SDSPAGE所有詳細(xì)試劑配方.doc

1、SDS-PAGE30% 聚丙烯酰胺溶液 -30% （w/v）Acrylamide【組分濃度】各種組分名稱配制不同體積所需各成分的體積(mL) 或質(zhì)量 (g)30%Acr-Bis(29:1)1000ml100ml29%Acrylamide(丙烯酰胺 )290g29g1%BIS( N,N-亞甲丙烯酰胺 )10g1g【配制方法】將 29 克丙烯酰胺和1 克 N,N-亞甲丙烯酰胺溶于總體積為60ml 溫?zé)幔?37 左右 ）的去離子水中，充分?jǐn)嚢枞芙猓a(bǔ)加水至終體積為100ml 。0.45 m 微孔濾膜過濾除菌和雜質(zhì)，儲(chǔ)于棕色瓶， 4 避光（用鋁箔紙包扎起來）保存。嚴(yán)格核實(shí)PH 不得超過 7.0 ，因可

2、以發(fā)生脫氨基反應(yīng)是光催化或堿催化的。使用期不得超過兩個(gè)月，隔幾個(gè)月須重新配制。如有沉淀，可以過濾?！颈４鏃l件】4避光（用鋁箔紙包扎起來）保存【注意事項(xiàng)】丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可通過皮膚吸收，其作用具有累積性。稱量丙烯酰胺和N,N-亞甲丙烯酰胺時(shí)應(yīng)戴手套和面具?？烧J(rèn)為聚丙烯酰胺無毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)樗€可能含有少量未聚合材料。1MTris-HCL （ pH6.8 ） (濃縮膠 buffer)【組分濃度】 1MTris-HCL名稱用量備注Tris12.1g去離子水80ml濃鹽酸9ml(36% 的濃鹽酸 ) 預(yù)實(shí)驗(yàn)已確定去離子水加入去離子水定容至100ml 后，室溫保存【配制方法】稱量 1

3、21.1gTris堿溶于 800mL 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?，?.7mL的濃 HCL 調(diào)節(jié)所需要的pH值（ 7.4- 大約 0.7mL ，7.6- 大約 0.6mL ， 8.0- 大約 0.42mL ），將溶液定容至1L ，高溫高壓滅菌后，室溫保存。應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值，因?yàn)?Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大， 溫度每升高 1，溶液的 pH 值大約降低 0.03 個(gè)單位?！颈４鏃l件】室溫保存?！咀⒁馐马?xiàng)】對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。1.5MTris-HCL （ pH8.8 ） (分離膠 buffer)【組分濃度】 1.5MTris-HCL名稱用量備注Tri

4、s18.17g去離子水80ml濃鹽酸3ml(36% 的濃鹽酸 ) 預(yù)實(shí)驗(yàn)已確定去離子水加入去離子水定容至 100ml 后，室溫保存【配制方法】 1L稱量181.7gTris堿溶于800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙猓訚釮CL調(diào)節(jié)所需要的pH值 =8.8 ，將溶液定容至1L ，高溫高壓滅菌后， 室溫保存。（ 1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀釋到100ml終體積。過濾后4 0C 保存。）【保存條件】室溫保存【注意事項(xiàng)】應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值，因?yàn)?Tris 溶液的 pH 值隨溫度的變化差異很大， 溫度每升高

5、 1，溶液的 pH 值大約降低 0.03 個(gè)單位。10% 十二烷基硫酸鈉 SDS 溶液 -10%(w/v)SDS【組分濃度】 10%(w/v)SDS名稱用量備注SDS10g去離子水80ml加入去離子水定容至100ml 后，室溫保存【配制方法】稱取 2g高純度的 SDS 置于 100200ml燒杯中，加入約 16ml 的去離子水， 68 加熱溶解，滴加濃鹽酸調(diào)節(jié) PH 至 7.2 ，定容至20ml 后，室溫保存【保存條件】室溫保存【注意事項(xiàng)】對(duì)人體有害，請(qǐng)注意防護(hù)。10% 過硫酸銨溶液 -10%(w/v)AP【組分濃度】 10%(w/v)過硫酸銨名稱用量備注過硫酸銨0.1g去離子水1ml現(xiàn)配現(xiàn)用

6、【配制方法】稱取 0.1g過硫酸銨置于1.5ml 離心管，加 1mL 去離子水吹打溶解， 4保存【保存條件】4保存【注意事項(xiàng)】10% 過硫酸銨溶液在4保存時(shí)，可使用2 周左右，超過期限會(huì)失去催化作用5Tris- 甘氨酸電泳緩沖液 - 5Tris-Glycine buffer（SDS-PAGE電泳緩沖液）【組分濃度】各種組分名稱配制不同體積所需各成分的體積 (mL) 或質(zhì)量 (g)1000ml500ml0.125M Tris15.1g1.25M glycine( 甘氨酸 )94.0g0.5%(W/V)SDS5.0g【配制方法】稱取 15.1gTris ，94.0g甘氨酸（ glycine ），

7、5.0gSDS ，用 800ml蒸餾水或去離子水溶解，充分?jǐn)嚢枞芙?，定容?000ml ，室溫保存。得0.125mol/L Tris-1.25mol/L 甘氨酸電極緩沖液。臨用前稀釋5 倍。【保存條件】室溫保存，兩年有效?！咀⒁馐马?xiàng)】配制好的電泳液使用時(shí)間不宜超過兩周。電泳緩沖液可以回收，回收后可再使用1-2 次，但為了取得最佳的電泳效果，應(yīng)使用新電泳液。5 SDS-PAGE 加樣緩沖液 - 5SDS-PAGE Loading Buffer【組分濃度】 0.25MTris-HCL(pH6.8)；10%(W/V)SDS；0.5%(W/V) BPB(溴酚藍(lán) )；50%(V/V)甘油；5%(W/V)

8、 -巰基乙醇 (2-ME)各種組分名稱配制不同體積所需各成分的體積(mL) 或質(zhì)量 (g)5ml3ml1MTris-HCL(pH6.8)1.25mlSDS0.5gBPB( 溴酚藍(lán) )25mg甘油2.5ml（ 0.5mL/ 份）分裝，室溫保存，使用前加25 L2-ME/小份，保存一個(gè)月左右。-巰基乙醇(2-ME)0.25ml【配制方法】量取1.25mL 1MTris-HCL（ pH6.8 ）， 0.5g SDS， 25mg BPB，2.5mL甘油，置于10mL塑料離心管中，加去離子水溶解后，定容至5mL ，小份（0.5mL/份）分裝，于室溫保存。使用前將25 L的2-ME加入到每小份中。加入2-ME 的 Loading Buffer可在室溫下保存一個(gè)月左右?！颈４鏃l件】-20 保存，至少一年有效?！咀⒁馐马?xiàng)】SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液 (5X) 中含少量DTT 和巰基乙醇，有輕微刺激性氣味，必須完全溶解后再使用。摘自 Takara商品目錄 - 實(shí)驗(yàn)室常規(guī)試劑配制方法TEMED 原液直接使用考馬斯亮藍(lán) R-250 染色液【組分濃度】 0.1%(w/v)考馬斯亮藍(lán) R-250 ， 25%(v/v) 異丙醇， 10%(v/v) 冰醋酸各種組分名稱配制不同體積所需各成分的體積(mL) 或質(zhì)量 (g)1000ml400ml備注考馬斯亮藍(lán) R-2501.0g0.4g異丙醇250