培養(yǎng)基適用性SOP

1、文件名稱培養(yǎng)基適用性檢查標準操作規(guī)程文件編碼SOP-QC-1015-03頁數(shù)共頁頒發(fā)部門GMP、公室QA年 月曰修訂年 月曰批準年 月曰審核年 月曰生效日期年月日分發(fā)部門質管部起草說明新增文件，直接升級為03版。目的制定培養(yǎng)基適用性檢查標準操作規(guī)程。范圍本規(guī)程適用于微生物培養(yǎng)基適用性測定。責任人文件起草、審核、簽批、使用、歸檔、保管人員執(zhí)行標準中國藥典2010版一部附錄XM培訓對象檢驗人員、QC主管內容1.計數(shù)培 養(yǎng)基 的適用性檢查1.1適用范圍細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)用的培養(yǎng)基應進行培養(yǎng)基的適用性，成品培養(yǎng)基、由脫水培 養(yǎng)基或按處方配置的培養(yǎng)基均應檢查。1.2菌種試驗用菌株的傳代數(shù)不得超過5代

2、（從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術進行保存，以保證試驗菌株的生物學特征菌種編號大腸埃布困CMCC(B)44102金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003枯草芽抱桿菌CMCC(B)63501白色念珠菌CMCC(F)98001黑曲霉CMCC(F)980031.3菌液的制備試驗菌株培養(yǎng)物的制備培養(yǎng)菌懸液的制備大腸埃布菌 金黃色葡萄球菌 枯草芽抱桿菌分別接種新鮮培 養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯 培養(yǎng)基中或營養(yǎng) 瓊脂培養(yǎng)上。3035C1824小時分別取制備好的培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制備成每1ml含菌數(shù)為50100cfu的菌 懸液。白色念珠菌接種新鮮培養(yǎng)物 至改良馬丁培養(yǎng) 基或

3、改良馬丁瓊口匕丄立傘甘L脂培 口養(yǎng)基上。2328C2448小時黑曲霉接種新鮮培養(yǎng)物 至改良馬丁瓊脂 斜面培養(yǎng)基上。2328C 57天加入35ml含0.05% (ml/ml )聚山梨酯的80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將抱子洗脫。 然后，米用滴管吸出抱子菌液至無菌試管內，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯的80的0.9%無困氯化鈉溶液制成每1ml含困數(shù)為50100cfu的菌懸液。困液制備后若在室溫卜放置，應在 2小時內使用；若保存在28 C，可在24小時內使用。黑曲 霉抱子懸液可保存在28C，在驗證過的貯存期內使用1.4適用性檢查被檢培養(yǎng)基試驗菌株制備過程培養(yǎng)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基大腸埃布困分別取各試

4、驗菌懸液1ml(50100cfu)，分 別注入無菌平皿中，立即注入營養(yǎng)瓊脂 培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個皿， 混勻，凝固。同時，用對照培養(yǎng)基(營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基) 代替被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。3035C48小時金黃色葡萄球菌枯草芽抱桿菌玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基白色念珠菌分別取各試驗菌懸液1ml（50100cfu），分 別注入無菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉 瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗困平仃制備 2個 平皿，混勻，凝固。同時，用對照培養(yǎng)基（玫瑰紅鈉瓊脂培 養(yǎng)基）代替被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。2328C72小時黑曲霉酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基白色念珠菌取試驗菌懸液1ml（50100cfu），分別注入無困平皿中，立即

5、傾注酵母浸出粉胨葡 萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗困平仃制備2 個平皿，混勻，凝固。同時，用對照培養(yǎng)基（酵母浸出粉胨葡 萄糖瓊脂培養(yǎng)基）代替被檢培養(yǎng)基進行 上述試驗。2328C72小時1.5結果判定若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基的菌落平均數(shù)的70%,且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。2控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查2.1適用范圍控制菌檢查用的培養(yǎng)基應進行培養(yǎng)基的適用性檢查，成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按 處方配制的培養(yǎng)基均應檢查。2.2菌種試驗用菌株的傳代數(shù)不得超過5代（從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術進行保存，以保

6、證試驗菌株的生物學特征。菌種編號大腸埃布困CMCC(B)44102金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003乙型副傷寒沙門菌CMCC(B)50094銅綠假單胞菌CMCC(B)10104生抱梭菌CMCC(B)64941白色念珠菌CMCC(F)980012.3菌液制備試驗菌株培養(yǎng)物的制備培養(yǎng)菌懸液的制備大腸埃布困分別接種新鮮培 養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯 培養(yǎng)基中或營養(yǎng) 瓊脂培養(yǎng)上。3035C1824小時分別取制備好的培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制備成含菌數(shù)為50100cfu/ml的 菌懸液。金黃色葡萄球菌乙型副傷寒沙門菌銅綠假單胞菌生抱梭菌接種新鮮培養(yǎng)物 至硫乙醇酸鹽流 體培養(yǎng)基中。2328C1824小時取制

7、備好的培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制備成含菌數(shù)為50100cfu/ml的菌懸 液。白色念珠菌接種新鮮培養(yǎng)物 至改良馬丁培養(yǎng) 基或改良馬丁瓊口匕拉H甘L脂培 口養(yǎng)基上。2328C2448小時取制備好的培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制備成含菌數(shù)為50100cfu/ml的菌懸 液。菌液制備在室溫卜放置應在2小時內使用，若保存在28C,可在24小時內使用。2.4適用性檢查控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查項包括促生長能力、抑制能力及指示能力的檢查。各 培養(yǎng)基 的檢測項目及所用菌株表1。表1控制菌檢查用培養(yǎng)基的促生長能力、抑制能力及指示能力檢查控制菌檢查培養(yǎng)基特性試驗菌株膽鹽乳糖培養(yǎng)基促生長能力大腸埃希菌

8、大腸埃希菌抑制能力金黃色葡糖球菌4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基促生長能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力大腸埃希菌乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基促生長能力大腸埃希菌大腸菌群抑制能力金黃色葡糖球菌乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基促生長能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力大腸埃希菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基促生長能力乙型副傷寒沙門菌四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基促生長能力乙型副傷寒沙門菌沙門菌抑制能力金黃色葡萄球菌膽鹽流乳瓊脂培養(yǎng)基或沙門、志賀菌屬瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力乙型副傷寒沙門菌曙紅亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力乙型副傷寒

9、沙門菌三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基指示能力乙型副傷寒沙門菌膽鹽乳糖培養(yǎng)基促生長能力銅綠假單胞菌抑制能力金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基促生長能力銅綠假單胞菌抑制能力大腸埃希菌綠膿菌素測定用培養(yǎng)基促生長能力+指示能力銅綠假單胞菌亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基促生長能力金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌抑制能力大腸埃希菌卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基或甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力金黃色葡萄球菌抑制能力大腸埃希菌梭菌梭菌增菌培養(yǎng)基促生長能力生抱梭菌哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基促生長能力生抱梭菌沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基促生長能力白色念珠菌沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基促生長能力+指示能力白色念珠菌白色念珠菌念珠菌顯色培養(yǎng)基促生長

10、能力+指示能力白色念珠菌抑制能力大腸埃希菌1%聚山梨酯80玉米瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力白色念珠菌2.5液體培養(yǎng)基促生長能力檢查分別接種不大于100cfu的試驗菌（表1）于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應控制 菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度（3035C ）及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。增菌培養(yǎng)基多為澄清液體培 養(yǎng)基，與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應生產良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁。 2.6固體培養(yǎng)基促生長能力檢查取試驗菌液各0.1ml （含菌數(shù)50100cfu）分別涂布與被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板 上，在相應控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度（3035C ）及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基 與對照培養(yǎng)基上生長的

11、菌落大小，形態(tài)特征應一致。2.7培養(yǎng)基抑制能力檢查接種不大于100cfu的試驗菌（表1）于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板上，取試驗菌 0.1ml菌懸液（不大于100cfu）分別涂布于固體被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基，在相應的控制 菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度（3035C）及最長時間下培養(yǎng)，試驗菌應不得生長。2.8固體培養(yǎng)基指示能力檢查取試驗菌各0.1ml （含菌數(shù)50100cfu）（表1）分別涂布與被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基 平板上，在相應控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度（3035C）及時間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基上試 驗菌生長的菌落大小，形態(tài)特征、指示反應情況等應與對照培養(yǎng)基一致。2.9液體培養(yǎng)基指示能力檢查分別接種不大于10

12、0cfu的試驗菌（表1）于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應控制 菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度（3035C ）及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)。對培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng) 基管試驗菌生長情況、指示劑反應等應對照培養(yǎng)基一致。2.10控制菌檢查用培養(yǎng)基能力測試列表（表 2）表2控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查項目、菌株及判斷指標培養(yǎng)基測試菌株測試特性測試指標膽鹽乳糖培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長能力渾濁銅綠假單胞菌渾濁金黃色葡糖球菌抑制能力未見渾濁MUG培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長能力渾濁大腸埃希菌指示能力366nm有熒光曙紅亞甲藍瓊脂或麥康凱瓊脂大腸埃希菌促生長能力回收率乙型副傷寒沙門菌回收率大腸埃希菌指示能力顏色形態(tài)同對照乙型副傷寒沙

13、門菌顏色形態(tài)同對照乳糖膽鹽發(fā)酵管大腸埃希菌促生長能力渾濁產氣金黃色葡糖球菌抑制能力未見渾濁乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長能力渾濁大腸埃希菌指示能力產氣營養(yǎng)肉湯乙型副傷寒沙門菌促生長能力渾濁金黃色葡糖球菌促生長能力渾濁四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基乙型副傷寒沙門菌促生長能力上清渾濁金黃色葡糖球菌抑制能力上清未見渾濁膽鹽流乳瓊脂或沙門、志賀菌屬瓊脂乙型副傷寒沙門菌促生長能力回收率乙型副傷寒沙門菌指示能力顏色形態(tài)同對照溴化十八烷基甲銨瓊脂銅綠假單胞菌促生長能力回收率大腸埃希菌抑制能力不得生長綠膿菌素測定用培養(yǎng)基銅綠假單胞菌促生長能力回收率銅綠假單胞菌指示能力顏色形態(tài)同對照亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基金黃色葡糖球菌促生長能力渾濁大腸埃希菌抑制能力未見渾濁卵黃氯化鈉瓊脂或甘露醇氯化鈉瓊脂金黃色葡糖球菌促生長能力回收率金黃色葡糖球菌指示能力顏色形態(tài)