《抗氧化藥藥理》演示PPT

1、gj +100年 +放射生物學(xué)領(lǐng)域 潛水醫(yī)學(xué)領(lǐng)域SOD 缺血再灌注與自由基損傷腫瘤、免疫等 各種生命過程 +自由基： 損傷作用 信號作用 現(xiàn)代抗衰老研究的目標(biāo)不是將自由基徹底清除， 而是將自由基維持在一個適當(dāng)?shù)牡退剑S持氧 化和抗氧化防御之間的平衡。 一個原子或分子含有未成對電子，或是一個原子、分子或 離子子， 帶有一個單獨(dú)不成對的電子。即是自由基外層只 有一個子，因此急于抓取其他電子來穩(wěn)定自己，而破壞其 他分子 +大部分生物學(xué)和醫(yī)學(xué)所關(guān)心的自由基是由氧分子衍生而 +氧分子衍生之自由基也同樣應(yīng)用在以氮及碳分子為中心所 衍生出 之自由基 +O2e O-2（氧自由基；超氧化物） +自由基致線粒體

2、DNA突變 +自由基對呼吸鏈的損傷 +自由基對線粒體膜的損傷 +自由基破壞線粒體的鈣穩(wěn)態(tài) 已有公認(rèn) ,線粒體鈣穩(wěn)態(tài)的破壞是細(xì)胞壞死的最后共同通路。 +燒烤、抽煙、致癌物質(zhì)、環(huán)境的化學(xué)物質(zhì)、 氯化物、重金屬、酒精性飲料、抗癌藥物、 劇烈運(yùn)動等 +線粒體是細(xì)胞呼吸和氧化的中心，氧自由 基主要來源于線粒體呼吸鏈反應(yīng)，這里可 產(chǎn)生活細(xì)胞內(nèi)90%以上的自由基。 +自由基的種類繁多，其中，以超氧陰離子 自由基(O2)和羥自由基(OH)等氧自由基 最為重要 近年來經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)的清除氧自由基的藥物很多，如眾所 周知的維生素e、維生素a、維生素F 及丹參等，都能很好 地清除氧自由基，在臨床上也已得到廣泛的應(yīng)用。還

3、有 一些天然產(chǎn)物知母寧和蛋白類的化合物（金屬硫蛋白、 鈍頂螺旋藻藻膽蛋白）也具有較強(qiáng)的抗氧化能力。在 目前眾多的清除氧自由基的藥物中，以中草藥及其提取 成分的活性較強(qiáng)，在臨床的應(yīng)用也十分廣泛.因而在中草 藥中尋找高效無不良反應(yīng)的天然自由基清除劑的研究， 成為醫(yī)藥學(xué)活躍的研究領(lǐng)域 。某些具有氧自由基清除能 力的中草藥不僅可以治療與氧自由基增加而引起的有關(guān) 疾病，如癌癥、缺血: 再灌注損傷、輻射損傷，還 可通過清除氧自由基對面部色素沉積（ 如蝴蝶斑，黃褐 斑）有一定的療效。因此， 研究清除氧自由基的藥物及 其制劑不僅在臨床治療上有重大意義而且在化妝品及保 健食品的開發(fā)上具有較大的市場潛力。但在使用

4、的過程 中應(yīng)恰當(dāng)，否則利少弊多。 09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進(jìn)展 +抗氧化劑(antioxidants)： 分為兩類：-由體內(nèi)制造的抗氧化酵素 -由體外補(bǔ)充的抗氧化食物 + 體內(nèi)的抗氧化酵素，必須有有銅(Cu)鋅(Zn) 硒(Se)鐵(Fe)等的參與 +飲食中的抗氧化物質(zhì)：胡蘿卜素 +從飲食或營養(yǎng)補(bǔ)充品持續(xù)補(bǔ)充抗氧化劑和 營養(yǎng)素是必須的 09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進(jìn)展 +微量元素類 - 羧乙基鍺倍半氧化物（鍺-123） 電子自旋共振技術(shù)（ESR）和比色法 OH和O2 -硒-為含硒谷胱甘肽過氧化物酶 （GSH-Px）的活性部分 O2所致脂質(zhì)過氧化鏈鎖反 應(yīng) 克山病、肝癌及結(jié)腸癌的

5、預(yù)防。 -青絡(luò)鍺（Ge-M10）和青絡(luò)銅（Cu-M5） 抗癌藥的研發(fā) 09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進(jìn)展 +藥用天然化合物 -多糖類 -藻類多糖 ESR和自旋捕集技術(shù)， OH和O2 -菌類多糖 鄰苯三酚自氧化法測定 -其他植物多糖 金線蓮多糖 沙棘多糖 -黃酮類化合物 ESR自旋捕捉法和微量量熱法 實(shí)驗(yàn) +-酚類 單酚類與多酚類 抗衰老、心腦血 管 -萜類化合物及其甙 -人參總甙類 犬腎移植模型 -冬凌草甲素 OH和O2 抗癌 -蒽醌類化合物 蘆薈大黃素和蘆薈素 09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進(jìn)展 +藥用植物 -傘形科藥用植物 大都具有清除自由基 -馬齒莧 不同處理方法引起的馬齒莧水提

6、物對O2作用的差異， 使得馬齒莧的臨床應(yīng)用有所不同 -鮮花提取液 化學(xué)發(fā)光法 多數(shù)鮮花具有抗氧化活性，其中天竺葵、 春蘭、仙客來、萬壽菊等花瓣浸提液具有較強(qiáng)的清除OH 的活性 -其他的藥用植物 大黃， 丹參， 三七， 銀杏， 陳皮， 荷葉， 桑葉等 09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進(jìn)展 +酶類 -巴曲酶 蛇毒中提取的血栓素樣的蛋白酶，具有抗血栓作用 超氧陰離子自由基清除劑 -SOD 公認(rèn) 有效期很短，只有幾小時(shí)，且不易通過細(xì)胞膜 09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進(jìn)展 +化學(xué)合成藥 -吲達(dá)帕胺和維拉帕米 離體兔心灌注模型試驗(yàn)，設(shè)置吲達(dá)帕胺和維拉帕米組與對 照組 MDA下降，SOD增強(qiáng) - 4

7、-氧和4-羥四甲基哌啶氮氧自由基及 其衍生物 明顯的抗脂質(zhì)過氧化物 09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進(jìn)展 +特異性抗氧化 是用比較特異的抗氧化物質(zhì)來 阻斷那些主要損害機(jī)體的自由基，保留正?；蚝?的自由基的方法 +物質(zhì)的還原性不強(qiáng)，否則可能具有還原損傷效應(yīng)， 如維生素C +目前比較有前途的幾個是：尿酸、衣達(dá)拉豐（藥 物）、氫氣、FK106(免疫抑制藥物) +另外一個比較有前途的是啟動內(nèi)源性抗氧 化系統(tǒng)的方法，就是氧化反應(yīng)元件的激動 物，如硫氧化還原蛋白、GSH合成等，這些 物質(zhì)是體內(nèi)抗氧化最有效的系統(tǒng)，不需要 補(bǔ)充抗氧化物質(zhì)，就可以發(fā)揮作用，而且 不會造成過度抗氧化，實(shí)際上氧化還原最 重要的是

8、平衡 +許多天然化合物能激動這個途徑例如蘿卜 硫素、姜黃素，這些藥物具有非常好的抗 癌作用 +天然藥物抗氧化活性成分分離提取技術(shù)的發(fā)展 天然藥物有效成分的傳統(tǒng)提取方法為索氏萃取法 ( Soxhletextraction , SE) 缺點(diǎn)：局部過熱，溶液限制 新的液相色譜法的發(fā)展和應(yīng)用, 為有效成分的提取提供了 新的有利的方法。 如： +灌注色譜法可用于天然藥物中蛋白質(zhì)、肽類、酶類、低聚 糖類、生物堿類等的分離純化。 +高速逆流色譜法(Hsccc)用于生物堿類、黃酮類、萜類、木 脂素類、香豆素類及植物激素類等活性成分的分離提取 +目前多采用 微波輔助萃取法(MAE) 和 超 臨界流體萃取技術(shù)(

9、SFE) 。 MAESFE 分離提取快速, 與索氏 萃取法比較只需較少的 溶劑且得率較高 。 酚類化合物可以容易地 用MAE提取而得 最干凈的提取方法,萃 取和分離合二為一， 速度快，在接近常溫 的條件下操作，適合 于揮發(fā)性物質(zhì)的分離 +抗氧化活性的測定 -體外抗氧化活性 總的抗氧化能力 消除活性氧能力 -在體抗氧化作用 試劑盒 丙二醛含量可以反應(yīng)出體內(nèi)脂質(zhì)過氧化損傷 的水平。 +主要為三大類： 體外抗氧化模型 脂質(zhì)過氧化的抑制 清除各類活性氧、自由基能力的檢測方 法 氧化還原法 細(xì)胞損傷模型 H2O2 損傷細(xì)胞的體外模型 過氧化脂質(zhì)損傷細(xì)胞的體外模型建立 體內(nèi)抗氧化模型 07年，徐清萍等，抗

10、氧化劑抗氧化方法研究進(jìn)展 +以油脂為底物以油脂為底物： 加速氧化方法：烘箱法、活性氧加速法等 利用金屬離子、自由基引發(fā)劑 +氧化誘導(dǎo)期的指示方法能否客觀反映底物氧化 誘導(dǎo)期的結(jié)束，對評價(jià)抗氧化劑的活性非常關(guān)鍵。 方法：碘量法 硫氰酸亞鐵法 三價(jià)鐵離子與硫氰酸絡(luò)合 共軛二烯酸測定法 化學(xué)熒光法 增重法 養(yǎng)壓法 茴香胺反應(yīng)物法、克雷斯實(shí)驗(yàn)法、胡蘿卜素漂白法等 脂質(zhì)過氧化的抑制 07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進(jìn)展 +以亞油酸為底物 硫氰酸鐵法 硫代巴比妥酸法 -利用亞油酸氧化產(chǎn)生丙二醛和硫代巴比妥 酸反應(yīng)生成紅色物質(zhì)，在532 nm有吸收。 +卵磷脂氧化法 +亞油酸甲酯氧化法 +以鼠肝微粒

11、體為底物 脂質(zhì)過氧化的抑制 07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進(jìn)展 +清除羥自由基能力 產(chǎn)生羥自由基(OH)的體系有Fe EDTA一 抗壞血酸一H20 體系、Fe 一EDTAH20 體系、黃 嘌呤一黃嘌呤氧化酶一H 0 體系及紫外光照H 0 ， 光解產(chǎn)生OH等。 方法：二甲基亞砜法 DMSO 脫氧核糖核酸降解法 亞硝基二甲苯胺(NPA)漂白法 水楊酸法 高效液相電化學(xué)檢測法 茜素紫顯色法 清除各類活性氧、自由基能力的檢 測方法 07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進(jìn)展 +檢測清除H202 能力的方法 +清除過氧自由基能力的檢測方法 過氧自由基(RO )包括水溶性RO 和脂溶性 RO

12、RO 可使順式十八碳四烯酸脂質(zhì)過氧化，測定熒光 強(qiáng)度(于324 nm激發(fā)，412 nm處釋放)可了解脂質(zhì)過氧化的情況， 推測受試物清除RO 的情況。 + 超氧陰離子自由基清除能力的測定 鄰苯三酚 蛋氨酸 鄰苯三酚法可通過測定鄰苯三酚的自氧化速率來確定待測 物的抑制作用 + 清除二苯代苦味?；杂苫芰Φ臋z測方 法 +ABTs方法 2，2一連氮一雙一(3一乙基苯 并噻唑啉一6一磺酸 清除各類活性氧、自由基能力的檢 測方法 07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進(jìn)展 +受試物直接清除自由基能力的檢測除以上 介紹的方法外，受試物對各類自由基的清 除作用還可用電子順磁共振(ESR)法。用 ESR測試

13、得到自旋加合物的電子自旋共振圖 譜，得知受試物對自旋加合物信號強(qiáng)度的 影響，從而了解受試物對自由基的清除情 況 07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進(jìn)展 +FRAP assay(Ferric Reducing Ability of plasma)：血漿 高鐵還原能力分析能力 +原理：實(shí)質(zhì)是基于氧化還原反應(yīng)的比色法 在低pH值的溶液中，F(xiàn)e3+ 一TPTZ(Fe 3+一三吡啶三嗪)被 抗氧化劑還原成Fe 2+一TPTz，溶液變成深藍(lán)色，并且在593 nm處有最大光吸收。 +其他體外測定抗氧化活性的方法還有利用Cu2- Fenton反應(yīng)， P標(biāo)記檢測DNA的氧化損傷法，SPME法 監(jiān)測脂質(zhì)過氧

14、化系統(tǒng)中產(chǎn)生的揮發(fā)性羰基類化合物 來評價(jià)抗氧化活性法等。 體外抗氧化模型體外抗氧化模型 氧化還原法 07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進(jìn)展 +H202 損傷細(xì)胞的體外模型 H202培養(yǎng)液 MTT法觀察細(xì)胞損傷及藥物對細(xì)胞損傷的保護(hù)作用 + 過氧化脂質(zhì)損傷細(xì)胞的體外模型建立 過氧化脂質(zhì)tBuOOH、NDE (2，4一nonadiena1) 07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進(jìn)展 +用受試物連續(xù)喂飼大鼠或小鼠1個月3個月， 然后處死動物，測定其血或組織(如肝、腦)中 MDA、單胺氧化酶(MAOB)及抗氧化酶SOD、 谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)及過氧化氫酶 (CAT)，同對照組比較

15、，若MDA、MAOB降 低，SOD、GSHPx、CAT等升高，則說明受 試物具有抗氧化能力。 07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進(jìn)展 +體外篩選具有抗氧化活性的物質(zhì)可通過體 內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。 +體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)是比較靈敏，周期較長， 成本較大，實(shí)驗(yàn)比較繁瑣，不如體外實(shí)驗(yàn) 簡易方便，但卻是目前最準(zhǔn)確、可信度最 高的抗氧化劑的篩選方法。 +天然抗氧化活性物質(zhì)篩選對促進(jìn)抗衰老、 防癌和心血管系統(tǒng)疾病的保健食品、藥品 的開發(fā)具有積極作用。 07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進(jìn)展 +在化學(xué)工作者用實(shí)驗(yàn)方法檢測某一類抗氧 化劑抗氧化能力的基礎(chǔ)上，根據(jù)所得的數(shù) 據(jù)，以計(jì)算機(jī)軟件為工具用量子化學(xué)模

16、擬 計(jì)算，確定抗氧化劑的構(gòu)效關(guān)系，開創(chuàng)了 用量子化學(xué)理論研究抗氧化劑能力的新路 +可以對抗氧化劑的活性進(jìn)行預(yù)測，且有可 能在理論上構(gòu)造出新的活性更高的抗氧化 劑，進(jìn)而加速抗氧化劑的合成與篩選 不同病人清除藥物的固有能力是不同的 v一位具有迅速代謝藥物能力的人，為獲得 適宜的治療濃度，可能需要更高的劑量、 更頻繁地給藥 v一位代謝能力緩慢的病人，為避免發(fā)生毒 性反應(yīng)，可能需要較低的劑量和較少的給 藥次數(shù) v對于安全范圍較窄的藥物尤為重要 認(rèn)識和闡明藥物反應(yīng)個體和群體間差異的 發(fā)生機(jī)制，提高藥物治療效果 闡明遺傳在機(jī)體對藥物和外源性物質(zhì)反 應(yīng)個體變異中的作用 從生物化學(xué)、藥理學(xué)、遺傳學(xué)和基因組學(xué)

17、多學(xué)科研究與藥物反應(yīng)有關(guān)的蛋白質(zhì)和相 關(guān)基因，闡明決定藥物反應(yīng)個體差異的根 本機(jī)制 藥物代謝酶藥物代謝酶 受體受體 遺傳多態(tài)性遺傳多態(tài)性 藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體 1.人群調(diào)查人群調(diào)查 在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)某些個體（病人）對藥在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)某些個體（病人）對藥 物產(chǎn)生異常藥物反應(yīng)或代謝的基礎(chǔ)上進(jìn)行物產(chǎn)生異常藥物反應(yīng)或代謝的基礎(chǔ)上進(jìn)行 人群調(diào)查研究，可初步確定個體或種族間人群調(diào)查研究，可初步確定個體或種族間 差異是否存在遺傳因素的影響。差異是否存在遺傳因素的影響。 2.雙生子法(twin method) 單卵雙生(monozygotic twin) 二卵雙生(dizygotic twin) v同卵雙生子(monozygotic twin, MZ)具有相同的 基因組，差異由母體宮內(nèi)或出生后的環(huán)境 因素所致，該差異可作為環(huán)境對表型變異 影響的量度 v異卵雙生子(dizygotic twin, DZ) 遺傳特征不盡 相同，但因有