(完整版)[醫(yī)學(xué)]分子生物學(xué)習(xí)題集

1、分子生物學(xué)習(xí)題集劉小燭編第一部分 必做題第一章1、 用同位素標(biāo)記氨基酸和核苷酸，噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí) 驗(yàn)結(jié)論是什么？說明了什么？2、 寫出 dna 和 rna 的英文全稱及中文全稱。3、 試述“有其父必有其子 ”的生物學(xué)本質(zhì)。4、 寫出早期證實(shí) dna 是遺傳物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)的主要步驟。 5、定義 dna 重組技術(shù)和基因工程技術(shù)。6、敘述分子生物學(xué)的主要研究內(nèi)容。第二章1、 真核生物染色體的組成。2、 dna 的 1、2 和高級(jí)結(jié)構(gòu)。3、 dna 的復(fù)制方式。4、 原核生物 dna 的復(fù)制特點(diǎn)。5、 簡述細(xì)胞通過什么修復(fù)系統(tǒng)對(duì) dna 損傷進(jìn)行修復(fù)。 6、所學(xué)的轉(zhuǎn)座子及其種類。第三章1、 什么是編碼鏈

2、，什么是模板鏈？2、 簡述轉(zhuǎn)錄的概念及基本過程。3、 大腸桿菌 rna 聚合酶有那些組成成分。4、 敘述封閉、開放及三元復(fù)合物。5、 簡述因子的作用。6、 pribnow box 及保守序列。上升突變，下降突變。 7、原核生物和真核生物 mrna 的區(qū)別。第四章1、 trna 在組織和機(jī)構(gòu)上有哪些特點(diǎn)？2、 核糖體有哪些活性中心？3、 鏈霉素為什么能抑制蛋白質(zhì)的合成？4、 什么是信號(hào)肽？它在序列組成上有哪些特點(diǎn)？有什么 功能？5、 蛋白質(zhì)有哪些翻譯后的加工修飾？第五章1、 pcr 的意思、原理和步驟。2、 已知一個(gè) cdna 的 3的部分序列，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)流程得 到該基因的全長 cdna。3、

3、敘述 southern blotting 的基本步驟。4、 提取真核生物總 rna 的檢測標(biāo)準(zhǔn)。5、 簡述堿變性法提取質(zhì)粒 dna 的原理及方法。6、 簡述凝膠電泳分離 dna 的要點(diǎn)。第六章1、 簡述乳糖操縱子的調(diào)控模型。2、 畫出色氨酸操縱子模型并清楚調(diào)控機(jī)理。第七章1、 說明外顯子、內(nèi)含子在一個(gè)基因中結(jié)構(gòu)特征。2、 增強(qiáng)子是什么？闡述其作用機(jī)制。3、 敘述順式作用元件。4、 敘述反式作用因子。第八章1、 簡述人類基因組計(jì)劃的意義。2、 敘述大腸桿菌基因組和真核生物基因組的區(qū)別。3、 什么是蛋白質(zhì)組學(xué)？參考題 綜合習(xí)題及答案習(xí)題一一、填空題：1. 一個(gè)完整的體外 dna 重組技術(shù)主要包括（

4、獲取目的基因）、 （將目的基因進(jìn)行必要的改造）、（選擇和修飾克隆載體） （將目的基因與載體連接獲得含有目的基因的重組載體） （重組載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞）和（篩選出含重組 dna 的細(xì)胞） 六個(gè)步驟。1. 基因工程技術(shù)的目的是（獲得足夠的 dna 片段以分析基因 的結(jié)構(gòu)）、（將獲得的基因用于發(fā)展農(nóng)業(yè)、林業(yè)、畜牧業(yè)和 醫(yī)學(xué)）；基因工程技術(shù)的意義是（改造生命）、（創(chuàng)造新生 命）。3. 限制性核酸內(nèi)切酶的作用特點(diǎn)是（識(shí)別位點(diǎn)的 dna 序列 呈二重旋轉(zhuǎn)對(duì)稱（即具有迥文結(jié)構(gòu)）、（切割 dna 均產(chǎn)生 含 5-磷酸和 3-羥基的末端）、（錯(cuò)位切割產(chǎn)生具有 5 -或 3-突出的粘性末端；而沿對(duì)稱軸切割雙鏈 dn

5、a 產(chǎn)生平 頭末端，也稱鈍性末端）、（少數(shù)不同的限制酶可識(shí)別和切 割相同的位點(diǎn)）。4. pbr322 質(zhì)粒載體的優(yōu)點(diǎn)是（分子量較小，其長度為 4363bp 因而易于純化和防止純化過程中鏈的斷裂）和（具有兩種抗 生素抗性基因可作為轉(zhuǎn)化子的篩選標(biāo)志）。5. 噬菌體基因組的特點(diǎn)是（功能相關(guān)的基因排列在一起） 和（噬菌體的成熟需要經(jīng)過包裝）。6. 構(gòu)建 cdna 文庫的主要步驟是（總 rna 提取及 mrna 制備）、 （cdna 文庫第一鏈的合成）（cdna 文庫第二鏈的合成）、 （cdna 片斷與載體連接）（噬菌體的包裝及轉(zhuǎn)染）（cdna 文庫的擴(kuò)增和保存）。3. dna 切除修復(fù)需要的酶有（核酸

6、內(nèi)切酶）（dna 聚合酶 i） （dna 連接酶）4. 大腸桿菌乳糖操縱子調(diào)節(jié)基因編碼的蛋白質(zhì)是個(gè)（阻礙蛋 白），它與（操作基因）結(jié)合。阻止（結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄），當(dāng)有（乳糖）存在時(shí)，（誘導(dǎo)物與阻遏蛋白的合位與結(jié)合）使 之變構(gòu)失去活性，從而使（結(jié)構(gòu)基因）得以轉(zhuǎn)錄。9. 一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位一般應(yīng)包括（rna 聚合酶結(jié)合）序列，（dna 模板）序列和（轉(zhuǎn)錄終止區(qū)的特定 dna）序列。前者也叫（啟 動(dòng)子），后者叫（終止位點(diǎn)）。10. 原核細(xì)胞中各種 rna 是催化（一種酶催化 3 種 rna）生成 的，而真核細(xì)胞基因的轉(zhuǎn)錄分別由（3）種 rna 聚合酶催化， 其中 rrna 基因由（rna 聚合酶 i）轉(zhuǎn)錄，h

7、nrna 基因由（rna 聚合酶 ii）轉(zhuǎn)錄，各類小分子量 rna 則是（rna 的轉(zhuǎn)錄加工） 的產(chǎn)物。、二、判斷題1、 生物越高度，基因組越龐大，基因數(shù)目就越多。（ ）2、 真核生物結(jié)構(gòu)基因都是單拷貝，rrna 基因?yàn)槎嗫截?。?）3、 同基因是一類結(jié)構(gòu)上完全相同，表達(dá)產(chǎn)物功能也相同的 一組基因。（ ）4、 真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。（ ）5、 原核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為多順反子。（ ）6、 真核生物基因組中不編碼的區(qū)域多于編碼的區(qū)域。（ ）7、衛(wèi)星 dna 實(shí)際上是出現(xiàn)在非編碼區(qū)的串聯(lián)重復(fù)序列。（ ） 8、串聯(lián)重復(fù)序列是形成衛(wèi)星 dna 的基礎(chǔ)。（ ）9、 所有真核生物基因組中都有衛(wèi)星

8、dna。（ ）10、 高度重復(fù)序列在真核生物細(xì)胞基因組中重復(fù)出現(xiàn)可達(dá) 106 次以上。（ ）11、 中度重復(fù)序列的長度和拷貝數(shù)很不均一。（ ）12、 短分散片段重復(fù)順序的平均長度約為 3500-5000bp。 （ ）13、 長分散片段重復(fù)順序的平均長度約為 300bp。（ ） 14、中度重復(fù)序列大多不編碼蛋白質(zhì)。（ ）15、 高度重復(fù)序列中有一些可編碼蛋白質(zhì)。（ ）16、 中度重復(fù)順序一般具有種特異性。（ ）17、 每種組蛋白的基因在同一種生物中拷貝數(shù)是相同的。 （ ）18、不同生物中組蛋白基因在基因組中的排列不一樣。（）19、端粒是所有生物染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)。（ ）20、 以 rna

9、為模版合成出的 dna 鏈叫負(fù)股鏈。（ ）21、 顛換是指原為嘧啶突變后變?yōu)猷堰?。?）22、 置換是指原為嘧啶突變后變?yōu)猷堰?。?）23、 重組修復(fù)也叫復(fù)制后的修復(fù)。（ ）24、 原核細(xì)胞和真核細(xì)胞中許多 mrna 都是多順反子轉(zhuǎn)錄產(chǎn) 物。（ ）25、 限制性內(nèi)切酶切割的 dna 片段都具有粘性末端。（ ） 26、原核生物中 mrna 一般不需要轉(zhuǎn)錄后加工。（ ）27、 增強(qiáng)子并沒有啟動(dòng)子活性，卻具有增強(qiáng)啟動(dòng)子活性轉(zhuǎn)錄 起始的效能。（ ）28、 在雙向復(fù)制中一條鏈按 53的方向合成，另一條鏈 按 35的方向合成。（ ）29、 原核細(xì)胞和真核細(xì)胞復(fù)制在多個(gè)位點(diǎn)同時(shí)起始進(jìn)行。 （ ）30、 真核

10、細(xì)胞的基因是不連續(xù)的，轉(zhuǎn)錄出來的所有 rna 都必 須經(jīng)過加工。（ ）31、 生物 dna 分子的大小等于基因的總和。（ ）32、 所有多肽鏈經(jīng)核糖體翻譯出來即有正常生理功能。（ ）33、 核糖體是蛋白質(zhì)和 rrna 構(gòu)成的功能復(fù)合體。（ ）34、 機(jī)體的各種細(xì)胞中含有相同的遺傳信息，所以有相同的 表達(dá)，（ ）35、 在負(fù)控誘導(dǎo)系統(tǒng)中，阻遏蛋白不與效應(yīng)物結(jié)合時(shí)，結(jié)構(gòu) 基因不轉(zhuǎn)錄。（ ）36、 在負(fù)控阻遏系統(tǒng)中，阻遏蛋白不與效應(yīng)物結(jié)合時(shí)，結(jié)構(gòu) 基因不轉(zhuǎn)錄。（ ）37、 cap 結(jié)合在啟動(dòng)子上時(shí)，能促進(jìn) rna 聚合酶與啟動(dòng)子結(jié) 合，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄。（ ）38、 cap 首先與 camp 形成復(fù)合物才能

11、與啟動(dòng)子結(jié)合。（ ）39、 rbs 是指 mrna 起始密碼 aug 前的一段非翻譯區(qū)。（ ） 40、反義 rna 由反義基因轉(zhuǎn)錄而來。（ ）41、 轉(zhuǎn)錄后基因沉默被稱為 rnai。（ ）42、 細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成旺盛時(shí)， mrna 鏈上核糖體數(shù)量就多， poly（a）也較長。（ ）43、 限制性核酸內(nèi)切酶是原核生物所特有的酶。（ ）44、 只有型限制性核酸內(nèi)切酶在分子生物學(xué)中被應(yīng)用。 （ ）45、 cos 區(qū)是指噬菌體粘性末端構(gòu)成的區(qū)域。（ ）53、 基因擴(kuò)增是指某些基因的拷貝數(shù)大量增加的現(xiàn)象。（ ）54、 基因重排是 dna 水平調(diào)控的重要方式之一。（ ）55、 所有核酸的合成都是以堿基配對(duì)

12、為基礎(chǔ)的。（ ）56、 甲基化程度與基因的表達(dá)一般呈反比關(guān)系。（ ） 57、基因的甲基化程度愈高，其表達(dá)則降低。（ ）58、 去除組蛋白基因轉(zhuǎn)錄活性降低。（ ）59、 常染色質(zhì):結(jié)構(gòu)松散，基因不表達(dá)。（ ）60、 異染色質(zhì):結(jié)構(gòu)緊密，基因表達(dá)。（ ）61、 有基因表達(dá)活性的染色質(zhì) dna 對(duì) dnase更敏感。（ ）62、 真核生物基因調(diào)控主要也是在轉(zhuǎn)錄水平上進(jìn)行的。（ ） 三、選擇題：1. 原核生物基因組中的復(fù)制起始點(diǎn)有（ a ）a1 個(gè) b2 個(gè) c多個(gè) d1000 個(gè)以上2真核生物基因組中的復(fù)制起始點(diǎn)有（ d ）a1 個(gè) b2 個(gè) c多個(gè) d1000 個(gè)以上 3. 真核生物基因之間的間隔

13、區(qū)與基因組大?。?c ）a有關(guān) b無關(guān) c成 正比 e成反比.衛(wèi)星 dna 的長度一般為 ( a )a5-10bp b300bp c100bp d500-1000bp. 在大腸桿菌細(xì)胞中 dna 復(fù)制的保真性主要是下列哪個(gè)酶 的作用（ c ）adna 聚合酶 bdna 聚合酶 cdna 聚合酶 ddna 連接酶. 既有內(nèi)切酶活力，又有連接酶活力的是( a )a拓?fù)洚悩?gòu)酶 bdna 聚合酶 c解螺旋酶 d dna 連接酶7. 轉(zhuǎn)錄過程中遺傳信息的轉(zhuǎn)遞方向是( a )adnarna brnadna cdnadna drnarna8. hnrna 是( b )a存在于細(xì)胞核內(nèi)的 trna 前體 b.

14、 存在于細(xì) 胞核內(nèi)的 mrna 前體c. 存在于細(xì)胞核內(nèi)的 rrna 前體胞核內(nèi)的 snrna 前體9. 以 rna 為模板合成 dna 的酶是（ d ）adna 聚合酶 bdna 聚合酶d.存在于細(xì)crna 聚合酶 d反轉(zhuǎn)錄酶10. 蛋白質(zhì)的生物合成中肽鏈延伸方向是（ b ） a5，3， b從 n 端到 c 端5， d從 c 端到 n 端c3，11. 蛋白質(zhì)翻譯后的加工主要包括（ d）。a氨基酸側(cè)鏈修飾 解修飾b水c二硫鍵的形 成d 上述各種修飾都包括12. 操縱子調(diào)控系統(tǒng)屬于哪一種水平的調(diào)控（ b ）a復(fù)制水平的調(diào)節(jié) b.轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié) c翻譯水平的調(diào) 節(jié) d。轉(zhuǎn)錄后加工的調(diào)控13. 與乳

15、糖操縱子操縱基因結(jié)合的物質(zhì)是（ c ）arna 聚合酶 bdna 聚合酶 c 阻遏蛋 白 d誘導(dǎo)物14、參與線粒體 dna 復(fù)制的酶是（ d ）apol bpol cpol dpol15、參與領(lǐng)頭鏈 dna 復(fù)制的酶是（ b ）apol bpol cpol dpol16、端粒酶是一種 ( c )a逆轉(zhuǎn)錄酶 brna 聚合酶 cdna 聚 合酶 ddna 酶17. 含稀有堿基最多的 rna 是（ d ）amrna b、rrna c5s-rrna dtrna18. 大腸桿菌 dna 連接酶需要下列哪一種輔助因子？（ c ）afad 作為電子受體bnadp+作為磷酸供體cnad+形成活性腺苷酰酶 d

16、nad+ 作為 電子受體19. 真核生物 rna 聚合酶 i 催化轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是（ b ）amrna b45s-rrna c5s-rrn a dtrna20. 魔斑是指（ a ）appgpp bcamp ccgmpd7mgppp21. cap 復(fù)合體與操縱子結(jié)合的部位是（ a ）a啟動(dòng)子 b操縱基因 c結(jié)構(gòu)基因 d調(diào)節(jié)基因22. 基因的甲基化修飾一般發(fā)生在（ a ）acpg bapg cgptdtpg23.有基因表達(dá)活性的染色質(zhì) dna 對(duì)下列那個(gè)酶敏感性增 加？（ a ）adnase bdna pol cdna pol d. rnase h24. 真核生物的 rna 聚合酶識(shí)別的是（ a ）a

17、啟動(dòng)子 b增強(qiáng)子 ctf-dna 復(fù)合 體 drf25. 在分子生物學(xué)中被應(yīng)用的限制性核酸內(nèi)切酶是（ b ）a型 b型 c 型 d以 上都沒用26. 限制性核酸內(nèi)切酶錯(cuò)位切割產(chǎn)生（ a ）a粘性末端 b平頭末端 c3 -磷酸 d5-羥基27.大腸桿菌 dna 連接酶只能連接（ a ）a粘性末端 b平頭末端 c3 -磷酸 d5-羥基28. pbr322 是（ a ）a復(fù)制型載體 b表達(dá)型載體 c穿梭載體 d噬菌體載體29、puc 載體是（ b ）a復(fù)制型載體 b表達(dá)型載體 c穿梭載體 d噬菌體載體30. m13 噬菌體是（ a ）a單鏈 dna 噬菌體 b雙鏈 dna 噬菌體 c rna 噬 菌

18、體 d都不是四、名詞解釋1高度重復(fù)基因：高度重復(fù)序列在真核生物細(xì)胞基因組中 重復(fù)出現(xiàn)可達(dá) 106 次以上的 dna 序列，稱為高度重復(fù)序列基 因或高度重復(fù)序列 dna。這類序列復(fù)性速度很快，在人類基 因組占 20%。2 斷裂基因：一個(gè)基因的核苷酸序列中因插入了與編碼氨 基酸無關(guān)的核苷酸序列，使一個(gè)完整的基因分隔成不連續(xù)的 若干區(qū)段，稱之為斷裂基因。3 基因組的概念：細(xì)胞或生物體的整套(單倍體)遺傳物質(zhì)， 稱為基因組?；蚪M的大小用全部 dna 的堿基對(duì)總數(shù)表示。4 基因：核酸分子中遺傳信息的基本單位，是指 rna 序列 信息及表達(dá)這些信息所必需的全部核苷酸序列。5 微衛(wèi)星 dna：重復(fù)單位序列

19、最短，只有 26bp，串聯(lián)成 簇，長度 50100bp ，又稱為短串聯(lián)重復(fù)序列。10 衛(wèi)星 dna ：衛(wèi)星 dna 實(shí)際上是出現(xiàn)在非編碼區(qū)的串聯(lián)重 復(fù)序列。其特點(diǎn)是具有固定的重復(fù)單位，該重復(fù)單位首尾相 連形成重復(fù)序列片段，通常存在于間隔 dna 和內(nèi)含子中。11 基因表達(dá)：基因表達(dá)是指原核生物和真核生物基因組中 特定的結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息，經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系 列過程，合成具有特定的生物學(xué)功能的各種蛋白質(zhì)。表現(xiàn)出 特定的生物學(xué)效應(yīng)的全過程。12 增強(qiáng)子：指位于啟動(dòng)子上游或下游并通過啟動(dòng)子增強(qiáng)鄰 近基因轉(zhuǎn)錄效率的 dna 順序，增強(qiáng)子本身不具備啟動(dòng)子活性。13 sd 序列：與細(xì)菌 16s r

20、rna 3 ，端互補(bǔ)的序列。原核生 物在起始密碼 aug 上游方向 4-13 個(gè)堿基之間有一段富含嘌 呤的序列，其一致序列為 aggagg ，稱為 shine-dalgamo 序列 （sd 序列）14 反式作用因子：反式作用因子是 dna 結(jié)合蛋白，核內(nèi)蛋 白，可使鄰近基因開放（正調(diào)控）或關(guān)閉（負(fù)調(diào)控）。是一 類細(xì)胞核內(nèi)蛋白質(zhì)因子。在結(jié)構(gòu)上含有與 dna 結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。15 cdna 文庫：以細(xì)胞的全部 mrna 逆轉(zhuǎn)錄合成的 cdna 組成 的重組克隆群體稱為 cdna 文庫。16. 基因家簇：真核細(xì)胞的基因組中有許多來源相同、結(jié)構(gòu) 相似、功能相關(guān)的基因常常按功能成套組合，這樣的一套基 因稱

21、為基因家族或多基因家族17. 逆轉(zhuǎn)錄：以 rna 為模板合成 dna 的過程，這與通常轉(zhuǎn)錄 過程中遺傳信息從 dna 到 rna 的方向相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄作 用。18. 光修復(fù)：光復(fù)合酶能特異地和嘧啶二聚體結(jié)合，在可見 光下催化光化合反應(yīng)，使環(huán)丁烷環(huán)回復(fù)到兩個(gè)獨(dú)立的嘧啶， 這一過程叫光復(fù)合作用。19. sos 修復(fù)：是一種旁路系統(tǒng)，為 dna 的損傷所誘導(dǎo)。其修 復(fù)的結(jié)果是導(dǎo)致突變，是傾向差錯(cuò)的修復(fù)。20. 反義 rna：指能與特定 mrna 互補(bǔ)結(jié)合的 rna 片段，反義 rna 由反義基因轉(zhuǎn)錄而來。天然的具有功能的反義 rna 分子 一般在 200 個(gè)堿基以下。21. 鋅指：指含有一段保守

22、氨基酸順序的蛋白質(zhì)與該蛋白的 輔基鋅螫合而形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，分為鋅指、鋅扭（ twist） 和鋅簇（cluster）結(jié)構(gòu)；22基因工程：有目的的通過分子克隆技術(shù)，人為的操作改 造基因，改變生物遺傳性狀的系列過程。23、5aug：真核 mrna 為模板的翻譯開始與最靠近其 5端 的第一個(gè) aug。習(xí)題二一、填空題1. 真核生物基因組 dna 序列可分為（高度重復(fù)序列）、（中 度重復(fù)序列）和（低度重復(fù)序列（單拷貝序列）。1. 真核生物基因組高度重復(fù)序列包括（反向重復(fù)序列）、（衛(wèi) 星 dna）、（衛(wèi)星 dna）和（微衛(wèi)星 dna）四種。3. 真核生物基因組高度重復(fù)序列的功能是（參與復(fù)制水平 的調(diào)節(jié)）（

23、參與基因表達(dá)的調(diào)控）、（參與轉(zhuǎn)位作用）、（與 進(jìn)化有關(guān)）（與個(gè)體特征有關(guān)）和（與減數(shù)分裂時(shí)染色體配 對(duì)有關(guān)）。4. alu 家族的功能是（可能參與 hnrna 的加工與成熟）、（與 遺傳重組及染色體不穩(wěn)定性有關(guān)）、（有形成 z-dna 的能力） 和（可能具有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用）。5. 原核生物轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控的方式有（反轉(zhuǎn)錄調(diào)控）和（正 轉(zhuǎn)錄調(diào)控）兩種方式；前者又可分為（負(fù)控誘導(dǎo)）和（負(fù)控 阻遏）；后者可分為（正控誘導(dǎo)）和（正控阻遏）。6. 真核生物基因表達(dá)調(diào)控包括（dna 水平（既基因組水平） 調(diào)控）、（轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控）、（轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控）、（翻譯 水平調(diào)控）和（翻譯后水平調(diào)控）五個(gè)層次。7. 真核生物

24、基因組 dna 水平的調(diào)控包括（開放型活性染色 質(zhì)）、（基因擴(kuò)增）、（基因重排與變換）、（dna 甲基化） 和（基因丟失）五種方式。8. 反式作用因子可劃分為（通用轉(zhuǎn)錄因子）、（組織特異 性轉(zhuǎn)錄因子）和（誘發(fā)性反式作用因子）三類。9. 引起 dna 變性的因素有（熱變性）、（酸堿變性）和（化 學(xué)試劑變性）三類。9. 變性 dna 具有（溶液粘度降低）、（溶液旋光性發(fā)生改 變）和（增色效應(yīng)或高色效應(yīng)）性質(zhì)。11. 影響 dna 復(fù)性的因素有（溫度和時(shí)間）、（dna 濃度）和 （dna 序列的復(fù)雜度）三類。9. 影響雜交的因素有（核酸分子的濃度、長度和復(fù)雜性）、 （溫度）、（離子強(qiáng)度）、（雜交液中

25、的甲酰胺濃度）和（雜 交條件的嚴(yán)謹(jǐn)性）。10. 原位雜交的特點(diǎn)是（能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì) 胞的研究）、（不需從組織或細(xì)胞中提取核酸，對(duì)含量極低 的靶序列靈敏度高）和（能準(zhǔn)確反映組織細(xì)胞的相互關(guān)系及 功能狀態(tài)）。11. 端粒的作用是（穩(wěn)定染色體結(jié)構(gòu)）、（防止染色體末端 融合）、（保護(hù)染色體結(jié)構(gòu)基因）和（避免遺傳信息在復(fù)制 過程中丟失）。12. 逆轉(zhuǎn)錄酶是多功能酶，具有（rna 指導(dǎo)的 dna 聚合酶活 性）、（rna 酶 h（rnaseh）活性）、（dna 指導(dǎo)的 dna 聚合 酶活性）三種功能，但無（ 35外切酶活性）作用。16. dna 的損傷、突變類型有（堿基對(duì)的置換）、（顛換）、

26、 （移碼突變）、（二聚體的形成）和（重排）。17. 引起 dna 損傷、突變的因素是（dna 復(fù)制的錯(cuò)誤）、（dna 的修復(fù)合成）、（堿基的自發(fā)突變）、（物理因素）和（化 學(xué)因素）。18. dna 的損傷、修復(fù)方式有（光修復(fù)）、（切除修復(fù)）、 （重組修復(fù)）和（ sos 修復(fù)）。19. 基因診斷的基本方法有（核酸分子雜交）、（pcr）、 （sscp（pcr-sscp）（限制酶酶譜分析）（dna 序列測定） 和（dna 芯片技術(shù)）。16. 病毒基因組可由（rna）或（dna）組成；細(xì)菌基因組由 一條（環(huán)狀雙鏈 dna 分子）組成；真核生物基因組由（dna） 和（蛋白質(zhì)）形成（染色體）。21原核生物

27、基因表達(dá)調(diào)控的方式有（轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控）和（翻 譯水平的調(diào)控）中（轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控）是主要的方式。22.操縱子由（結(jié)構(gòu)基因）、（操縱基因）和（啟動(dòng)子）組 成；受（調(diào)控基因）產(chǎn)物的調(diào)控。23順式作用元件按功能可劃分為（啟動(dòng)子）、（增強(qiáng)子）、 （終止子）和（沉默子 衰減子）。24 分子克隆技術(shù)的操作包括（獲取目的基因）、（將目的 基因進(jìn)行必要的改造）、（選擇和修飾克隆載體）（將目的 基因與載體連接獲得含有目的基因的重組載體）（重組載體 導(dǎo)入宿主細(xì)胞）和（篩選出含重組 dna 的細(xì)胞）等四個(gè)基本 過程。25 限制性內(nèi)切酶分為（型）、（型）、（型）三種， 其中只有（型）在基因工程操作中被應(yīng)用。26. 限制性內(nèi)

28、切酶識(shí)別（迥文）序列； dna 分子在該酶切割 下可產(chǎn)生（平頭末端）、（具有 5-突出）或（3-突出的 粘性末端）。27 分子克隆中常用的工具酶有（限制性核酸內(nèi)切酶）、（dna 聚合酶）、（dna 連接酶）、（dna 修飾酶）。28 分子克隆中常用的載體有（質(zhì)粒載體）、（噬菌體載體）、 （病毒載體）（粘粒載體）和（酵母人工染色體載體）。29.目的基因制備的常用方法有（直接從染色體中分離）、 （cdna 文庫法）、（化學(xué)合成法制備 dna 片段）、（基因文 庫法）。30. 體外重組常用方法有（粘性末端連接法）、（平齊末端 連接法）、（人工接頭連接法）（同聚物加尾法）和（適配 子連接法）。30.

29、重組體導(dǎo)入原核生物細(xì)胞中的常用方法有（氯化鈣轉(zhuǎn)化 法）和（轉(zhuǎn)染法）；重組體導(dǎo)入真核生物細(xì)胞中的常用方法 有（物理方法）、（化學(xué)法）和（生物法）。30. 重組體的篩選方法有（半乳糖苷酶系統(tǒng)篩選）、（表 型篩選法）、（菌落快速裂解鑒定法）、（內(nèi)切酶圖譜鑒定） （聚合酶鏈反應(yīng)篩選重組子）（菌落或噬菌斑原位雜交）。30. cdna 文庫的構(gòu)建步驟是（總 rna 提取及 mrna 制備）、 （cdna 文庫第一鏈的合成）（cdna 文庫第二鏈的合成）、 （cdna 片斷與載體連接）（噬菌體的包裝及轉(zhuǎn)染）（cdna 文庫的擴(kuò)增和保存）。30 常用的核酸探針包括（寡核苷酸探針）、（雙鏈探針） 和（單鏈探針）

30、。31 放射性同位素標(biāo)記常用的標(biāo)記方法有（缺口平移法）、 （隨機(jī)引物法）（末端標(biāo)記法）（t4 dna 聚合酶標(biāo)記法）。32 分子克隆中常用的非放射性同位素標(biāo)記物有（生物素）、 （地高辛）、（熒光素）等；常用的標(biāo)記方法有（缺口平移法）、（隨機(jī)引物法）（末端標(biāo)記法）（t4 dna 聚合酶標(biāo)記 法）。37 核酸雜交技術(shù)可分為（液相雜交）和（固相雜交）兩種 類型；后者又可分為（膜上印跡雜交）和（細(xì)胞原位雜交）。38 印跡雜交中常用的印跡方法有（southern 印跡雜交）、 （northern 印跡法）、（斑點(diǎn)印跡雜交）（western 印跡 法）；39 pcr 技術(shù)的基本過程是（高溫變性）、（低溫退

31、火）、 （中溫延伸）。40 影響 pcr 的因素有（引物）、（模板）、（耐熱 dna 聚 合酶活性和用量）、（dntp 質(zhì)量和濃度）、（mg 離子濃度）、 （ph）、（溫度）、（循環(huán)次數(shù)）。37. pcr 反應(yīng)的特點(diǎn)是（特異性強(qiáng)）、（靈敏度高）、（簡 便、快速）、（對(duì)標(biāo)本的純度要求低）。38. taqdna 聚合酶是一種（耐熱）聚合酶，具有（ 5-3 dna 聚合酶活性）和（5-3外切酶）活性，有或無（3 -5外切酶活性）活性。二、選擇題1.大腸桿菌 dna 連接酶只能連接（ a ）a粘性末端 b平頭末端 c3 -磷酸 d5-羥基2. pbr322 是（ a ）a復(fù)制型載體 b表達(dá)型載體 c穿

32、梭載體 d噬菌體載體3、puc 載體是（ b ）a復(fù)制型載體 b表達(dá)型載體 c穿梭載體 d噬菌體載體4. m13 噬菌體是（ a ）a單鏈 dna 噬菌體 b雙鏈 dna 噬菌體 c rna 噬 菌體 d都不是三、問答題1分子克隆中常用的工具酶有哪些？各有何用途？1. 限制性內(nèi)切酶：1.dna 重組，2，構(gòu)建新質(zhì)粒，3，組 建 dna 物理圖譜2. dna 聚合酶：制備 dna 探針3 ，逆轉(zhuǎn)錄酶：dna 的序列分析；用于各種 pcr4 ,dna 鏈接酶：1 粘端 dna 或 dna 切口間的連接 2， 可用于粘性未端的連接5 ，dna 修飾酶：改變成修飾 dna 的某些基因，如加“尾 巴”。

33、2何謂載體？分子克隆中常用的載體有哪些？理想的載體 應(yīng)具備哪些條件？載體：指能夠?qū)⑼庠葱?dna 片段引入宿主細(xì)胞并能在 宿主細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制或最終使外源性 dna 表達(dá)的自主 dna。常用的載體有：質(zhì)粒、噬菌體、粘粒、病毒、人工染 色體理想載體條件：1、在宿主細(xì)胞中有自我復(fù)制能力 2、 拷貝數(shù)多 3、應(yīng)具有篩選標(biāo)志 4、有 re 切割位點(diǎn) 5、分子 量不宜過大 6、最好配備有調(diào)控元件 7、載體 dna 與宿主 dna 容易分開3何謂 pcr？試述 pcr 基本技術(shù)原理和影響因素。pcr 是一種體外擴(kuò)增特異片段的技術(shù)，其原理類似 dna 的體內(nèi)擴(kuò)增。它包括：高溫變性（90-97c）低溫退火（

34、4555c） 中溫延伸（72 度左右）。變性：待擴(kuò)增的 dna 模板加熱變形 成單鏈；退火：降低溫度，是單鏈靶序列與寡核苷酸引物退 火；延伸：在適當(dāng)條件下，利用 dna 聚合酶使引物延伸，產(chǎn) 生新的雙鏈。這三個(gè)基本步驟重復(fù)循環(huán)，導(dǎo)致特異的靶序列 的指數(shù)擴(kuò)增。影響 pcr 反應(yīng)五要素：引物 taqdna 聚合酶 dntp 模板和二價(jià) mg 離子4將目的 dna 與載體 dna 連接起來的方法有哪些？并用文 或圖表示各種連接過程。1、 粘性末端連接法：以同一種限制性內(nèi)切酶切制目的 基因和載體 dna 獲得相同的粘性互補(bǔ)末端，在一定溫度下， 兩者的粘性末端互補(bǔ)配對(duì)，再經(jīng) dna 連接酶連接。2、 平

35、齊末端連接法：以同一種限制性內(nèi)切酶切制目的 基因和載體 dna，產(chǎn)生平齊末端，在高濃度dna，大量 t4dna 連接酶存在時(shí)，可以直接利用平端將目的基因與載體連接起 來3、 人工接頭連接法：人工合成的大小約 8 到 12 個(gè)核 苷酸，并具有 re 識(shí)別信點(diǎn)的平齊末端雙鏈寡核苷酸圖文序列通過 t4dna 連接酶可與大多數(shù)平端 dna 連接。用相同限制 內(nèi)切酶切割可產(chǎn)生所需粘性末端4、 適配子連接法：人工合成具有一個(gè)以上限制酶識(shí)別 位點(diǎn)的短序列，它具有一個(gè)平端，可與其它 dna 平端連接， 同時(shí)還有某種限制酶的突出端，可與含互補(bǔ)的限制酶突出端 的 dna 片段連接用相同限制內(nèi)切酶切割可產(chǎn)生所需粘性

36、末端5、 同聚物加尾法：給載體 dna 和目的 dna 分子末端添加 多聚 da 和 dt,形成粘性末端，進(jìn)而連接。四、簡述題1原核生物與真核生物基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。原核特點(diǎn)a 有類核結(jié)構(gòu)b 染色體 dna 通常與細(xì)胞膜相連c 具有操縱子結(jié)構(gòu)d 結(jié)構(gòu)基因都是單拷貝，rrna 基因?yàn)槎嗫截?，基因組 dna 中 不編碼的部分所占比列比真核細(xì)胞基因組少得多(編碼序列 為 90%)。e 不出現(xiàn)基因重疊現(xiàn)象f 具有相同基因，即編碼同工酶的基因。g dna 分子具有各種功能的識(shí)別區(qū)域h 具有終止子i 基因組中只有一個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)：基因數(shù)量少 體積小j 基因組中存在可移動(dòng)的 dna 序列 包括插入序列和轉(zhuǎn)座子 也

37、包括質(zhì)粒。真核生物基因特點(diǎn)：a 真核生物基因組 dna 與蛋白質(zhì)結(jié)合形成染色體，儲(chǔ)存于細(xì) 胞核內(nèi)，除配子細(xì)胞外，體細(xì)胞被的基因組是雙份的（即雙 倍體）即有兩份同源的基因組。b 真核細(xì)胞是基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物為單順反子。一個(gè)結(jié)構(gòu)基因經(jīng) 過轉(zhuǎn)錄生成一個(gè) mrna 分字，買翻譯生成一條多肽鏈。c 存在重復(fù)序列，可重復(fù)次數(shù)可達(dá)百萬次以上d 基因組中不編碼的區(qū)域多于編碼區(qū)域e 大部分基因含有內(nèi)含子，因此 基因是不連續(xù)的f 基因組遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于原核生物的基因組，具有許多復(fù)制起始點(diǎn)， 而每個(gè)復(fù)制子的長度較小。g 真核生物基因之間存在編碼空白區(qū)或轉(zhuǎn)錄的空白區(qū)，稱為 間隔區(qū) dna?；蚪M愈大，間隔區(qū) dna 所占的比列也

38、愈高。2原核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。(1) 轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控類型：a 負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控：調(diào)節(jié)基因的產(chǎn)物是阻止蛋白，起著阻止結(jié)果 基因轉(zhuǎn)錄的作用。根據(jù)其作用特征又可分為負(fù)控誘導(dǎo)和負(fù)控 阻止作用。在負(fù)控誘導(dǎo)系統(tǒng)中，阻止蛋白不與效應(yīng)物結(jié)合時(shí)， 結(jié)構(gòu)基因不轉(zhuǎn)錄；在負(fù)阻止系統(tǒng)中組織蛋白與效應(yīng)物結(jié)合 時(shí)，結(jié)果基因不轉(zhuǎn)錄。組織蛋白作用的部位是操縱區(qū)。b 正轉(zhuǎn)錄調(diào)控：調(diào)節(jié)基因的產(chǎn)物是激活蛋白，起著促進(jìn)結(jié)構(gòu) 基因轉(zhuǎn)錄的作用。根據(jù)其作用的特征又可分為正控誘導(dǎo)和正 控阻止作用在正控系統(tǒng)中，效應(yīng)物分子的存在 使激活蛋白 處于活性狀態(tài)；在正控阻止系統(tǒng)中，效應(yīng)物分子的存在 使 激活蛋白處于非活性狀態(tài)。(2) 轉(zhuǎn)錄起始的正調(diào)控a 阿拉伯

39、糖操縱子：是利用同一蛋白的不同結(jié)構(gòu)形式活化和 抑制操縱子的調(diào)控方式。是正調(diào)控的典例。(3)轉(zhuǎn)錄終止的調(diào)控原核生物的轉(zhuǎn)錄終止調(diào)控方式分兩大類：a 依賴 p 因子的終 止調(diào)控 b 不依賴因子的終止調(diào)控，此外，核糖體也參與轉(zhuǎn) 錄終止。3體外重組常用的連接方法.各自的優(yōu)缺點(diǎn)如何。a 粘性末端連接法優(yōu)點(diǎn)：簡單，重組率高。缺點(diǎn)：易產(chǎn)生載體的自身環(huán)化b 平齊端連接法：優(yōu)點(diǎn) :可用 t4 連接酶連接任何 dna 平端，這對(duì)不同 dna 分子的連接十分有利，可防止自身環(huán)化。缺點(diǎn);連接率比粘性末端低，需較多的 t4dna 連接酶和較高的 底物濃度，重組率底。c 人工接頭連接法;可助人工合成的接頭來方便連接。適合于

40、 沒有所需 re 位點(diǎn)的外源 dna.d 適配子連接法：它具有一個(gè)平端，可與其它 dna 平端連接， 同時(shí)還有某種限制酶的突出端，可與含互補(bǔ)的限制酶突出端 的 dna 片段連接用相同限制內(nèi)切酶切割可產(chǎn)生所需粘性末 端。e 同聚物加尾連接法：該法不需要模板的存在，可防止載體 dna 與目的 dna 的自身環(huán)化。4重組體的篩選常用的方法有哪些？簡述各種方法的原理。a 表型篩選法： dna 體外重組所用的載體常常攜帶一個(gè) 或幾個(gè)可供選擇的遺傳標(biāo)記或標(biāo)記基因，當(dāng)外源基因插入載 體并轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞后，使受體細(xì)胞可獲得或缺失這些標(biāo)記表 型，可以通過插入失活篩選陽性克隆。b 抗藥性標(biāo)志的篩選：如果克隆載體帶有

41、某種抗藥性標(biāo)志基 因，轉(zhuǎn)化后只有含這種抗藥基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)菌才能在含該抗 藥菌素的平板上幸存并形成菌落， 這樣就可將轉(zhuǎn)化菌與非 轉(zhuǎn)化菌區(qū)別開來。cb-半乳糖苷酶系篩選：很多d 藍(lán)白篩選5. 何謂基因家族？基因家族有哪一些類型？基物分類，基因家族可分為兩類：一類是編碼 rna 的如 snrna rrna rrna 另一類是編碼蛋白質(zhì)因家族-真核細(xì) 胞的基因組中有許多來源相同 結(jié)構(gòu)相似功能相關(guān)的基因常 常按功能成套組合，這樣的一套基因稱為基因家族或多基因 家族按基因的終產(chǎn)的基因家族按它們在基因組中的分布不同分類基因家族可分為兩類一類是基因串聯(lián)排列在一起， 形成基因族，trna rrna 組 蛋白等基

42、因都屬于這一類另一類家族成員分別在不同的部位，如干擾素 珠蛋白 生長 激素。6. 何謂反義 rna？反義 rna 對(duì)翻譯有何調(diào)控作用？反義 rna 又稱 mrna 互補(bǔ) rna，指能與特定 mrna 合的 rna 片 段，反義 rna 由反義基因轉(zhuǎn)錄而來作用;a 反義 rna 與 mna5 端非翻譯區(qū)包括 sd 序列相結(jié)合， 阻止 mna 與核糖體小亞基結(jié)合，直接抑制翻譯b 反義 rna 與 mna5端編區(qū)起始密碼子 aug 結(jié)合， 抑制 rna 翻譯起始c 反義 rna 與 mra 的非編碼區(qū)互補(bǔ)結(jié)合，使 mna 構(gòu) 像改變，影響其與核糖體結(jié)合，間接抑制了 mna 的翻譯7. 真核生物 mr

43、na5端加帽和 3端多聚腺苷酸化有何意 義？5加帽意義：保護(hù)轉(zhuǎn)錄體 mrna 不受 5外切酶降解， 增強(qiáng) mrna 的穩(wěn)定性，同時(shí)有利于 mrna 從細(xì)胞核向胞質(zhì)轉(zhuǎn)動(dòng)，促進(jìn) mrna 與核糖體的結(jié)合 5加帽意義：保證 mrna 在轉(zhuǎn)錄 過程中不被降解8. 試述 pcr 基本技術(shù)過程中引物設(shè)計(jì)的原則。a 引物的長度;一般 1530bp，常用 20merb 引物擴(kuò)增跨度：以 500bp 為宜，特定重要條件下可擴(kuò)增長 至 10kp 的片段c 引物堿基：g+c 含量以 4060%為宜，atgc 最好隨機(jī)分布， 避免 5 個(gè)以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列d 避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)：避免兩條引物間互補(bǔ)

44、，特別 是 3端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異性的 擴(kuò)增條物e 引物 3端的堿基必須與模板嚴(yán)格配對(duì)，特別是最末及倒 數(shù)第二個(gè)堿基，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致 pcr 失敗f 償還物中有或能加 上合適的酶切位點(diǎn)g 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切點(diǎn)，這對(duì)酶切分析或分 子克隆很有好處h 引物量：每條引物的濃度 0.1-1umol/l，以最低引物量 產(chǎn)生所需的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性 擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體有機(jī)會(huì)i 引物的特異性：引物與非特異擴(kuò)增序列的同源性應(yīng)小于 70% 或少于連續(xù) 8 個(gè)的互補(bǔ)堿基9. 何謂宿主細(xì)胞？分子克隆中常用的宿主細(xì)胞有哪些？宿 主細(xì)胞

45、應(yīng)具備哪些條件？宿主細(xì)胞：是基因克隆中重組 dna 分子的繁殖場所，能接受 并容忍重組體，并使之在體內(nèi)復(fù)制、增殖。常用宿主細(xì)胞：原核細(xì)胞：大腸桿菌、枯草桿菌。真核細(xì)胞： 酵母、昆蟲細(xì)胞，動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞條件：1、必須是限制性內(nèi)切酶的缺陷型，既 r 菌株 2、必須是 dna 重組缺陷型株，既 rec 菌 株 3、必須是感受態(tài)細(xì)胞或能成為感受態(tài)細(xì)胞10. 真核生物的高度重復(fù)序列有哪些？有何作用？a 反向重復(fù)序列：常出現(xiàn)在基因的調(diào)控區(qū)內(nèi)，可能與復(fù)制、 轉(zhuǎn)錄的調(diào)控有關(guān)b 衛(wèi)星 dna：常常位于著絲粒和端粒區(qū)，一種或幾種簡單順 序串聯(lián)重復(fù) 105-107 次，而且其堿基序列比較保守，一般 不能編碼蛋白質(zhì)或轉(zhuǎn)錄成 rnac 衛(wèi)星 dna：是由較復(fù)雜的重復(fù)單位組成的重復(fù)序列， 這種重復(fù)序列為靈長類所特有11、損傷修復(fù)有哪些類型？試述各類型的修復(fù)方式。a 光修復(fù)：光復(fù)合酶能特異地和嘧啶二聚體結(jié)合，在可見光 下催化光化合反應(yīng)，使環(huán)丁烷環(huán)回復(fù)到兩個(gè)獨(dú)立的嘧啶，這 一過程叫光復(fù)合作用。b 切除修復(fù)：是細(xì)胞內(nèi)的主要修復(fù)方式。一般 dna 的兩條鏈 只有一條受損傷，可將損傷部分切除