第四章-藥物的定量分析與分析方法的驗(yàn)證

1、第四章 藥物定量分析與 分析方法驗(yàn)證 藥物分析教研室 定量分析樣品的前處理方法 1 定量分析方法的特點(diǎn) 2 藥物分析方法的驗(yàn)證 3 生物樣品分析方法的基本要求 4 Pretreatment of sample used in quantitative analysis 一、概述一、概述 含鹵素藥物 CX 乙烯型鹵和芳鹵 CH2CH XX 烯丙型鹵和芐鹵 CH2XCH2CH CH2X 鹵代烷型CH2CH (CH2)nX n2 鹵素活潑性 IBrClF 分子中所含鹵原子的個(gè)數(shù)越多，活潑性越強(qiáng)；同一碳上含多個(gè)分子中所含鹵原子的個(gè)數(shù)越多，活潑性越強(qiáng)；同一碳上含多個(gè) 鹵原子或一個(gè)苯環(huán)上含多個(gè)鹵原子時(shí)，活

2、潑性增強(qiáng)更加明顯鹵原子或一個(gè)苯環(huán)上含多個(gè)鹵原子時(shí)，活潑性增強(qiáng)更加明顯 CCH3 OH CH3 CCl3 CCl3Cl3C 三氯叔丁醇 六氯對(duì)二甲苯 COOH II I NHCOCH3CH3CONH 泛影酸 COOH II I CONHCH3CH3CONH 碘他拉酸 不經(jīng)有 機(jī)破壞 經(jīng)有機(jī) 破壞 直接測(cè)定 配位滴定法 氧化還原滴定法 水解后測(cè)定 堿水解 酸水解 經(jīng)還原分解后測(cè)定 濕法破壞凱氏定氮法 干法破壞 高溫灼燒法 氧瓶燃燒法 ( (一一) )、直接測(cè)定法、直接測(cè)定法 葡萄糖酸鈣葡萄糖酸鈣 EDTAEDTA配位滴定配位滴定 富馬酸亞鐵富馬酸亞鐵 鄰二氮菲鄰二氮菲- -硫酸鈰滴定硫酸鈰滴定 葡

3、萄酸銻鈉葡萄酸銻鈉 間接碘量法間接碘量法 ( (二二) )、經(jīng)水解后測(cè)定法、經(jīng)水解后測(cè)定法 適用范圍：金屬原子不直接于碳原子相連或某些C- M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物。 1 1、堿水解法、堿水解法 3443 3 233 4)( NONHAgSCNSCNNHAgNO NaNOAgClAgNONaCl O2HHCOONa3NaClCO)(CHNaOHOHCHCCCl 3 223 回回流流 三氯叔丁醇 銀量法 返滴定 2 2、酸水解法、酸水解法 適用范圍：含鹵素有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不 牢固的藥物。 十一烯酸氯化鋅十一烯酸鋅 稀鹽酸 EDTA配位滴定 ( (三三) )、經(jīng)還原分解后測(cè)定法、經(jīng)還

4、原分解后測(cè)定法 適用范圍：碘原子直接與芳環(huán)連接的含碘有機(jī)化合物。 COOH I I I NHCOCH3CH3COHN + 11NaOH+ COOH NH2 H2N + + 2CH3COONa +3Na2ZnO2 + NaI+AgNO3 AgI 3Zn 3 NaOH 3H2O + NaNO3 回流 三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 含氮、硫、硫柳汞、氯化鈉的生物制品、含氮有機(jī)合 成藥物測(cè)定的前處理和生物制品中金屬元素測(cè)定時(shí)生物 基質(zhì)的去除。 u H2SO4-HNO3 u H2SO4-HClO4 u H2SO4-H2SO4 u HNO3-KMnO4 分解劑/消化劑 輔助分解劑 凱氏

5、定氮法 測(cè)定含有氨基和酰胺結(jié)測(cè)定含有氨基和酰胺結(jié) 構(gòu)的藥物結(jié)構(gòu)構(gòu)的藥物結(jié)構(gòu) ( (一一) )濕法破壞濕法破壞 原 理 將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子 中有機(jī)結(jié)構(gòu)被中有機(jī)結(jié)構(gòu)被“消化消化”成成COCO2 2和和H H2 2O O，有機(jī)結(jié)合的氮轉(zhuǎn)，有機(jī)結(jié)合的氮轉(zhuǎn) 化為無(wú)機(jī)氮，與過量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨，化為無(wú)機(jī)氮，與過量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨， 經(jīng)堿化后釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或經(jīng)堿化后釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或 定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。 n

6、常量法含氮量 2530mg n 半微量法含氮量 1.02.0mg 凱氏燒瓶 K2SO4( (提高消解溫度提高消解溫度) ) CuSO4( (加快消解速度加快消解速度) ) 硫酸硫酸 堿液堿液 硼酸硼酸( (吸收液吸收液) ) 甲基紅甲基紅- -溴甲酚綠指示劑溴甲酚綠指示劑 硫酸滴定 空白校正 ( (二二) )干法破壞干法破壞 1.高溫灼燒法高溫灼燒法 用于含鹵素、含磷藥物和藥物中砷鹽的檢查。 常加入無(wú)水碳酸鈉、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。 2.氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法 系指將含有待測(cè)元素的有機(jī)藥物置于充滿氧氣的密系指將含有待測(cè)元素的有機(jī)藥物置于充滿氧氣的密 閉的密閉的燃燒瓶中充分燃燒，使有

7、機(jī)結(jié)構(gòu)部分徹底閉的密閉的燃燒瓶中充分燃燒，使有機(jī)結(jié)構(gòu)部分徹底 分解為分解為COCO2 2和和H H2 2O O，待測(cè)元素根據(jù)電負(fù)性的不同轉(zhuǎn)化為不，待測(cè)元素根據(jù)電負(fù)性的不同轉(zhuǎn)化為不 同價(jià)態(tài)的氧化物，被吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐校俑鶕?jù)同價(jià)態(tài)的氧化物，被吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，再根?jù) 其性質(zhì)和存在方式選擇方法進(jìn)行分析。其性質(zhì)和存在方式選擇方法進(jìn)行分析。 有機(jī)藥物 含P 吸收液測(cè)定方法 茜素氟藍(lán)分光光度法(pH 4.3 HAc-NaAc Buffer) H2O 含F(xiàn) 含Br銀量法；分光法 銀量法；汞量法；分光法NaOH溶液含Cl 磷鉬藍(lán)比色法 銀量法；碘量法；汞量 法；分光法 NaOH-硫酸肼飽和液含I H

8、2O2NaOH溶液 NaOH-硫酸肼飽和液 H2O 示例 碘苯酯的含量測(cè)定 取本品約取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有，精密稱定，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有 機(jī)破壞，用機(jī)破壞，用NaOH T.S. 2ml與與H2O 10ml為吸收液，待為吸收液，待 吸收完全后，加吸收完全后，加溴醋酸溴醋酸溶液溶液10 ml，密塞，振搖放置數(shù)，密塞，振搖放置數(shù) 分鐘，加分鐘，加甲酸甲酸約約1ml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約 35min，以除去剩余的溴蒸氣，加，以除去剩余的溴蒸氣，加KI 2g，密塞，搖勻，密塞，搖勻， 用用Na2S2O3液液 ( (0.02mol/L) )滴定

9、，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉 指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空 白試驗(yàn)校正。白試驗(yàn)校正。每每1ml1ml的硫代鈉液的硫代鈉液( (0.02mol/L) )相當(dāng)于相當(dāng)于 1.388mg的C19H29IO2。 C19H29IO2分子量為分子量為 416.34 2HIO3+10KI+10CH3COOH6I2 I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6 C19H29IO2 6 Na2S2O3 滴定度(T)=416.341/60.02=1.338 (mg) 一、容量分析方法一、容量分析方法 1.滴定度滴定度 每1ml規(guī)定濃度

10、的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物濃度。 dDcCbBaA 被測(cè)藥物被測(cè)藥物 滴定液滴定液 ABA B B A M b a nM bM W W ABB M b a Vm M b a m)ml/mg(T %100 W FTV (%) 含量 規(guī)定摩爾濃度 實(shí)際摩爾濃度 F %100 W FT)VV( (%) 0 含量 示例一 Vc的含量測(cè)定 碘量法測(cè)定Vc含量M(C6H6O6)=176.13， C(I2)=0.05mol/L HI2OHCIOHC 6662686 示例二 異煙肼的含量測(cè)定 溴酸鉀法測(cè)定異煙肼含量M(C6H7N3O)=137.14， C溴酸鉀 溴酸鉀=0.01667mol/L OH3KBr2N

11、3NOHC3KBrO2ONHC3 222563376 示例三 葡萄糖酸銻鈉的含量測(cè)定 0.3g供試品供試品水水100ml鹽酸鹽酸15ml碘化鉀試液碘化鉀試液10ml 密塞，振搖后暗處放置密塞，振搖后暗處放置10min碘量法碘量法 2 64 2 322 2 35 OSI2OS2I ISbI2Sb Sb5+2S2O32- 示例四 司可巴比妥鈉的含量測(cè)定 取本品約取本品約0.1g，精密稱定精密稱定，置，置250ml碘瓶中，加水碘瓶中，加水 10ml，振搖使溶解，振搖使溶解，精密加溴滴定液精密加溴滴定液( (0.05mol/L) ) 25ml，再加鹽酸，再加鹽酸5ml，立即密塞，并振搖，立即密塞，并振

12、搖1min，在暗，在暗 處放置處放置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml， 立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液( (0.1mol/L) ) 滴定，至終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消滴定，至終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消 失，并將滴定得的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。失，并將滴定得的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。 M=260.23 司可巴比妥司可巴比妥溴溴=1:1 W=0.1022 g； F=1.038 ； V=15.73ml V0 =23.21 習(xí)題一 剩余碘量法測(cè)定異煙肼含量 異煙肼在弱堿性溶液中，加定量過量的碘滴定液

13、異煙肼在弱堿性溶液中，加定量過量的碘滴定液(0.1mol/L)氧氧 化，反應(yīng)完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸鈉滴定液化，反應(yīng)完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸鈉滴定液 (0.1mol/L)滴定滴定( (以淀粉為指示劑以淀粉為指示劑) )。 N CONHNH2 +2I2+ 5NaHCO3 COOH +N2 + 4 NaI+ 5CO2 +4 H2O I 2 + 2 Na2S2O3 + 2 NaI Na2S4O6 100 429. 3.: 322 W T)FV-F(V % (mg/ml)14134 4 1 0.1T 14OSNa 322322 2 2 OSNaOSNaII 含量含量 ：異煙肼異

14、煙肼 習(xí)題二 非那西丁含量測(cè)定 精密稱取本品精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流加稀鹽酸回流1小時(shí)后，放冷，小時(shí)后，放冷， 用亞硝酸鈉液用亞硝酸鈉液（0.1010mol/L）滴定，用去滴定，用去20.00ml。 每每1ml1ml亞硝酸鈉液亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當(dāng)于相當(dāng)于17.92mg的的 C10H13O2N，請(qǐng)計(jì)算非那西丁的含量。，請(qǐng)計(jì)算非那西丁的含量。 %72.99100 10003630.0 1 .0 1010.0 00.2092.17 % 非那西丁 二、光譜分析法二、光譜分析法 ( (一一) )紫外紫外- -可見分光光度法可見分光光度法 ECL T l lgA u 儀器校正

15、u 空白溶劑校正 u 吸收峰波長(zhǎng)確定 u A(0.30.7) 含量測(cè)定方法 1.對(duì)照品比較法 R R x x C A A C %100 W DVC %100(%) X 稱樣量 測(cè)得量 含量原料藥 制劑%100(%) 標(biāo)示量稱樣量 平均裝量測(cè)得量 含量 %100 BW WDVCX 2.吸收系數(shù)法 100E A C %1 cm1 x x 習(xí)題一 維生素B2含量測(cè)定 取本品取本品75mg，精密稱定，置燒杯中，加冰醋酸，精密稱定，置燒杯中，加冰醋酸 1ml與水與水75ml，加熱溶解后，加水稀釋，放冷，移置，加熱溶解后，加水稀釋，放冷，移置 500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻；精密量取量瓶中，加水稀

16、釋至刻度，混勻；精密量取10ml， 置置100ml量瓶中，加量瓶中，加1.4%醋酸鈉溶液醋酸鈉溶液7ml，并用水稀釋，并用水稀釋 至刻度，搖勻，照分光光度法在至刻度，搖勻，照分光光度法在444nm的波長(zhǎng)處測(cè)吸收的波長(zhǎng)處測(cè)吸收 度，按維生素度，按維生素B2B2的吸收系數(shù)的吸收系數(shù) 為為323計(jì)算計(jì)算 1% 1cm E 100 10 100 500 10011075 100 D 1001w % 3 323 A E A x 1% 1cm x 含量 3.計(jì)算分光光度法 4.比色法 特點(diǎn)： 靈敏度高，可達(dá)靈敏度高，可達(dá)1010-10 -10 1010-12 -12g/ml g/ml 要求低濃度下測(cè)定要求

17、低濃度下測(cè)定 須做空白測(cè)定須做空白測(cè)定 熒光弱的藥物可衍生化后測(cè)定熒光弱的藥物可衍生化后測(cè)定 ( (二二) )熒光分析法熒光分析法 r b rr xbx x C RR RR C ( (三三) )色譜分析法色譜分析法 1.HPLC 示例一 炔諾酮的含量測(cè)定 照高效液相色譜法照高效液相色譜法( (附錄附錄DD測(cè)定測(cè)定) ) 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用用十八烷基硅烷鍵合硅膠十八烷基硅烷鍵合硅膠為為 填充劑；以甲醇填充劑；以甲醇- -水水(65:35)(65:35)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為244nm244nm。理理 論塔板數(shù)論塔板數(shù)按炔諾酮峰計(jì)算不低于按炔諾酮

18、峰計(jì)算不低于15001500，炔諾酮峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，炔諾酮峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì) 峰的峰的分離度分離度及主成分峰后一雜質(zhì)峰與主成分峰的分離度均應(yīng)及主成分峰后一雜質(zhì)峰與主成分峰的分離度均應(yīng) 符合要求。符合要求。 內(nèi)標(biāo)溶液的制備內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取黃體酮約取黃體酮約25mg25mg，精密稱定，置，精密稱定，置25ml25ml量瓶量瓶 中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。 測(cè)定法測(cè)定法 取本品約取本品約25mg25mg，精密稱定，置，精密稱定，置25ml25ml量瓶中，加甲醇溶解并量瓶中，加甲醇溶解并 稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液2ml2ml與內(nèi)標(biāo)溶液與內(nèi)標(biāo)

19、溶液3ml3ml，置，置10ml10ml 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取2020l l注入液相色譜儀，記注入液相色譜儀，記 錄色譜儀，記錄色譜圖；另取炔諾酮對(duì)照品適量，精密稱定，同錄色譜儀，記錄色譜圖；另取炔諾酮對(duì)照品適量，精密稱定，同 法測(cè)定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。法測(cè)定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。 對(duì)照品 對(duì)照品 樣品 測(cè)得量W A/ A/A r rs s A 2.GC 示例 松節(jié)油的含量測(cè)定 照氣相色譜法照氣相色譜法( (附錄附錄 E E測(cè)定測(cè)定) ) 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用聚乙二醇用聚乙二醇(PEG)-20M(

20、PEG)-20M為固定相，為固定相， 涂布密度為涂布密度為20%20%；柱溫為；柱溫為9090C。理論塔板數(shù)按。理論塔板數(shù)按- -蒎烯峰計(jì)算應(yīng)蒎烯峰計(jì)算應(yīng) 低于低于15001500。 校正因子測(cè)定校正因子測(cè)定 取正丁醇適量，精密稱定，加石油醚取正丁醇適量，精密稱定，加石油醚(30(306060C)C) 制成每制成每1ml1ml含含20mg20mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取- -蒎烯對(duì)照品約蒎烯對(duì)照品約 30mg30mg，精密稱定，置，精密稱定，置10ml10ml棕色量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液棕色量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml2ml，加，加 石油醚石油醚(30(30606

21、0C)C)至刻度，搖勻，吸取至刻度，搖勻，吸取1 1l l注入氣相色譜儀，計(jì)注入氣相色譜儀，計(jì) 算校正因子。算校正因子。 測(cè)定法測(cè)定法 取本品約取本品約35mg35mg，精密稱定，置，精密稱定，置10ml10ml棕色量瓶中，精密加入棕色量瓶中，精密加入 內(nèi)標(biāo)溶液內(nèi)標(biāo)溶液2ml2ml，用石油醚，用石油醚(30(306060C)C)溶解并稀釋至刻度，搖勻，溶解并稀釋至刻度，搖勻， 吸取吸取1 1l l注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品含本品含- -蒎烯蒎烯(C(C10 10H H1616) )不得少于 不得少于70%70%。 RR ss C/A C/A f 校正因子 S

22、 S x x C/A A f)C(含量 藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則 藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則 緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則 微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則 目的： 證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求 效能指標(biāo)： 評(píng)價(jià)分析方法的尺度評(píng)價(jià)分析方法的尺度 效能指標(biāo)包括: 精密度精密度, , 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度, , 檢測(cè)限檢測(cè)限, ,定量限定量限, ,選擇性選擇性, , 線性與線性與 范圍范圍, , 耐用性耐用性 一、準(zhǔn)確度（一、準(zhǔn)確度（accuracy） 系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度。 ( (一一

23、) )含量測(cè)定方法含量測(cè)定方法 %100(%) %100(%) 加入量 本底量測(cè)得量 回收率 加入量 測(cè)得量 回收率 回收率(Recovery) 回收試驗(yàn) 加樣回收試驗(yàn) 33，至少9 個(gè)測(cè)定結(jié)果 二、精密度二、精密度(Precision) 系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取 樣測(cè)定所得結(jié)果之接近的程度。 表示：偏差(d)、標(biāo)準(zhǔn)偏差(s),、 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD) 重復(fù)性: 同一實(shí)驗(yàn)室,同一人多次測(cè)定的精密度 中間精密度: 同一實(shí)驗(yàn)室，不同人，不同儀器測(cè)定的精密度 重現(xiàn)性: 不同實(shí)驗(yàn)室，不同人測(cè)定的精密度 三、專屬性三、專屬性(Specificity) v 指有其他成分（雜質(zhì)、

24、降解物、輔料等）可能存在情況下采 用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。 目視法 信噪比法 S/N=3 四、檢測(cè)限四、檢測(cè)限(Limit of Detection, LOD) 藥物能被檢出的最低濃度(g/ml) 五、定量限五、定量限(Limit of Quantitation, LOQ) 藥物能被定量測(cè)定的最低濃度(g/ml) 信噪比法 S/N=10 影響因素：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，流動(dòng)相的組成和pH，商品 柱的品牌，柱溫等 六、線性與范圍六、線性與范圍(Linearity And Range) v待測(cè)結(jié)果(響應(yīng)值)與試樣中被測(cè)物的濃度或量直接成正比關(guān) 系的程度。 Y=a+bx （r=0.9999)

25、七、耐用性七、耐用性(Robustness) 測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響程度 準(zhǔn)確度 精密度 重復(fù)性 中間精 密度 專屬性 檢測(cè)限 定量限 線性/ 范圍 耐用性 鑒別 雜質(zhì)定量 雜質(zhì)限度 含量測(cè)定 溶出量測(cè)定 檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容 已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度 如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充 視具體情況予以驗(yàn)證 各種含量測(cè)定方法對(duì)效能指標(biāo)的要求 1. 容量分析法 用原料藥精制品用原料藥精制品( (含量含量 99.5 %) )或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ幕驅(qū)φ掌房疾旆椒ǖ?精密度，精密度，RSD 0.2 % ；回收率一般在；回收率一般在99.7100.3 % 之間之間。 2.

26、UV法 用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測(cè)定，其用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測(cè)定，其RSD1% 。制劑。制劑 的測(cè)定，回收率一般應(yīng)在的測(cè)定，回收率一般應(yīng)在98102之間之間。 3. HPLC法 要求要求RSD2，回收率回收率98102 %之間之間。 一、常用樣品的種類、采集和貯藏一、常用樣品的種類、采集和貯藏 ( (一一) )血樣血樣 血漿 (plasma) 血清 (serum) 全血 ( (二二) )唾液唾液 ( (三三) )尿液尿液 用于藥物劑量回收、尿清除率、生物利用度，藥 物代謝物及其代謝途徑、類型、速率等的研究；臨床上 用于判斷患者是否違反醫(yī)囑用藥。 二、生物樣品分析前處理技術(shù)二、生物樣品分析前處理

27、技術(shù) 全血/血漿，組織 (1)蛋白沉淀 (2)調(diào)節(jié)pH 選擇性溶劑提取 RIA 殘?jiān)?化學(xué)衍生化(提取烴基化) 堿回提酸回提 HPLC UV、FLD、ECD TLC分光光度法 UV、FLD GC FID ECD N/P-FID GC-MS 蛋白質(zhì) 的去除 加入與水混融的有機(jī)溶劑加入與水混融的有機(jī)溶劑( (乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃) ) 加入中性鹽加入中性鹽( (飽和硫酸銨、硫酸鈉、枸櫞酸鹽飽和硫酸銨、硫酸鈉、枸櫞酸鹽) ) 加入強(qiáng)酸加入強(qiáng)酸( (三氯醋酸、高氯酸、偏磷酸三氯醋酸、高氯酸、偏磷酸) ) 加入金屬沉淀劑加入金屬沉淀劑( (CuSOCuSO4 4-Na-Na2 2WOWO4 4、ZnSOZnSO4 4-NaOH-NaOH) ) 綴合物的水解 酸水解酸水解( (鹽酸鹽酸) ) 酶水解酶水解( (葡糖酸苷酶、硫酸酯酶、枯草菌溶素葡糖酸苷酶、硫酸酯酶、枯草菌溶素) ) 有機(jī)破壞 ( (硝酸硝酸- -高氯酸消化高氯酸消化) ) 分離、純化 與濃集 液液- -液萃取法液萃取法 (Liquid-Liquid