聚氰基丙烯酸正丁酯納米載體促進(jìn)紫杉醇?？鼓z質(zhì)瘤作用實(shí)驗(yàn)研究.doc

1、聚氰基丙烯酸正丁酯納米載體促進(jìn)紫杉醇?？鼓z質(zhì)瘤作用實(shí)驗(yàn)研究 摘要：目的 紫杉醇-聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒對(duì)鼠腦膠質(zhì)瘤進(jìn)行了局部緩釋化療，觀察其對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系抑瘤作用。方法 將80只wistar雌性大鼠隨機(jī)分成分為對(duì)照組（無血清1640），pbca+np組，紫杉醇組及紫杉醇+pbca+np組（20只/組）。結(jié)果 pbca+np組和紫杉醇組瘤均重分別為對(duì)照組的（82.11.7）%和（49.83.1）%，其中尤以聯(lián)合組腫瘤受抑最為顯著，其瘤均重僅為對(duì)照組（38，02.1）%。結(jié)論 紫杉醇-聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒進(jìn)行化療可有效抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。 關(guān)鍵詞：腦膠質(zhì)瘤：立體定向技術(shù)；紫杉醇-聚氰

2、基丙烯酸正丁酯納米粒 紫杉醇（paclitaxel，簡(jiǎn)稱ptx）是從短葉紅豆杉（taxus brevifolia）穩(wěn)定微管防止微管解聚及調(diào)節(jié)信號(hào)傳導(dǎo)的雙重作用機(jī)理而成為又一類新型抗腫瘤藥物1，對(duì)治療多種腫瘤有效；被用作一線廣譜抗癌藥物2。然而，由于紫杉醇資源匱乏，水溶性低，難以通過血腦屏障等，使其在臨床上的應(yīng)用受到很大程度的限制。為增加ptx的溶解度，降低毒副作用，采用靶向給藥和控緩釋技術(shù)來改善ptx的給藥方式和療效是目前研究的熱點(diǎn)。 1資料與方法 1.1紫杉醇-聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒（藥物-pbca-np）的制備 稱取300mg dextran-70置燒杯中，加蒸餾水?dāng)嚢枞芙猓?.01mo

3、l/l的鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph值至3.0，定容至50ml。于室溫、電磁攪拌下緩緩加入-bca 0.5ml（使?jié)舛葹?%），攪拌4h，以0.1mol/l的氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph至8.5，即得紫杉醇-pbca-np膠體溶液。 1.2人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株shg-44和細(xì)胞培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞株shg-44，蘇州醫(yī)學(xué)院取材于額葉星形膠質(zhì)瘤2-3級(jí)的患者，經(jīng)原代培養(yǎng)形成穩(wěn)定人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系.本實(shí)驗(yàn)的瘤株購于中國科學(xué)院上海細(xì)胞研究所。 1.3流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率 將shg-44細(xì)胞（5105）接種于6孔培養(yǎng)皿，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)空白對(duì)照，單用pbca+np及單用紫杉醇（濃度為100 nmol/l）為單藥對(duì)照組，及聯(lián)合藥物組，細(xì)胞培養(yǎng)

4、24 h后，經(jīng)消化離心后，將細(xì)胞濃度調(diào)至1l072 x 107/ml。將100l細(xì)胞懸液中加人新鮮配制4%多聚甲醛100以固定30min。pbs漂洗1次，用rnase（50 mg/l）作用30min，以碘化丙錠（60 mg/l）綜合染液染色30 min后，經(jīng)流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)，每組重復(fù)3組上樣，檢測(cè)凋亡率。 1.4構(gòu)建荷瘤wistar雌性大鼠及動(dòng)物試驗(yàn) 在無菌操作臺(tái)中按無菌手術(shù)原則操作，四肢固定后，均用0.2 ml腫瘤細(xì)胞懸液應(yīng)用立體定向技術(shù)成功建立了shg-44鼠膠質(zhì)細(xì)胞移植模型。觀察wistar雌性大鼠精神狀態(tài)，活動(dòng)，飲食，待成瘤后（約3w）將80只瘤鼠隨機(jī)分成分為對(duì)照組（無血清1640），p

5、bca+np組，紫杉醇組及紫杉醇+pbca+np組（20只/組）。給藥方式為尾靜脈注射（2 mg/kg體重，以無血清1640稀釋），紫杉醇采用腹腔注射（2 mg/kg體重），1次/d，共5次；對(duì)照組為局部注射等容無血清1640，配合腹腔注射等容生理鹽水。于治療結(jié)束14 d后后處死菏瘤wistar雌性大鼠，切除腫瘤，去除脂肪組織，稱重. 1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 成瘤大小、流式細(xì)胞儀結(jié)果等以（xs）表示，以spss軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 2結(jié)果 2.2流式細(xì)胞儀方法分析細(xì)胞的凋亡率 藥物作用細(xì)胞24 h后，細(xì)胞周期分析顯示，紫杉醇對(duì)shg-44膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有抑制作用。紫杉醇+pbca+np對(duì)shg-44膠

6、質(zhì)瘤細(xì)胞具有抑制作用。凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。 2.2荷瘤wistar雌性大鼠生存狀態(tài)及移植瘤生長(zhǎng)抑制 各組wistar雌性大鼠在治療觀察期內(nèi)均存活，成瘤后wistar雌性大鼠體重相繼略減輕，其中對(duì)照組最為明顯，活動(dòng)少，反應(yīng)稍遲鈍。wistar雌性大鼠成瘤后，經(jīng)5次治療后，對(duì)照組腫瘤仍持續(xù)生長(zhǎng)外，各治療組生長(zhǎng)趨緩，質(zhì)地稍硬。治療結(jié)束10 d時(shí)，瘤體已明顯小于對(duì)照組，pbca+np組和紫杉醇組瘤均重分別為對(duì)照組的（82.11.7）%和（49.83.1）%，其中尤以聯(lián)合組腫瘤受抑最為顯著，其瘤均重僅為對(duì)照組（38，02.1）%，抑瘤率（i r）顯著高于各單獨(dú)處理組. 3討論 腦質(zhì)瘤多

7、浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，手術(shù)很難將顱內(nèi)侵襲灶完全切除，膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)在所難免，且復(fù)發(fā)部位多在腫瘤原位及鄰近，因此局部治療最大限度殺傷腫瘤細(xì)胞成為膠質(zhì)瘤綜合治療中重要得環(huán)節(jié)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，在實(shí)驗(yàn)室條件下，應(yīng)用立體定向技術(shù)成功建立了shg-44鼠膠質(zhì)細(xì)胞移植模型，經(jīng)mri影像、大體解剖和組織病理學(xué)證實(shí)，膠質(zhì)瘤發(fā)病部位恒定，大小、形態(tài)相似，成功率高。較好的復(fù)制了膠質(zhì)瘤的生物特性，因此該模型是較穩(wěn)定的理想動(dòng)物模型，為探索膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制及實(shí)驗(yàn)性治療向臨床過渡提供有效的研究手段。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：紫杉醇-聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒緩釋膜片可延長(zhǎng)wistar雌性大鼠的生存期，明顯抑制腫瘤的生長(zhǎng)，使腫瘤的體積增長(zhǎng)緩慢甚至縮小.這表明載藥紫杉醇+pbca+np提高了藥物的穩(wěn)定性，延長(zhǎng)了藥物作用時(shí)間，使腫瘤局部長(zhǎng)時(shí)間維持較高的藥物濃度殺死腫瘤細(xì)胞。為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。提示具有臨床開發(fā)應(yīng)用前景. 參考文獻(xiàn)： 1lhch a，oieda b，colom