影響血型鑒定常見的問題及處理方法

1、1 影響血型鑒定常見的問題及處理影響血型鑒定常見的問題及處理 方法方法 盧艷 2012.8.31 2 v準(zhǔn)確的血型鑒定是臨床安全有效輸血的重要 保證，使輸血的成分能在受著體內(nèi)有效存活， 無不良反應(yīng)，即輸入的紅細胞在受著體內(nèi)必 須不凝集不溶血，輸入的血漿成分不導(dǎo)致受 者自身紅細胞顯著破壞，才能使受者獲得恢 復(fù)健康所需的血液。 3 ABO定型試驗中常見的問題： 一、標(biāo)本問題 二、試劑問題 三、實驗者操作技術(shù)的錯誤 四、紅細胞標(biāo)本問題 五、血清標(biāo)本的問題 4 一、標(biāo)本問題一、標(biāo)本問題 血型鑒定血液標(biāo)本的嚴格要求是安全輸血的 關(guān)鍵性措施之一，首先對標(biāo)本進行科學(xué)管理， 確保標(biāo)本一一對應(yīng)防止“張冠李戴”。

2、 1.所用標(biāo)本要能夠恰當(dāng)反映受血者目前的 免疫學(xué)狀態(tài)。 v 2.受血者配血試驗的血標(biāo)本必須是輸血前3 天內(nèi)采集的。 v 3.如果受血者需要再次輸注紅細胞，尤其 是受血者最后一次輸注紅細胞間隔了24小時， 應(yīng)重新采集一份血樣進行交叉配血試驗，防 止新的不規(guī)則抗體產(chǎn)生。 5 二、試劑問題二、試劑問題 v 血型定型試劑是做好定型的基礎(chǔ)?，F(xiàn)在單克 隆試劑是通過雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的，其效價、 特異性、親和力都較人血清有很大進步，但 試劑的運輸、貯存等條件不適可導(dǎo)致試劑變 質(zhì)失效，造成鑒定錯誤。在實驗前進行試劑 外觀、效價等項目質(zhì)量控制。不同抗凝劑的 血液制備的標(biāo)準(zhǔn)紅細胞質(zhì)量也不同，各實驗 室依據(jù)要求正確配制

3、紅細胞濃度。 6 7 v2. 造成假陽性結(jié)果原因： 8 v1.患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型 的紅細胞，如骨髓移植患者，或非O型人接受 O型紅細胞。 v2. 某些ABO基因變異的個體或ABO亞型紅細胞， 一些白血病或其他惡性疾病患者的紅細胞ABO 抗原太弱，應(yīng)用抗A、抗B試劑未能出現(xiàn) 預(yù)期的凝集反應(yīng)。 9 v3.紅細胞獲得性或遺傳性的異常，如獲得性B 抗原紅細胞或Tn/T多凝集紅細胞，人血清抗 A、抗B試劑可能與這些異常的紅細胞反 應(yīng)。 v4.使用未洗滌的紅細胞標(biāo)本，其表面黏附的 血漿或血清中含針對抗A、抗B試劑中染 色劑或其他成分的抗體，出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。 10 v5.患者血清中有高

4、活性、高濃度冷自身抗體嚴重致 敏自身紅細胞，以至自發(fā)地發(fā)生凝集，而不是抗體 試劑的特異性免疫反應(yīng)所致。 6.紅細胞表面包被IgG類抗體 7.靜脈輸入高分子藥物如甘露醇、右旋糖酐等，可 導(dǎo)致紅細胞成緍錢狀。 11 五、血清標(biāo)本的問題 v1.纖維蛋白凝集的紅細胞凝塊被誤認為是血 液凝集，如使用血漿標(biāo)本或未完全去除纖維 蛋白的血清標(biāo)本時出現(xiàn)假陽性。 v2.免疫抑制疾病患者血清中ABO抗體減少或消 失。老年人ABO抗體減弱。 v3.新生兒6個月內(nèi)嬰兒血清中ABO抗體陰性 或很弱，一般只測正定不測反定。 12 v4.血清中不正常濃度和比例的蛋白質(zhì)成分或 高分子蛋白增多可引起非特異凝集，如緡錢 狀紅細胞的

5、非特異凝集。 v5.血清中含抗A、抗B以外的其他紅細胞 抗體，如抗M、抗I等。 v6.患者接受了ABO血型不同的骨髓移植。 13 v7.患者血清中含有針對紅細胞保護劑的抗體。 v8.ABO抗體被輸入的液體稀釋。 14 結(jié)果分析和處理的基本步驟 1.重新采集標(biāo)本，以避免采集、標(biāo)記、污染等 錯誤。 2.查詢患者臨床診斷、既往病史、輸血史、用 藥史、骨髓移植史。 3.徹底洗滌標(biāo)本或試劑紅細胞。 4.應(yīng)用抗AB、抗A1、或抗H檢測紅細胞。 15 5.分析抗篩結(jié)果，確定結(jié)果是否受同種異型或 自身冷抗體干擾。 6.室溫孵育30min后，離心觀察結(jié)果，以檢測弱 的抗原抗體反應(yīng)。 7. 做自身紅細胞做對照，以

6、確定自身抗體的干 擾。 16 ABO正反定不符的分類 一、抗原表達減弱或丟失所致的ABO正反定不符 二、紅細胞額外反應(yīng)所致的ABO正反定不符 三、意外的血清學(xué)反應(yīng)所致的ABO正反定不符 17 一、抗原表達減弱或丟失 所致的ABO正反定不符 v常見的原因： 1.ABO亞型紅細胞 2.白血病或其他惡性疾病患者的紅細胞ABO抗原 太弱，應(yīng)用抗A、抗B試劑未能出現(xiàn)預(yù)期 的凝集反應(yīng) 3.急性大出血 18 v處理的方法： 1.將抗A、抗B和抗A，B試劑與洗滌過的紅細胞 在室溫或4孵育30min，以增強抗原、抗體的結(jié)合。 2.用木瓜酶、菠蘿蛋白酶處理紅細胞，以增強抗原、 抗體的結(jié)合。 3.應(yīng)用抗AB、抗A1

7、、或抗H檢測紅細胞。 19 4.用人血清抗A、抗B進行吸收放散試驗， 檢測弱A、B抗原，且同時要做O型血吸收放散 試驗作對照。 20 二、紅細胞額外反應(yīng) 所致的ABO正反定不符 v常見的原因 1.獲得性B紅細胞（類B） 2.混合視野凝集(mf) 3.紅細胞被致敏 21 獲得性B紅細胞的特征 1.常出現(xiàn)在有腸道細菌進入血循環(huán)的疾病，也可發(fā)生 在正常人； 3.常伴有T和Tn多凝集紅細胞出現(xiàn)(細菌感染時)； 4.自身抗-B不與自身獲得性B抗原反應(yīng)(無自凝現(xiàn)象) 22 獲得性B紅細胞的鑒定 1.酸化血清抗-B試劑pH至6.0時，檢測無凝集，即不與 獲得性B細胞反應(yīng) 2.乙酸酐處理能明顯減弱其反應(yīng)，但正

8、常B細胞不受影 響 3.臨床追蹤，感染控制后“類B”現(xiàn)象消失 23 混合視野凝集 v1.非O型人近期輸用O型血； v2.骨髓移植后做血型； v3 A3(B3)細胞與抗A(抗-B)呈典型的混合視 野凝集現(xiàn)象； v4.雙精子受精（嵌合體） 24 紅細胞被致敏 v1.患HDN嬰兒、存在自身免疫或同種異體免 疫的成人，其紅細胞嚴重包被IgG抗體分子； v2.與含一定蛋白質(zhì)濃度的試劑（抗D、抗 A、抗B）產(chǎn)生凝集； v3.處理方法：45 放散后，抗體解離，即可 準(zhǔn)確定型； 25 三、意外的血清學(xué)反應(yīng)所致的ABO正 反定不符 常見的原因及處理方法： 1.抗體太弱或消失 如4-6個月幼兒，老年人、免疫抑制患

9、者，應(yīng)注意患 者的年齡和臨床診斷 2.非正常高濃度的抗A、抗B可引起前帶現(xiàn)象，導(dǎo) 致假陰性，將血清稀釋或用EDTA（2.5）處理可消 除； 26 3.A2、A2B或其他ABO亞型，人血清中可能有抗A1， 抗A1只凝集A1型紅細胞而不凝集A2、O型紅細胞； 4.患者靜脈輸用了大量大分子藥物等原因，可發(fā)生類 似凝集現(xiàn)象，如緡錢狀凝集， 將血清用生理鹽水稀 釋3倍或用鹽水替換技術(shù)可消除； 27 5.冷自身抗體 所有試劑及細胞37孵育,37下判讀結(jié)果; 將冷自身抗體在4吸收在做血型,將血 清用0.01mol/L 二硫蘇糖醇(DTT)處理完再定 型 ； 28 6.自身免疫性溫型抗體 正定被易被誤認為AB型，反定易被誤認為O型，用遞 增溫度(22，37，45)洗滌紅細胞后再做血型 鑒定 7.血清蛋白過高 試劑紅細胞多呈假凝集，如肝臟疾病、MM等，加鹽 水稀釋后凝集散開 29 Rh血型 1.導(dǎo)致Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陽性的原因 (1)直抗(DAT)陽性； (2)標(biāo)本抗凝不當(dāng)，受檢過程中出現(xiàn)凝血或出現(xiàn) 纖維蛋白凝塊，誤判為陽性； (3)受檢細胞與抗血清孵育的時間過長； (4)定型血清中含有事先未被檢測的其他特異性 抗體，造成假陽性定型結(jié)果； 30 v(5)多凝集細胞，造成定型的假陽性，如MM。 v(6)檢定用器