蛋白質(zhì)變性與沉淀PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1 蛋白質(zhì)變性與沉淀蛋白質(zhì)變性與沉淀 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 1.掌握蛋白質(zhì)變性與沉淀掌握蛋白質(zhì)變性與沉淀 的原理及各種沉淀方法；的原理及各種沉淀方法； 2.2.熟悉刻度吸量管的正確熟悉刻度吸量管的正確 使用；使用； 3.3.了解蛋白質(zhì)變性與沉淀了解蛋白質(zhì)變性與沉淀 兩者的關(guān)系。兩者的關(guān)系。 第1頁/共19頁 第2頁/共19頁 第3頁/共19頁 （二）蛋白質(zhì)變性原理（二）蛋白質(zhì)變性原理 蛋白質(zhì)受某些物理或化學(xué)因蛋白質(zhì)受某些物理或化學(xué)因 素的影響，空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變素的影響，空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變 ，生物活性喪失。稱為蛋白質(zhì)，生物活性喪失。稱為蛋白質(zhì) 變性。變性。 蛋白質(zhì)變性，分可逆；不可

2、逆。蛋白質(zhì)變性，分可逆；不可逆。 第4頁/共19頁 三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 1.儀器 試管、刻度吸量管、洗耳球等。 2.試劑 5蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)溶液、溶液、 2.5蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 溶液、溶液、10ZnSO4溶液、溶液、 o.1mol/LNaOH、 1三氯醋酸、無 水乙醇、NaCl（固體） 第5頁/共19頁 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟操作步驟 1.1.重金屬鹽及有機(jī)酸類沉淀蛋白質(zhì)重金屬鹽及有機(jī)酸類沉淀蛋白質(zhì) 2.2.乙醇沉淀蛋白質(zhì)乙醇沉淀蛋白質(zhì) （一）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 （二）（二）操作步驟操作步驟 第6頁/共19頁 1.1.重金屬鹽及有機(jī)酸類沉淀蛋白質(zhì)重金屬鹽及有機(jī)酸類沉

3、淀蛋白質(zhì) 1 1）實(shí)驗(yàn)原理）實(shí)驗(yàn)原理 COO- NH3+ P OH- H+ 重金屬離子M+ 酸根X- COO- NH2 P COOH NH3+ P COO-M+ NH2 P COO H NH3+X- P pH pI pI 兩性離子兩性離子 負(fù)電荷負(fù)電荷 正電荷正電荷 鹽鹽 鹽鹽 第7頁/共19頁 2）操作步驟操作步驟 試劑（滴）試劑（滴）試管試管1 1試管試管2 2試管試管3 3 5%蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液2D2D2D 0.1mol/L NaOH2D 10% ZnSO420D20D 1%三氯醋酸三氯醋酸20D 現(xiàn)象現(xiàn)象 3 3）觀察、記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，并解釋之。）觀察、記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，并解釋之。 第8

4、頁/共19頁 結(jié)構(gòu)記錄 試劑（滴）試劑（滴）試管試管1 1試管試管2 2試管試管3 3 5%5%蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液2D2D2D 0.1mol/L NaOH 2D 10% ZnSO420D20D 1%1%三氯醋酸三氯醋酸20D 現(xiàn)象現(xiàn)象 沉淀沉淀 沉淀沉淀 澄清澄清 第9頁/共19頁 第10頁/共19頁 2. 2. 乙醇沉淀蛋白質(zhì)乙醇沉淀蛋白質(zhì) 1 1）實(shí)驗(yàn)原理）實(shí)驗(yàn)原理 乙醇溶解于水，破壞蛋乙醇溶解于水，破壞蛋 白質(zhì)分子的水化膜，加入少量白質(zhì)分子的水化膜，加入少量 中性鹽抑制蛋白質(zhì)的解離，使中性鹽抑制蛋白質(zhì)的解離，使 電荷減少，沉淀更完全。電荷減少，沉淀更完全。 第11頁/共19頁 2）操作

5、步驟操作步驟 試劑（試劑（mL）試管試管1 1試管試管2 2 2.5%蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 溶液溶液 0.5 mL0.5 mL 結(jié)晶結(jié)晶NaCl數(shù)粒（適量）數(shù)粒（適量） 無水無水乙醇乙醇1mL1mL 現(xiàn)象現(xiàn)象 3）觀察、記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，并解釋之。觀察、記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，并解釋之。 第12頁/共19頁 結(jié)果記錄結(jié)果記錄 試劑試劑試管試管1試管試管2 2.5%蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 溶液溶液 0.5 mL0.5 mL 結(jié)晶結(jié)晶NaCl 數(shù)粒（適數(shù)粒（適 量）量） 無水乙醇無水乙醇1mL1mL 現(xiàn)象現(xiàn)象 沉淀沉淀沉淀充分沉淀充分 第13頁/共19頁 第14頁/共19頁 五、注意事項(xiàng)五、注意事項(xiàng) 1.1.試劑瓶滴管不能交叉使

6、用，否則試劑瓶滴管不能交叉使用，否則 污染試劑。污染試劑。 2.2.刻度吸量管不能交叉使用，否則刻度吸量管不能交叉使用，否則 污染試劑，影響反應(yīng)現(xiàn)象。污染試劑，影響反應(yīng)現(xiàn)象。 3. 3. 做完實(shí)驗(yàn)把把試劑按原樣擺放做完實(shí)驗(yàn)把把試劑按原樣擺放 ，試管和，試管和刻度吸量管沖刻度吸量管沖洗干凈，桌面擦洗干凈，桌面擦 干凈，登記簽名。干凈，登記簽名。 4.4.值日生聽老師安排，認(rèn)真打掃，值日生聽老師安排，認(rèn)真打掃， 經(jīng)老師批準(zhǔn)才能離開實(shí)驗(yàn)室。經(jīng)老師批準(zhǔn)才能離開實(shí)驗(yàn)室。 第15頁/共19頁 六、思考題六、思考題 1.1.臨床搶救重金屬中毒患者，臨床搶救重金屬中毒患者， 為什么用雞蛋清或牛奶？為什么用雞蛋清或牛奶？ 2.2.蛋白液中加入適量乙醇，為蛋白液中加入適量乙醇，為 什么會(huì)產(chǎn)生沉淀？什么會(huì)產(chǎn)生沉淀？ 3.3.蛋白液在堿性條件下加入蛋白液在堿性條件下加入 ZnSO4 ，為什么會(huì)產(chǎn)生沉淀？，為什么會(huì)產(chǎn)生沉淀？ 4.4.蛋白液中加入三氯醋酸蛋白液中加入三氯醋酸 ， 為什么會(huì)產(chǎn)生沉淀？為什么會(huì)產(chǎn)生沉淀？ 第16頁/共19頁 下次實(shí)驗(yàn)：下次實(shí)驗(yàn)： P74頁頁 激活劑及抑制劑對(duì)酶活性的影激活劑及抑制劑對(duì)酶活性的影 響響 實(shí)驗(yàn)報(bào)告明天交，請(qǐng)組長(zhǎng)負(fù)起實(shí)驗(yàn)報(bào)告明天交，請(qǐng)組長(zhǎng)負(fù)起 責(zé)任。謝謝同學(xué)們配合！責(zé)任。謝謝同學(xué)們配合！ 第17頁/共