溶液的濃度緩沖溶液的濃度也是影響電泳分離和

19、檢測(cè)的重要因素。緩沖溶液的濃度直接影響到電泳介質(zhì)的離子強(qiáng)度，從而影響zeta電勢(shì)，而zeta電勢(shì)的變化又會(huì)影響到電滲流。緩沖液濃度對(duì)分析的影響實(shí)際上是緩沖液離子強(qiáng)度的影響?？疾炝嗽趐h 7.4時(shí)緩沖溶液的濃度在10-50 mm范圍對(duì)樣品峰高的影響。隨著緩沖濃度超過40 mm后，峰高開始呈下降趨勢(shì)。因此我們選擇40mm的hepes緩沖溶液。 3.1.2 分離電壓的影響分離電壓決定了電場(chǎng)強(qiáng)度的大小, 對(duì)電滲流和待測(cè)物質(zhì)的遷移速度影響很大, 是影響分離效果的重要因素之一10。本實(shí)驗(yàn)以40 mm hepes (ph 7.4)作為運(yùn)行緩沖溶液，考察了在1200-2000 v內(nèi)（電場(chǎng)強(qiáng)度240-400 v

20、/cm）分離電壓對(duì)理論塔板數(shù)和遷移時(shí)間的影響(fig. 2-5c)。增加電壓可以提高分離效果，縮短分離時(shí)間，但是隨著分離電壓的增加，產(chǎn)生了焦耳熱，進(jìn)而導(dǎo)致管內(nèi)電滲流增加和柱效降低。實(shí)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，最佳分離電壓為1800 v (360 v/cm) 。 3.1.3 甘露醇的影響甘露醇通常用作電泳運(yùn)行緩沖溶液添加劑，有利于樣品吸附的減少和分離效率的提高31。在本實(shí)驗(yàn)中，我們?cè)谶\(yùn)行緩沖溶液中加入甘露醇以抑制分析物在芯片通道表面的吸附?？疾炝司彌_溶液中添加10-50%(w/v)的甘露醇對(duì)峰高的影響。當(dāng)在緩沖溶液中添加20%甘露醇時(shí),體系的峰高最大且基線最平滑。因此本實(shí)驗(yàn)最終選擇20%的甘露醇添加到運(yùn)行緩沖溶液

21、中。熒光信號(hào)增強(qiáng)的可能原因是添加劑具有的多個(gè)羥基基團(tuán)，與樣品分析物殘留的羥基產(chǎn)生強(qiáng)的h鍵親和力，因而減弱了樣品與通道內(nèi)表面的相互作用。 3.1.4 夾流進(jìn)樣的參數(shù)優(yōu)化在本實(shí)驗(yàn)中采用了夾流進(jìn)樣的方法，夾流電壓和進(jìn)樣時(shí)間都是影響電泳分離的重要參數(shù)。施加夾流電壓是為避免進(jìn)樣時(shí)試樣向分離通道擴(kuò)散，引起試樣帶擴(kuò)張而影響分離效果。在進(jìn)樣時(shí)，緩沖溶液池b和緩沖廢液池bw分別施加160 v和200 v.在分離時(shí)，當(dāng)樣品池s和樣品廢液池sw均施加1200 v時(shí)達(dá)到最佳進(jìn)樣、分離流型 (fig. 2)。優(yōu)化的進(jìn)樣時(shí)間為30 s，當(dāng)進(jìn)樣時(shí)間達(dá)30 s后，樣品的信號(hào)不再增加，峰面積保持不變。 fig. 2倒置熒光顯微

22、鏡ccd記錄“夾流進(jìn)樣”的進(jìn)樣、分離流型圖上述實(shí)驗(yàn)得到過氧化氫樣品溶液芯片電泳分離的優(yōu)化條件如下表1所示。表1 過氧化氫樣品溶液的優(yōu)化電泳條件緩沖體系緩沖液ph值緩沖液濃度緩沖添加劑分離電壓進(jìn)樣時(shí)間hepes7.440 mmol/l20%的甘露醇1800v30s3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的分析測(cè)定 3.2.1 h2o2標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)定在上述優(yōu)化的電泳條件下，我們對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行了測(cè)定并得到芯片電泳譜圖如fig. 3。由于熒光標(biāo)記試劑fs本身無熒光，所以在芯片上電泳測(cè)定fs與h2o2的衍生物時(shí)，不需要對(duì)fs進(jìn)行電泳分離。figure 3. h2o2衍生產(chǎn)物的電泳譜圖。 電泳條件：含20%甘露醇的40mm h

23、epes 緩沖溶液（ph 7.4）； 分離電壓選擇在1800 v (360 v/cm)；進(jìn)樣時(shí)間 30 s。 3.2.2 線性范圍，重現(xiàn)性，檢出限的測(cè)定實(shí)驗(yàn)對(duì)線性范圍，重現(xiàn)性，檢測(cè)限進(jìn)行了測(cè)定。線性范圍是對(duì)0.50 m-50 m 范圍內(nèi)的h2o2標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行測(cè)定，以峰面積與濃度進(jìn)行線性回歸。衍生化的h2o2 (20 m)溶液六次平行進(jìn)樣得出遷移時(shí)間、峰面積的重現(xiàn)性，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.8%和3.7% (n = 6)。檢出限(lod)定義為當(dāng)信噪比為31 時(shí)對(duì)應(yīng)的分析物濃度。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)得的h2o2濃度檢測(cè)限為0.20 m。通過對(duì)進(jìn)樣分離過程中交叉口的樣品體積進(jìn)行顯微鏡(dm-il

24、, 萊卡, 德國(guó))觀察和ccd (dfc300fx, 萊卡, 德國(guó))成像33，測(cè)量得樣品區(qū)帶的體積為95.5 pl。因此質(zhì)量檢測(cè)限為19.1 amol。4. 結(jié)論基于實(shí)驗(yàn)室自行設(shè)計(jì)的芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)合熒光探針二（對(duì)甲苯磺?；┒葻晒馑豧s，建立了一種芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)過氧化氫的分析新方法。與傳統(tǒng)方法相比，本方法具有試劑/試樣用量少、分析速度快、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，可為生物體系內(nèi)過氧化氫的測(cè)定提供一種新途徑。5.文獻(xiàn)檢索方法文獻(xiàn)是用文字、圖形、符號(hào)、聲頻、視頻等技術(shù)手段記錄人類知識(shí)的一種載體。文獻(xiàn)檢索是科學(xué)研究工作中的一個(gè)重要步驟，它貫穿研究的全過程。文獻(xiàn)不僅為選題提供依據(jù)，選

25、題以后必須圍繞選題廣泛地查閱文獻(xiàn)資料，能否正確的掌握文獻(xiàn)檢索方法，關(guān)系到研究的過程、質(zhì)量以及能否出成果，因此必須掌握文獻(xiàn)檢索的技能。了解和掌握文獻(xiàn)的分類及其特點(diǎn)，是迅速有效地查找所需信息的必要前提。查找文獻(xiàn)的步驟即利用一般的檢索工具查找文獻(xiàn)資料的方法。一般有以下步驟：（1）分析研究課題，明確檢索要求弄清楚課題的性質(zhì)是什么，學(xué)科專業(yè)范圍是什么，所需的文獻(xiàn)類型，要求的文種、年代的限定、課題的關(guān)鍵詞等等是檢索的第一步。（2）選擇檢索工具根據(jù)檢索課題的要求，選擇最能滿足檢索要求的檢索工具書。首先必須對(duì)各種檢索工具所覆蓋的學(xué)科范圍有清楚的了解，然后從文獻(xiàn)的類型、文種、出版的時(shí)間等方面來考慮選用哪種檢索工

26、具最合適。除了考慮以上因素外，還需考慮文獻(xiàn)在本地區(qū)的收藏情況、檢索工具的索引是否適合本課題檢索的要求。（3）確定檢索方法選用具體的檢索工具后，就要考慮選擇哪種檢索方法，確定具體的檢索途徑，是從分類途徑還是從主題途徑檢索，所查找的文獻(xiàn)要達(dá)到什么要求，選用什么檢索詞等，以便具體進(jìn)行檢索。以下是介紹的幾種檢索方法：順序查找法：從課題研究的起始年代開始往后順時(shí)查找，直到近期為止，這種方法查全率高，但費(fèi)時(shí)。回溯查找法： 這是利用某一篇論文（或?qū)Ｖ┖竺嫠降膮⒖假Y料為線索，跟蹤追查的方法。這種查找方法在檢索工具不齊全，對(duì)課題不熟悉或不需做深入研究的情況下是可取的，是一種針對(duì)性更強(qiáng)、更直接、效率更高的文獻(xiàn)

27、查閱方法。但應(yīng)注意要查閱權(quán)威性的標(biāo)準(zhǔn)參考源。循環(huán)查找法：利用現(xiàn)有工具書查出這一段時(shí)間內(nèi)的一批文獻(xiàn)，再利用回溯查找法，查出沒有檢索工具的那一段時(shí)間的文獻(xiàn)方法。即期積累法：即從現(xiàn)刊中查找與自己課題有關(guān)的信息。計(jì)算機(jī)檢索：計(jì)算機(jī)以其強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理和存儲(chǔ)能力成為當(dāng)今最為理想的信息檢索工具。20世紀(jì)50年代末出現(xiàn)了最早的計(jì)算機(jī)信息檢索系統(tǒng)。隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的突飛猛進(jìn)，計(jì)算機(jī)信息檢索也迅速發(fā)展，如今已成為廣泛使用的信息檢索手段。檢索形式有光盤、internet 檢索等。實(shí)際課題的檢索選用哪一種方法，要根據(jù)具體情況而定。一是根據(jù)課題研究的需要，二是視所能利用的檢索工具和檢索手段。只有視條件的可能和課題的需要選

28、用相應(yīng)的檢索方法，才能迅速地獲得相關(guān)的文獻(xiàn)，完成課題檢索的任務(wù)。（4）使用檢索工具書確定了具體的檢索方法后，就要利用所用檢索工具的索引，在一定的年代范圍內(nèi)具體查找，以獲得文獻(xiàn)線索。手工檢索時(shí)可以一邊檢索一邊分析取舍，獲得符合需要的文獻(xiàn)。（5）獲取原文利用檢索工具獲得的文獻(xiàn)線索中，文獻(xiàn)來源（出處）往往是采用縮寫的方式，因此還必須把縮寫的文獻(xiàn)來源轉(zhuǎn)換成全稱，一般可通過檢索工具本身的附錄予以解決。另外還要識(shí)別著錄時(shí)所用的各種縮寫等等。檢索文獻(xiàn)最終要獲取原文，按照文獻(xiàn)來源的全稱，查找館藏目錄中查不到，則可利用各類聯(lián)合目錄獲得其他單位收藏的信息。這樣就完成了文獻(xiàn)檢索的全過程。在本文的完成過程中，查閱了豐

29、富的文獻(xiàn)資料，主要運(yùn)用了即期積累法和計(jì)算機(jī)檢索兩種重要的檢索方法，其中計(jì)算機(jī)檢索電子資源為文獻(xiàn)的察找提供了很大的方便。參考文獻(xiàn)1finkl t, holbrook n j. oxidative stress and the biology of ageing, nature., 2000, 6809: 239-247.2 inoue, s, kawanishi, s. hydroxyl radical production and human dna damage induced by ferric nitrilotriacetate and hydrogen peroxide j. canc

30、er res. 1987, 47: 6522-6527.3 margaret m t, david a w, matthew b g. methods for detection of reactive metabolites of oxygen and nitrogen: in vitro and in vivo considerations, am j physiol regulatory integrative comp physiol., 2004, 286: 431- 444.4 hu, y, zhang, z, yang c. the determination of hydrog

31、en peroxide generated from cigarette smoke with an ultrasensitive and highly selective chemiluminescence method j. anal. chim. acta. 2007, 601(1): 95-100.5 wang, p. h., ji, w., chang, y. q., electrochemical measurement of hydrogen peroxide in plasma: evaluation of freshwater prawn (macrobrachium ros

32、enbergii) and crucian carp (cyprinus carpio) phagocytes under natural conditions j. fish shell. immunol. 2007, 23 (6): 1231-1241.6 srikun, d, miller, e. w, domaille. d. w. et al. an ict-based approach to ratiometric fluorescence imaging of hydrogen peroxide produced in living cells j. j. am. chem. s

33、oc. 2008, 130: 4596-4597.7 xu k h, tang b, huang h, yang g w, chen z z and li p, an l g. “strong red fluorescent probes suitable for detecting hydrogen peroxide generated by mice peritoneal macrophages.” chem. commun., 2005, 48: 5 974-5 976.8 dittrich p s, tachikawa k, manz a. anal. chem., 2006, 78(

34、12): 388739089 方肇倫. 微流控分析芯片m. 北京: 科學(xué)出版社,2003. 1- 9.10 林炳承等. 微流控芯片實(shí)驗(yàn)室, 北京: 科學(xué)出版社, 2006, 1-22.11 gtz, s, karst, u. recent developments in optical detection methods for microchip separations j. anal. bioanal. chem. 2007, 387(1): 183-192.12 dolnk, v, liu, s, jovanovich, s. capillary electrophoresis on m

35、icrochip j.electrophoresis. 2000, 21: 41-54.致謝：感謝李清嶺老師的耐心指導(dǎo)和幫助。山東師范大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）題目審批表學(xué)院：化學(xué)化工與材料科學(xué)學(xué)院(章)系別/教研室：化學(xué)_時(shí)間：2011年1月5日課題情況題目名稱微流控芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)過氧化氫的研究課題性質(zhì)a基礎(chǔ)研究 b基礎(chǔ)應(yīng)用研究 c應(yīng)用研究教師姓名李清嶺職稱副教授學(xué)位課題來源a.科研 b.生產(chǎn) c.教學(xué) d.其它 e.學(xué)生自擬成果類別a.論文 b.設(shè)計(jì)主要研究?jī)?nèi)容與研究目標(biāo)主要研究?jī)?nèi)容：采用自制的芯片電泳/激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)系統(tǒng)，研究了玻璃芯片上檢測(cè)過氧化氫的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，初步建立了芯

36、片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)過氧化氫的分析方法。研究目標(biāo)：通過畢業(yè)論文論文設(shè)計(jì)，初步認(rèn)識(shí)科學(xué)研究的過程，提高文獻(xiàn)查閱、動(dòng)手操作、語言組織和論文寫作的能力。 指導(dǎo)教師（簽名）： 年 月 日選題學(xué)生（簽名）： 年 月 日系所或教研室審題意見負(fù)責(zé)人（簽名）: 年 月 日學(xué)院審批意見學(xué)院學(xué)位分委員會(huì)主任（簽名）: 年 月 日山東師范大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）開題報(bào)告論文題目：微流控芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光 檢測(cè)過氧化氫的研究 學(xué)院名稱： 化學(xué)化工與材料科學(xué)學(xué)院 專 業(yè)： 應(yīng)用化學(xué) 學(xué)生姓名： 方娟 學(xué) 號(hào)： 200801020119 指導(dǎo)教師： 李清嶺 2012年 3 月 13 日一、選題的性質(zhì) 基礎(chǔ)研究二、選題

37、的目的和意義 目的：熟悉芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)過氧化氫的分析方法。初步認(rèn)識(shí)科學(xué)研究的過程，提高文獻(xiàn)查閱、動(dòng)手操作、語言組織和論文寫作的能力。意義：探索一種快速方便的檢測(cè)過氧化氫的新方法三、與本課題相關(guān)的國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀，預(yù)計(jì)可能有所創(chuàng)新的方面 微流控芯片電泳因其具有高效、快速、低耗，且能將多種功能單元集成于一個(gè)芯片的特點(diǎn)，而成為近年來生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域微分析系統(tǒng)研究的重要平臺(tái)之一。本實(shí)驗(yàn)，采用芯片電泳結(jié)合激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)技術(shù)，基于緩沖溶液中h2o2的催化磺酸酯水解，使得本身無熒光的二（對(duì)甲苯磺?；┒葻晒馑?(fs)去酯化反應(yīng)能夠生成具有強(qiáng)熒光的二氯熒光素。研究建立了芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光

38、檢測(cè)過氧化氫的分析方法。力爭(zhēng)為生物體中過氧化氫的測(cè)定奠定基礎(chǔ)。四、課題研究的可行性分析具有芯片電泳/激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，所用藥品和試劑容易獲得。此外，這一課題的研究也具有科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。五、課題研究的策略、方法和步驟 本課題研究的策略為：通過相關(guān)文獻(xiàn)查閱,確認(rèn)實(shí)驗(yàn)操作過程、優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件、數(shù)據(jù)處理與分析,完成本論文寫作。具體實(shí)施方法和步驟如下：（1）查閱國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)資料；（2）結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)資料的查閱，明確實(shí)驗(yàn)操作的條件、過程和步驟； （3）進(jìn)行研究實(shí)驗(yàn)；(4) 數(shù)據(jù)處理，計(jì)算得出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和檢測(cè)限；（5）完成論文寫作。六、預(yù)期成果形式描述論文，達(dá)到學(xué)士學(xué)位論文要求。七、指導(dǎo)教師

39、意見指導(dǎo)教師（簽名）：年 月 日八、學(xué)院學(xué)位分委員會(huì)意見 學(xué)院學(xué)位分委員會(huì)主任（簽名）： 年 月 日山東師范大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）教師指導(dǎo)記錄表學(xué)院：化學(xué)化工與材料科學(xué)學(xué)院 系別：應(yīng)用化學(xué) 專業(yè)：應(yīng)用化學(xué)論文（設(shè)計(jì)）題目：微流控芯片電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)過氧化氫的研究學(xué)生姓名方娟學(xué)號(hào)200801020119指導(dǎo)教師李清嶺職稱副教授計(jì)劃完成時(shí)間：2012.05.24指導(dǎo)情況紀(jì)錄（含指導(dǎo)時(shí)間、指導(dǎo)內(nèi)容）1.2011年3月10日，文獻(xiàn)檢索方法介紹2. 2011年3月19日，講解文獻(xiàn)3. 2011年4月 6 日，實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 4. 2011年5月9日，指導(dǎo)論文書寫5. 2011年5月18日，修改論文6. 2011年5月23日，完善論文 指導(dǎo)教師（簽名）： 學(xué)生（簽名）：學(xué)院學(xué)位分委員會(huì)主任（簽名）： 年 月 日注：本科論文（設(shè)計(jì)）的指導(dǎo)應(yīng)不少于5次；表格空間